本文關(guān)鍵詞：微小RNA-100逆轉(zhuǎn)上皮性卵巢癌順鉑耐藥的實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：研究背景：上皮性卵巢癌(epithelial ovarian cancer, EOC)是嚴(yán)重威脅女性健康的惡性腫瘤之一,其起病隱匿,發(fā)展迅速,病死率居?jì)D科腫瘤首位。目前,腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)聯(lián)合以鉑類為基礎(chǔ)的化療,使70%的晚期患者初期治療有效,但隨之發(fā)生的早期復(fù)發(fā)、化療耐藥令卵巢癌患者的總生存率無明顯改善。化療耐藥的產(chǎn)生是導(dǎo)致卵巢癌患者預(yù)后不良的重要原因。因此,探討卵巢癌耐藥的相關(guān)因素及機(jī)制,尋找有效的逆轉(zhuǎn)卵巢癌耐藥的治療靶點(diǎn),在卵巢癌治療中顯得愈發(fā)重要和緊迫。腫瘤的化療耐藥機(jī)制非常復(fù)雜,順鉑耐藥的可能機(jī)制包括藥代動(dòng)力學(xué)因素(與藥物暴露和腫瘤血管相關(guān))、微環(huán)境因素(與對(duì)細(xì)胞周期的影響和細(xì)胞外凋亡信號(hào)相關(guān))和細(xì)胞因素(包括耐藥相關(guān)蛋白表達(dá)的變化、藥物靶點(diǎn)突變、細(xì)胞修復(fù)系統(tǒng)的增強(qiáng)和細(xì)胞凋亡的減弱等)。這些途徑的關(guān)鍵基因在遺傳學(xué)及表觀遺傳學(xué)水平的變異可以導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞耐藥現(xiàn)象的發(fā)生。已有大量研究表明微小RNA是這些關(guān)鍵基因的調(diào)節(jié)方式之一。微小RNA (microRNA, miRNA, miR)是一組約22個(gè)核苷酸的內(nèi)源性表達(dá)的非編碼小RNA,其通過與mRNA 3,端非翻譯區(qū)堿基互補(bǔ)配對(duì),調(diào)控靶基因的表達(dá)。微小RNA-100作為一種有潛能的腫瘤相關(guān)微小RNA已經(jīng)被報(bào)導(dǎo)與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及抗藥性有關(guān)。本課題組前期研究分析98例上皮性卵巢癌患者的miR-100的表達(dá)及其與臨床病理因素的關(guān)系,發(fā)現(xiàn)miR-100與卵巢癌的臨床分期、轉(zhuǎn)移、化療后復(fù)發(fā)及預(yù)后呈負(fù)相關(guān)。哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin, mTOR)和Polo樣激酶1 (polo-like kinase 1, PLK1)是高度保守的絲氨酸/蘇氨酸激酶家族成員,參與細(xì)胞增殖、代謝、轉(zhuǎn)移等生物學(xué)過程。已有研究表明mTOR和PLK1同為miR-100的靶分子,腫瘤細(xì)胞中miR-100的過度表達(dá)能夠明顯抑制mTOR及PLK1的表達(dá)從而調(diào)控腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移及對(duì)化療的敏感性。Feng等研究發(fā)現(xiàn)在肺腺細(xì)胞癌中,下調(diào)miR-100可以激活其靶蛋因PLK1,從而促進(jìn)肺腺細(xì)胞癌對(duì)紫杉醇耐藥性的形成。Zhu等報(bào)導(dǎo)在軟骨肉瘤細(xì)胞系中miR-100通過靶向mTOR-3'-UTR并抑制其表達(dá),從而增加軟骨肉瘤細(xì)胞系對(duì)順鉑的敏感性。也有文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)miR-100與卵巢癌耐藥的關(guān)系,表明miR-100可增加卵巢透明細(xì)胞癌細(xì)胞系對(duì)依維莫司的敏感性。但miR-100與上皮性卵巢癌順鉑耐藥的關(guān)系目前尚不清楚。