本文關(guān)鍵詞：基于微流控芯片技術(shù)研究肺癌細(xì)胞EMT發(fā)生前后對(duì)成骨細(xì)胞的影響

  更多相關(guān)文章： 微流控芯片 共培養(yǎng) 微環(huán)境 骨轉(zhuǎn)移

【摘要】：目的:應(yīng)用微流控芯片技術(shù),構(gòu)建一個(gè)人肺腺癌細(xì)胞A549、成纖維細(xì)胞WI38及人成骨細(xì)胞h FOB共培養(yǎng)模型。研究成纖維細(xì)胞WI38對(duì)肺癌細(xì)胞A549發(fā)生EMT的促進(jìn)作用,以及發(fā)生EMT的A549細(xì)胞對(duì)h FOB細(xì)胞表達(dá)RANKL蛋白的影響(RANKL可促進(jìn)破骨細(xì)胞成熟),進(jìn)而比較A549細(xì)胞發(fā)生EMT前后影響成骨細(xì)胞h FOB該蛋白表達(dá)的差異,為臨床干預(yù)腫瘤細(xì)胞EMT發(fā)生及緩解肺癌骨轉(zhuǎn)移引起的溶骨性癥狀提供治療參考。方法:應(yīng)用微流控芯片技術(shù),構(gòu)建一個(gè)共培養(yǎng)平臺(tái),芯片結(jié)構(gòu)包括微通道,細(xì)胞培養(yǎng)室,進(jìn)液孔與出液孔。在芯片中分別培養(yǎng)包括肺腺癌細(xì)胞A549、成纖維細(xì)胞WI38、成骨細(xì)胞h FOB在內(nèi)的3種細(xì)胞系。實(shí)驗(yàn)對(duì)象共分為3組,分別為對(duì)照組:h FOB單獨(dú)培養(yǎng),實(shí)驗(yàn)組1:A549與人類成骨細(xì)胞h FOB共培養(yǎng)以及實(shí)驗(yàn)組2:發(fā)生EMT的A549與h FOB共培養(yǎng)。通過免疫熒光方法分別檢測(cè)對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組1、實(shí)驗(yàn)組2中人類成骨細(xì)胞h FOB膜蛋白R(shí)ANKL的表達(dá)差異,并通過常規(guī)Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)、Western blot檢測(cè)對(duì)芯片結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果:1.將腫瘤細(xì)胞細(xì)胞A549與成纖維細(xì)胞WI38共培養(yǎng)后,可見A549發(fā)生EMT轉(zhuǎn)化。相關(guān)蛋白如E-Cadherin表達(dá)降低、Snail表達(dá)升高。Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,發(fā)生EMT的A549侵襲能力增強(qiáng)。2.將發(fā)生EMT的A549與成骨細(xì)胞h FOB共培養(yǎng),E-Cadherein與Snail表達(dá)降低。Transwell實(shí)驗(yàn)證明細(xì)胞具有向靶器官侵襲能力。3.將對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組1、實(shí)驗(yàn)組2分別提取蛋白,行Western blot檢測(cè)成骨細(xì)胞RANKL蛋白,結(jié)果顯示A549細(xì)胞發(fā)生EMT前后均可使成骨細(xì)胞RANKL表達(dá)升高。結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)通過微流控芯片技術(shù),成功建立細(xì)胞共培養(yǎng)體系,模擬了腫瘤微環(huán)境中成纖維細(xì)胞WI38對(duì)肺癌細(xì)胞A549的促EMT作用,并比較了A549發(fā)生EMT前后對(duì)成骨細(xì)胞h FOB的影響,從而證實(shí)A549細(xì)胞發(fā)生EMT前后均有促進(jìn)溶骨性改變的能力。實(shí)驗(yàn)為臨床研究肺癌骨轉(zhuǎn)移或其他腫瘤的靶器官轉(zhuǎn)移提供了新的方法,同時(shí)為預(yù)防及治療腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移提供體外實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：微流控芯片 共培養(yǎng) 微環(huán)境 骨轉(zhuǎn)移
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R734.2
【目錄】：

• 中文摘要7-8
• 英文摘要8-10
• 前言10-12
• 材料和方法12-20
• 1. 材料12-14
• 1.1 細(xì)胞系12
• 1.2 主要試劑及配置12-13
• 1.3 相關(guān)儀器13-14
• 2. 方法14-20
• 2.1 微流控芯片細(xì)胞培養(yǎng)平臺(tái)的構(gòu)建14-15
• 2.2 細(xì)胞的常規(guī)復(fù)蘇、培養(yǎng)、傳代及凍存15-16
• 2.3 微流控芯片中細(xì)胞的培養(yǎng)16
• 2.4 微流控芯片平臺(tái)免疫熒光檢測(cè)16-17
• 2.5 Transwell平臺(tái)細(xì)胞共培養(yǎng)17
• 2.6 Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)17-18
• 2.7 Western blot實(shí)驗(yàn)18-20
• 2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析20
• 結(jié)果20-26
• 1. 微流控芯片構(gòu)建20-21
• 2. 芯片平臺(tái)研究肺癌細(xì)胞EMT前后對(duì)成骨細(xì)胞的影響21-23
• 3. 常規(guī)平臺(tái)研究肺癌細(xì)胞EMT前后對(duì)成骨細(xì)胞的影響23-26
• 結(jié)論26
• 討論26-28
• 病例分析28-29
• 參考文獻(xiàn)29-31
• 綜述31-36
• 參考文獻(xiàn)34-36
• 致謝36-37

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