本文關(guān)鍵詞：Hippo通路在乳酸促進(jìn)肺腺癌轉(zhuǎn)移中作用的研究

  更多相關(guān)文章： 共轉(zhuǎn)錄激活子TAZ 肝臟激酶B1 肺癌 乳酸 上皮細(xì)胞間質(zhì)化 轉(zhuǎn)錄因子Snail

【摘要】：背景與目的肺癌是目前全球發(fā)病率最高、死亡率增長(zhǎng)最快的惡行腫瘤,由于近年國(guó)內(nèi)大氣污染日趨嚴(yán)重,國(guó)人感染肺部疾病甚至肺癌的風(fēng)險(xiǎn)大大增加。美國(guó)肺癌患者相對(duì)的只有18%的5年生存率,預(yù)后效果差主要是因?yàn)槟[瘤易發(fā)生侵襲和轉(zhuǎn)移。當(dāng)前的研究數(shù)據(jù)顯示,約80-90%的肺癌死亡病例的病因是腫瘤轉(zhuǎn)移。因此,研究肺癌侵襲轉(zhuǎn)移的具體機(jī)理,然后制定相應(yīng)的預(yù)防、治療措施,具有重大的臨床價(jià)值和社會(huì)意義。肺癌侵襲轉(zhuǎn)移是一個(gè)多基因、多步驟、連續(xù)性、漸進(jìn)式動(dòng)態(tài)進(jìn)程,涉及多個(gè)信號(hào)通路的功能紊亂和關(guān)鍵基因的結(jié)構(gòu)、功能變異。最新研究成果表明,Hippo信號(hào)通路的下游靶標(biāo),共轉(zhuǎn)錄激活子TAZ可以激活多種原癌基因的表達(dá),在腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移過程中扮演了重要角色,為臨床治療研究提供了新的藥物靶點(diǎn)和治療策略,是近年來(lái)癌癥研究的熱點(diǎn)問題。我們前期的研究結(jié)果顯示,腫瘤細(xì)胞中乳酸的不斷積累與腫瘤的轉(zhuǎn)移有密切的關(guān)系,而上皮細(xì)胞間質(zhì)化作為腫瘤轉(zhuǎn)移的一個(gè)早期事件可能會(huì)受到乳酸積累的影響,所以本研究就乳酸與TAZ促進(jìn)腫瘤上皮細(xì)胞間質(zhì)化進(jìn)程的關(guān)系進(jìn)行探討,并深入闡釋TAZ對(duì)腫瘤轉(zhuǎn)移的影響。其中上皮細(xì)胞間質(zhì)化的過程受幾種關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)節(jié),研究結(jié)果指出轉(zhuǎn)錄因子Snail可以調(diào)節(jié)上皮細(xì)胞標(biāo)志蛋白,在這一過程中起到關(guān)鍵作用。因此本研究進(jìn)一步探討了TAZ是否通過影響Snail的表達(dá)來(lái)調(diào)節(jié)上皮細(xì)胞間質(zhì)化的發(fā)生。本文旨在深入探討乳酸和上皮細(xì)胞間質(zhì)化的聯(lián)系及TAZ在其中的作用,從而進(jìn)一步闡明腫瘤轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制,為腫瘤治療提供新的靶點(diǎn)和策略。材料與方法選取人非小細(xì)胞肺腺癌細(xì)胞株H1299、A549作為研究對(duì)象。⑴用不同濃度的乳酸(5、10、15、20、30mM)刺激H1299、A549細(xì)胞,通過Western blot方法檢測(cè)TAZ活性及Snail蛋白表達(dá)量的變化。⑵在H1299、A549細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)染TAZ si RNA,Western blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率及Snail表達(dá)水平的變化。⑶在H1299、A549細(xì)胞內(nèi)傳染TAZ,siTAZ,TAZS89A,pcDNA,Snail Promoter以及海腎螢光素酶啟動(dòng)子CMV,應(yīng)用Luciferase Assay Systerm技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)Snail的表達(dá)水平。⑷在A549、H1299細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)染不同結(jié)構(gòu)的TAZ,其中TAZD304,TAZDCC,TAZDWW表達(dá)TAZ功能缺失型蛋白,TAZ表達(dá)野生型蛋白,TAZS89A表達(dá)組成激活型蛋白,劃痕后0h、24h、48h分別拍照,48h后應(yīng)用Image Pro Plus圖像處理軟件測(cè)定劃痕寬度并通過Western blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率及轉(zhuǎn)染前后Snail的變化。結(jié)果1、5,10,15,20,30mM乳酸處理后A549、H1299細(xì)胞TAZ活性升高、Snail表達(dá)上調(diào),H1299細(xì)胞LKB1活性下降。2、轉(zhuǎn)染siTAZ后,TAZ蛋白比空白組表達(dá)呈下降趨勢(shì),Snail蛋白表達(dá)變化與之相一致。