本文關鍵詞：基于微流控芯片技術研究肺癌細胞EMT發(fā)生前后對成骨細胞的影響

  更多相關文章： 微流控芯片 共培養(yǎng) 微環(huán)境 骨轉移

【摘要】：目的:應用微流控芯片技術,構建一個人肺腺癌細胞A549、成纖維細胞WI38及人成骨細胞h FOB共培養(yǎng)模型。研究成纖維細胞WI38對肺癌細胞A549發(fā)生EMT的促進作用,以及發(fā)生EMT的A549細胞對h FOB細胞表達RANKL蛋白的影響(RANKL可促進破骨細胞成熟),進而比較A549細胞發(fā)生EMT前后影響成骨細胞h FOB該蛋白表達的差異,為臨床干預腫瘤細胞EMT發(fā)生及緩解肺癌骨轉移引起的溶骨性癥狀提供治療參考。方法:應用微流控芯片技術,構建一個共培養(yǎng)平臺,芯片結構包括微通道,細胞培養(yǎng)室,進液孔與出液孔。在芯片中分別培養(yǎng)包括肺腺癌細胞A549、成纖維細胞WI38、成骨細胞h FOB在內的3種細胞系。實驗對象共分為3組,分別為對照組:h FOB單獨培養(yǎng),實驗組1:A549與人類成骨細胞h FOB共培養(yǎng)以及實驗組2:發(fā)生EMT的A549與h FOB共培養(yǎng)。通過免疫熒光方法分別檢測對照組、實驗組1、實驗組2中人類成骨細胞h FOB膜蛋白RANKL的表達差異,并通過常規(guī)Transwell侵襲實驗、Western blot檢測對芯片結果進行驗證。結果:1.將腫瘤細胞細胞A549與成纖維細胞WI38共培養(yǎng)后,可見A549發(fā)生EMT轉化。相關蛋白如E-Cadherin表達降低、Snail表達升高。Transwell實驗結果顯示,發(fā)生EMT的A549侵襲能力增強。2.將發(fā)生EMT的A549與成骨細胞h FOB共培養(yǎng),E-Cadherein與Snail表達降低。Transwell實驗證明細胞具有向靶器官侵襲能力。3.將對照組、實驗組1、實驗組2分別提取蛋白,行Western blot檢測成骨細胞RANKL蛋白,結果顯示A549細胞發(fā)生EMT前后均可使成骨細胞RANKL表達升高。結論:本實驗通過微流控芯片技術,成功建立細胞共培養(yǎng)體系,模擬了腫瘤微環(huán)境中成纖維細胞WI38對肺癌細胞A549的促EMT作用,并比較了A549發(fā)生EMT前后對成骨細胞h FOB的影響,從而證實A549細胞發(fā)生EMT前后均有促進溶骨性改變的能力。實驗為臨床研究肺癌骨轉移或其他腫瘤的靶器官轉移提供了新的方法,同時為預防及治療腫瘤侵襲、轉移提供體外實驗依據。
【關鍵詞】：微流控芯片 共培養(yǎng) 微環(huán)境 骨轉移
【學位授予單位】：大連醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R734.2
【目錄】：

• 中文摘要7-8
• 英文摘要8-10
• 前言10-12
• 材料和方法12-20
• 1. 材料12-14
• 1.1 細胞系12
• 1.2 主要試劑及配置12-13
• 1.3 相關儀器13-14
• 2. 方法14-20
• 2.1 微流控芯片細胞培養(yǎng)平臺的構建14-15
• 2.2 細胞的常規(guī)復蘇、培養(yǎng)、傳代及凍存15-16
• 2.3 微流控芯片中細胞的培養(yǎng)16
• 2.4 微流控芯片平臺免疫熒光檢測16-17
• 2.5 Transwell平臺細胞共培養(yǎng)17
• 2.6 Transwell侵襲實驗17-18
• 2.7 Western blot實驗18-20
• 2.8 統(tǒng)計學分析20
• 結果20-26
• 1. 微流控芯片構建20-21
• 2. 芯片平臺研究肺癌細胞EMT前后對成骨細胞的影響21-23
• 3. 常規(guī)平臺研究肺癌細胞EMT前后對成骨細胞的影響23-26
• 結論26
• 討論26-28
• 病例分析28-29
• 參考文獻29-31
• 綜述31-36
• 參考文獻34-36
• 致謝36-37

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本文編號：1008872