本實(shí)驗(yàn)擬在前期工作的基礎(chǔ)上,通過檢測(cè)miR-100在人上皮性卵巢癌順鉑耐藥細(xì)胞株SKOV3/DDP及其親本細(xì)胞株SKOV3中的表達(dá)差異,探究miR-100與人上皮性卵巢癌細(xì)胞順鉑耐藥的關(guān)系；通過上下調(diào)SKOV3/DDP中miR-100的表達(dá)以進(jìn)一步研究miR-100對(duì)上皮性卵巢癌細(xì)胞順鉑耐藥的調(diào)控作用及相關(guān)機(jī)制；構(gòu)建人上皮性卵巢癌裸鼠順鉑耐藥移植瘤模型,研究miR-100對(duì)上皮性卵巢癌裸鼠皮下移植瘤順鉑耐藥的逆轉(zhuǎn)作用,并初步探討其逆轉(zhuǎn)作用機(jī)制。通過本研究為深入探討卵巢癌耐藥機(jī)制和克服耐藥奠定理論基礎(chǔ),為耐藥性卵巢癌的基因治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。第一章MiR-100逆轉(zhuǎn)上皮性卵巢癌順鉑耐藥的體外實(shí)驗(yàn)研究第一節(jié)MiR-100與上皮性卵巢癌細(xì)胞順鉑耐藥的關(guān)系研究目的：對(duì)SKOV3/DDP細(xì)胞及其親本細(xì)胞順鉑IC5o及miR-100表達(dá)進(jìn)行檢測(cè),初步探討miR-100與上皮性卵巢癌順鉑耐藥的關(guān)系；并通過瞬轉(zhuǎn)構(gòu)建上下調(diào)miR-100的上皮性卵巢癌細(xì)胞模型,探討miR-100對(duì)上皮性卵巢癌順鉑耐藥的調(diào)控作用。方法：1.細(xì)胞培養(yǎng)SKOV3及SKOV3/DDP在含10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液中,5%CO2、37℃飽和濕度培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng),貼壁生長(zhǎng)。2.細(xì)胞瞬轉(zhuǎn)取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)的SKOV3/DDP細(xì)胞,以3.5×105 個(gè)/孔接種于6孔板培養(yǎng),匯合率達(dá)60-70%,取miR-100類似物(mimics)、抑制物(inhibitor)及其陰性對(duì)照.片段(NC、inhibitor NC)各100pmol分別與脂質(zhì)體lipofectamine 2000 5μL混合,按lipofectamine 2000試劑盒操作說明書進(jìn)行轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染后24h可進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR及CCK8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)。3.實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)各組細(xì)胞miR-100的表達(dá)(1)提取總RNA：使用Trizol試劑提取細(xì)胞中的總RNA； (2)反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)：miR-100的逆轉(zhuǎn)錄引物為莖環(huán)結(jié)構(gòu)引物,以U6基因作為內(nèi)參。 (3)實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng)：取反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物分別進(jìn)行miR-100、U6的PCR反應(yīng),并設(shè)3個(gè)復(fù)孔。4.CCK8法檢測(cè)各組細(xì)胞順鉑IC5o取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)狀態(tài)良好的細(xì)胞,分別接種于96孔板,3×103個(gè)細(xì)胞/孔,次日,加入終濃度分別為2、4、8、16、32、64μg/ml的順鉑,每組細(xì)胞設(shè)無藥物組為對(duì)照組,每個(gè)濃度設(shè)5個(gè)復(fù)孔。孵育48h后每孔力10μl CCK8,繼續(xù)培養(yǎng)4h,在酶標(biāo)儀上選擇450nm波長(zhǎng)測(cè)定各孔吸光度(A)并計(jì)算平均值。計(jì)算各組細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率,順鉑的半數(shù)抑制濃度(IC50)。5.利用SPSS 20.