本文關(guān)鍵詞：POLD3在胃腺癌中的表達(dá)及臨床意義分析

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【摘要】：目的胃腺癌(gastric adenocarcinoma, GAC)屬于消化道惡性上皮性腫瘤,目前發(fā)病率仍高居我國男性惡性腫瘤第二位,死亡率為男性惡性腫瘤患者的前三位。DNA聚合酶δ (DNA polymerase delta, POLD)是真核細(xì)胞DNA聚合酶B族中的一員,廣泛參與生物體內(nèi)DNA的復(fù)制及損傷修復(fù)過程,其第三亞基(DNA polymerase delta 3, POLD3)作為POLD的輔助亞基,在POLD參與的各項生命活動中均處于核心地位。目前在對POLD3與癌癥的關(guān)系研究中,能夠明確的是POLD3的突變體增加結(jié)直腸癌的發(fā)病風(fēng)險、卵巢癌預(yù)后不良患者中POLD3的表達(dá)下調(diào),但其與胃癌的關(guān)系暫未見報道。本課題通過免疫組織化學(xué)(immunohistochemistry, IHC)、蛋白印跡(western blotting, WB)、實時定量多聚酶鏈反應(yīng)(real-time quantitative polymerase chain reaction, RT-q PCR)、體外細(xì)胞學(xué)等技術(shù)檢測GAC組織與胃腺癌細(xì)胞系中POLD3的表達(dá)水平,分析了POLD3表達(dá)對GAC增殖、分化及預(yù)后等影響。方法1.收集2005年1月至2008年12月期間在右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院住院的經(jīng)病理確診的、接受了根治性手術(shù)切除的GAC臨床Ⅰ-Ⅱ期病例；收集所有研究對象的手術(shù)切除石蠟標(biāo)本和適量新鮮組織用于POLD3表達(dá)分析；同時,收集所有研究對象的相關(guān)臨床病理資料及生存隨訪資料,隨訪截止日期至2014年12月。2.使用IHC檢測POLD3蛋白在GAC腫瘤組織及腫瘤旁組織的表達(dá)情況,通過t檢驗分析POLD3在腫瘤組織與腫瘤旁組織間的表達(dá)差異；使用卡方檢驗、非條件Logistic回歸方法分析腫瘤組織中POLD3表達(dá)與GAC臨床病理特征的關(guān)系；通過Kaplan-Meier法繪制生存曲線并計算中位生存期(Median survival time, MST),通過多因素風(fēng)險比例回歸模型計算POLD3對GAC總體死亡風(fēng)險值。3.使用RT-q PCR技術(shù)檢測POLD3 mRNA在10例腫瘤組織與腫瘤旁組織的表達(dá)情況,通過t檢驗比較分析POLD3 mRNA在腫瘤組織與腫瘤旁組織間的表達(dá)差異。4.常規(guī)培養(yǎng)2株人胃腺癌細(xì)胞系及1株人非腫瘤胃黏膜上皮細(xì)胞株,通過WB和RT-q PCR分別檢測各培養(yǎng)細(xì)胞系中POLD3蛋白和mRNA的表達(dá)水平。5.通過分子克隆技術(shù)檢測分析體外過表達(dá)POLD3對GAC細(xì)胞增殖的影響。結(jié)果1.當(dāng)前研究共收集到符合要求的TNM分期為Ⅰ-Ⅱ期的GAC患者共82例,男性和女性分別為58例(70.7%)和24例(29.3%),平均年齡53.17±11.19歲,其中早期胃癌4例(4.9%),進(jìn)展期胃癌78例(95.1%),高分化者或中分化者占65.9%(54/82)、低或未分化者占34.1(28/82)。2.與腫瘤旁組織相比,POLD3蛋白在GAC腫瘤組織中表達(dá)水平減少(P=4.26×10-14)；體外細(xì)胞學(xué)實驗有相似發(fā)現(xiàn)。3.與腫瘤旁組織相比,POLD3 mRNA在GAC腫瘤組織中表達(dá)水平減少(P=8.00×10-6)；體外細(xì)胞學(xué)實驗有相似發(fā)現(xiàn)(P=7.20×10-5)。4.與低POLD3表達(dá)者相比,高POLD3表達(dá)者其腫瘤組織分化程度更高,對應(yīng)貢獻(xiàn)值為5.00(1.35-18.48),P值為0.016；體外細(xì)胞學(xué)實驗有相似發(fā)現(xiàn)。5.POLD3表達(dá)影響胃腺癌腫瘤大小,腫瘤直徑較大者,腫瘤組織中POLD3蛋白表達(dá)水平較低,Logistic回歸分析表明高POLD3表達(dá)者,抑制腫瘤生長的貢獻(xiàn)值為5.78(1.55-21.51),對應(yīng)P值為0.009。6.POLD3表達(dá)影響體外培養(yǎng)胃腺癌細(xì)胞增殖,與空載或空白對照相比,低POLD3表達(dá)的MKN-45細(xì)胞株在接受了POLD3過表達(dá)載體后,其生長速度明顯受到抑制(P0.05)。7.POLD3表達(dá)水平影響胃腺癌患者的預(yù)后：高和低表達(dá)對應(yīng)中位總體生存期分別為34和16個月(P0.01),低POLD3表達(dá)者其總體死亡風(fēng)險為高表達(dá)者2.43倍(可信區(qū)間為1.25-4.71)。結(jié)論POLD3在GAC腫瘤中表達(dá)下調(diào),這種下調(diào)與腫瘤分化、增殖及不良預(yù)后均相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：POLD3 胃腺癌 表達(dá) 臨床意義
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.2
【目錄】：

• 個人簡歷3-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-14
• 前言14-16
• 材料與方法16-52
• 1. 主要材料與試劑16-18
• 2. 主要儀器18-19
• 3. 研究對象19-21
• 4. 細(xì)胞系與細(xì)胞培養(yǎng)21-26
• 5. 載體構(gòu)建26-36
• 6. 免疫組織化學(xué)36-40
• 7 蛋白免疫印跡40-45
• 8 POLD3 mRNA檢測技術(shù)45-48
• 9. 細(xì)胞增殖分析48-50
• 10. 統(tǒng)計學(xué)處理50-52
• 結(jié)果52-63
• 1. 研究對象的基本特征52
• 2. POLD3蛋白在胃腺癌中的表達(dá)情況52-56
• 3. POLD3 mRNA在胃腺癌中的表達(dá)情況56-58
• 4. POLD3表達(dá)與胃腺癌腫瘤分化的關(guān)系58-59
• 5. POLD3表達(dá)對胃腺癌增殖的影響59-62
• 6. POLD3表達(dá)對胃腺癌患者預(yù)后的影響62-63
• 討論63-69
• 參考文獻(xiàn)69-77
• 綜述 DNA聚合酶delta研究進(jìn)展77-92
• 參考文獻(xiàn)85-92
• 致謝92-94
• 攻讀研究生期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄94-95
• 附錄95-99

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前5條

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本文編號：1002575