3、用Promega公司的GLO MAX儀器檢測(cè)Snail Promoter表達(dá)水平顯示,siTAZ組與對(duì)照pcDNA組相比轉(zhuǎn)錄活性明顯降低,TAZ,TAZS89A較對(duì)照組顯著升高(H1299:p=0.006,0.001,0.000,A549:p=0.020,0.021,0.017)。4、轉(zhuǎn)染3種功能缺失型,1種野生型,1種組成激活型TAZ后,劃痕48h,發(fā)現(xiàn)只有轉(zhuǎn)TAZDCC組與空載組相比劃痕寬度沒變化,其余組較空載組均有明顯變窄。且Western blot結(jié)果顯示,只有TAZDCC組Snail蛋白的表達(dá)量較空載組不存在差異。結(jié)論1、乳酸可以激活A(yù)549、H1299細(xì)胞中TAZ,Snail的表達(dá),這種作用具有梯度效應(yīng)。2、TAZ可以誘導(dǎo)Snail的表達(dá)。3、TAZ可以提高A549、H1299細(xì)胞的遷移能力,但CC結(jié)構(gòu)域缺失后TAZ便不具有此功能了,并且缺失CC結(jié)構(gòu)域的TAZ不能激活Snail的表達(dá),說(shuō)明CC結(jié)構(gòu)域有可能行使了促進(jìn)EMT進(jìn)程的功能。
【關(guān)鍵詞】：共轉(zhuǎn)錄激活子TAZ 肝臟激酶B1 肺癌 乳酸 上皮細(xì)胞間質(zhì)化 轉(zhuǎn)錄因子Snail
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R734.2
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語(yǔ)/符號(hào)說(shuō)明10-12
• 前言12-16
• 研究現(xiàn)狀、成果12-15
• 研究目的、方法15-16
• 一、研究目的15
• 二、研究方法15-16
• 一、乳酸誘導(dǎo)TAZ激活和Snail的表達(dá)16-31
• 1.1 對(duì)象和方法16-26
• 1.1.1 對(duì)象16
• 1.1.2 主要試劑和材料16-17
• 1.1.3 主要儀器設(shè)備17-18
• 1.1.4 主要試劑配制18-21
• 1.1.5 實(shí)驗(yàn)方法21-26
• 1.2 結(jié)果26-28
• 1.2.1 乳酸對(duì)TAZ，，Snail的表達(dá)影響26-27
• 1.2.2 TAZ對(duì)Snail的表達(dá)量的影響27-28
• 1.3 討論28-30
• 1.3.1 上皮細(xì)胞間質(zhì)化的機(jī)理28
• 1.3.2 TAZ在腫瘤細(xì)胞EMT過程中的作用28-29
• 1.3.3 乳酸對(duì)TAZ，Snail的調(diào)節(jié)（本文研究?jī)?nèi)容）29-30
• 1.4 小結(jié)30-31
• 二、TAZ可以上調(diào)Snail的表達(dá)水平31-52
• 2.1 對(duì)象和方法31-47
• 2.1.1 對(duì)象31
• 2.1.2 主要試劑和材料31-32
• 2.1.3 主要儀器設(shè)備32-33
• 2.1.4 主要試劑配制33-37
• 2.1.5 實(shí)驗(yàn)方法37-47
• 2.2 結(jié)果47-50
• 2.2.1 TAZ可以促進(jìn)Snail蛋白的表達(dá)47-48
• 2.2.2 TAZ可以激活Snail啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄活性48-50
• 2.3 討論50-51
• 2.3.1 TAZ可以促進(jìn)Snail蛋白的表達(dá)50
• 2.3.2 TAZ可以激活Snail啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄活性50-51
• 2.4 小結(jié)51-52
• 三、TAZ蛋白的CC結(jié)構(gòu)域在TAZ促進(jìn)Snail表達(dá)和細(xì)胞的轉(zhuǎn)移中起關(guān)鍵作用52-67
• 3.1 對(duì)象和方法52-63
• 3.1.1 對(duì)象52
• 3.1.2 主要試劑和材料52-53
• 3.1.3 主要儀器設(shè)備53-54
• 3.1.4 主要試劑配制54-57
• 3.1.5 實(shí)驗(yàn)方法57-63
• 3.2 結(jié)果63-65
• 3.2.1 H1299細(xì)胞中TAZ蛋白促進(jìn)細(xì)胞轉(zhuǎn)移和Snail表達(dá)63-64
• 3.2.2 A549細(xì)胞中TAZ蛋白促進(jìn)細(xì)胞轉(zhuǎn)移和Snail表達(dá)64-65
• 3.3 討論65-66
• 3.4 小結(jié)66-67
• 結(jié)論67-68
• 參考文獻(xiàn)68-70
• 發(fā)表論文和參加科研情況說(shuō)明70-71
• 綜述 Hippo與 Wnt通路交叉對(duì)話誘發(fā)腫瘤機(jī)制的研究進(jìn)展71-79
• 綜述參考文獻(xiàn)76-79
• 致謝79-80
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷80

【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1002488