本文關(guān)鍵詞：重組MUC1-MBP融合蛋白配伍不同佐劑的抗腫瘤作用研究

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【摘要】：Mucin1（MUC1）屬于粘蛋白家族中的跨膜糖蛋白，，是腫瘤抗原典型的代表之一。MUC1由于在惡性腫瘤組織中與在正常組織中呈現(xiàn)顯著差異，而成為腫瘤治療的理想靶點。目前，關(guān)于MUC1的研究大部分處于Ⅰ-Ⅱ期臨床試驗階段，少部分已經(jīng)進入Ⅲ期臨床。本課題組自2001年開始從事以MUC1為靶點的腫瘤疫苗研究，將MUC1基因與大腸桿菌麥芽糖結(jié)合蛋白（MBP）偶聯(lián)，在大腸桿菌中成功表達該基因，制備出MUC1-MBP融合蛋白用于抗腫瘤疫苗的開發(fā)，在動物實驗中取得了良好效果。但由于MUC1-MBP蛋白疫苗單獨誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答并不強烈，因此，尋找與之配伍的合適佐劑，優(yōu)化該疫苗的功能，以誘導(dǎo)出特別是以Th1型免疫應(yīng)答為代表的安全、持久、足夠有效的抗腫瘤免疫應(yīng)答是非常必要的。在前期研究中，本研究組將卡介苗（BCG）作為佐劑同時注射，在動物實驗中刺激免疫活性效果較好。但是BCG本身是一種活菌苗，活性不穩(wěn)定性，另外還存在細胞毒性等弊端，如注射后導(dǎo)致了小鼠體重下降和局部組織壞死。因此，尋找一種更為安全有效的疫苗佐劑是我們目前要解決的問題。 本研究通過研究室常規(guī)方法成功制備出高純度、內(nèi)毒素合格的重組MUC1-MBP融合蛋白，將其分別聯(lián)合佐劑CpG-ODN1585、CpG-ODN1826、CpG-ODN2006、BCG（卡介苗BCG）、胸腺肽α1、R848免疫小鼠，之后種植轉(zhuǎn)染MUC1基因的B16黑色素瘤細胞，通過預(yù)防性抗腫瘤模型觀察配伍不同佐劑后的抗腫瘤作用。研究發(fā)現(xiàn)，在本次篩選的6種佐劑中，聯(lián)合佐劑CpG-ODN1826明顯延長了小鼠生存期，對腫瘤生長的抑制效果最好。隨后，在細胞水平和分子水平上分別檢測免疫學(xué)活性，檢測指標包括：MUC1特異性淋巴細胞增殖指數(shù)、MUC1特異細胞因子分泌、T淋巴細胞亞群分析等。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，配伍其他的佐劑在誘導(dǎo)Th1型應(yīng)答程度上各不相同，以配伍CpG-ODN1826后誘導(dǎo)的Th1免疫應(yīng)答傾向最明顯。 本研究提示CpG-ODN作為MUC1-MBP融合蛋白疫苗佐劑的開發(fā)價值，為進一步MUC1-MBP融合蛋白抗腫瘤疫苗的制劑研究奠定基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：腫瘤疫苗 重組MUC1-MBP融合蛋白 佐劑 免疫活性 腫瘤模型
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R73-36
【目錄】：

• 內(nèi)容提要4-5
• 中文摘要5-8
• Abstract8-15
• 英文縮略詞15-16
• 第1章 文獻回顧16-28
• 1.1 MUC1 的分子生物學(xué)17-18
• 1.1.1 MUC1 的表達17
• 1.1.2 MUC1 的結(jié)構(gòu)17
• 1.1.3 MUC1 的分布17-18
• 1.1.4 MUC1 的生物學(xué)意義18
• 1.2 以 MUC1 為靶點的腫瘤疫苗18-21
• 1.2.1 在匹茲堡大學(xué)進行的 MUC1 疫苗試驗（1993 年-2014 年）19-20
• 1.2.2 其他 MUC1 疫苗試驗20-21
• 1.2.2.1 乳腺癌20
• 1.2.2.2 肺癌20
• 1.2.2.3 胰腺癌20-21
• 1.2.2.4 前列腺癌21
• 1.2.2.5 卵巢癌21
• 1.2.2.6 腎癌21
• 1.3 疫苗佐劑的分類及研究進展21-26
• 1.3.1 佐劑的簡介21-22
• 1.3.2 佐劑的作用及作用機制22
• 1.3.3 理想佐劑的必備條件22
• 1.3.4 腫瘤疫苗佐劑22-26
• 1.4 本課題研究內(nèi)容26-28
• 第2章 MUC1-MBP 融合蛋白的制備與鑒定28-39
• 2.1 實驗材料28-29
• 2.1.1 菌株28
• 2.1.2 主要試劑28
• 2.1.3 主要儀器及耗材28-29
• 2.2 實驗方法29-36
• 2.2.1 主要溶液配制29-31
• 2.2.2 MUC1-MBP 融合蛋白的制備31-36
• 2.3 實驗結(jié)果36-39
• 2.3.1 MUC1-MBP 融合蛋白的制備與鑒定36-39
• 第3章 MUC1-MBP 融合蛋白配伍不同佐劑的抗腫瘤作用39-50
• 3.1 實驗材料39-40
• 3.1.1 細胞株39
• 3.1.2 實驗動物39
• 3.1.3 實驗試劑39
• 3.1.4 抗原和佐劑39-40
• 3.2 實驗方法40-44
• 3.2.1 主要溶液配制40-41
• 3.2.2 B16-MUC1 細胞的復(fù)蘇41
• 3.2.3 B16-MUC1 細胞的傳代培養(yǎng)41-42
• 3.2.4 B16-MUC1 細胞的鑒定42-43
• 3.2.5 預(yù)防性腫瘤模型的建立43-44
• 3.2.6 統(tǒng)計學(xué)分析44
• 3.3 實驗結(jié)果44-50
• 3.3.1 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染人全長 MUC1 的 B16-MUC1 的培養(yǎng)與鑒定44-45
• 3.3.2 預(yù)防性抗腫瘤模型的建立及效果分析45-50
• 3.3.2.1 預(yù)防性腫瘤模型的建立45-46
• 3.3.2.2 腫瘤抑制效果46-48
• 3.3.2.3 動物生存期48-50
• 第4章 MUC1-MBP 融合蛋白配伍不同佐劑的免疫學(xué)活性50-67
• 4.1 實驗材料50-51
• 4.1.1 抗原和佐劑50
• 4.1.2 實驗動物和細胞50
• 4.1.3 實驗試劑50-51
• 4.1.4 實驗儀器51
• 4.2 實驗方法51-56
• 4.2.1 溶液配制51-52
• 4.2.2 動物的分組與免疫：52-53
• 4.2.3 MUC1-MBP 配伍不同佐劑免疫小鼠后免疫活性的檢測53-56
• 4.2.4 統(tǒng)計學(xué)分析56
• 4.3 實驗結(jié)果56-67
• 4.3.1 不同佐劑聯(lián)合 MUC1-MBP 融合蛋白免疫后小鼠脾臟指數(shù)的變化56-57
• 4.3.2 有絲分裂原刺激小鼠脾臟淋巴細胞增殖情況57-58
• 4.3.3 MUC1 特異性刺激脾臟淋巴細胞增殖情況58-59
• 4.3.4 MUC1 特異性細胞分泌細胞因子的檢測59-62
• 4.3.5 T 淋巴細胞亞群分析62-67
• 第5章 討論67-73
• 第6章 結(jié)論73-74
• 參考文獻74-81
• 作者簡介及攻讀碩士期間所取得的科研成果81-82
• 致謝82

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 方芳;宋獻美;張慶勇;馬吉春;竇蕊;陳文博;臺桂香;;人MUC1和鼠Muc1蛋白疫苗抗腫瘤作用的比較[J];吉林大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2010年01期

2 宋獻美;方芳;馬吉春;趙小霞;周靜;臺桂香;;利用小鼠皮下人乳腺癌移植瘤模型觀察MUC1-MBP抗乳腺癌作用[J];免疫學(xué)雜志;2010年05期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 方芳;重組MUC1-MBP融合蛋白疫苗抗腫瘤作用機制研究[D];吉林大學(xué);2010年

本文編號：1004218