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理,計(jì)量資料用x±s表示,兩組間比較采用成組t檢驗(yàn),多組間兩兩比較采用單因素方差分析(One-way ANOVA), P0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果：1. SKOV3/DDP細(xì)胞的順鉑耐藥指數(shù)SKOV3/DDP細(xì)胞的IC50為8.29μg/mL, SKOV3細(xì)胞的IC50為3.72μg/mL, SKOV3/DD P細(xì)胞的耐藥指數(shù)(RI)為2.23。2.各組卵巢癌細(xì)胞中miR-100的表達(dá)MiR-100在SKOV3/DDP細(xì)胞中呈低表達(dá),與SKOV3細(xì)胞相比表達(dá)水平下降25倍(P0.001)。轉(zhuǎn)染miR-100 mimices后,SKOV3/DDP細(xì)胞中miR-100的表達(dá)量與NC組相比上升38.29倍,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)；轉(zhuǎn)染miR-100inhibitor后, SKOV3/DDP細(xì)胞中miR-100的表達(dá)量較inhibitor NC組下降97.7%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001)。3.瞬轉(zhuǎn)后SKOV3/DDP細(xì)胞順鉑IC50的變化SKOV3/DDP細(xì)胞的存活率隨順鉑濃度的增加而降低。轉(zhuǎn)染miR-100 mimices后,SKOV3/DDP細(xì)胞對(duì)順鉑的敏感性增加,其IC50明顯低于NC組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001)。轉(zhuǎn)染miR-100 inhibitor后,SKOV3/DDP細(xì)胞順鉑IC50明顯高于inhibitor NC組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001)。結(jié)論：1. SKOV3/DDP具有耐藥性,且穩(wěn)定傳代,可進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)研究。2. MiR-100在人上皮性卵巢癌順鉑耐藥細(xì)胞SKOV3/DDP中呈低表達(dá),miR-100與上皮性卵巢癌細(xì)胞順鉑耐藥相關(guān),且miR-100可上調(diào)上皮性卵巢癌細(xì)胞對(duì)順鉑的敏感性。第二節(jié)MiR-100調(diào)控上皮性卵巢癌細(xì)胞對(duì)順鉑敏感性的相關(guān)機(jī)制研究目的：利用慢病毒表達(dá)載體,構(gòu)建穩(wěn)定上下調(diào)miR-100的上皮性卵巢癌細(xì)胞模型,探討miR-100調(diào)控上皮性卵巢癌細(xì)胞對(duì)順鉑敏感性的相關(guān)機(jī)制。方法：1.慢病毒感染SKOV3/DDP細(xì)胞將LV-miR-100、LV-anti-100及LV-NC三種慢病毒分別感染SKOV3/DDP細(xì)胞,12h后移去病毒液,加入完全培養(yǎng)基,繼續(xù)培養(yǎng)48h,可于熒光顯微鏡下觀察感染效率并qRT-PCR驗(yàn)證。用含2μg/ml嘌呤霉素的完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)2周,得到穩(wěn)定上下調(diào)miR-100的SKOV3/DDP細(xì)胞。2.實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)慢病毒感染后SKOV3/DDP細(xì)胞中miR-100的表達(dá)分別提取三種慢病毒感染后SKOV3/DDP細(xì)胞的總RNA,實(shí)時(shí)熒光定量囂PCR檢測(cè)miR-100的表達(dá)水平,大量擴(kuò)增并凍存穩(wěn)定上下調(diào)miR-100的SKOV3/DDP細(xì)胞及對(duì)照細(xì)胞,用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)研究。3.生長(zhǎng)曲線實(shí)驗(yàn)(CCK8法)檢測(cè)miR-100對(duì)SKOV3/DDP細(xì)胞增殖狀態(tài)的影響收集穩(wěn)定上下調(diào)miR-100的SKOV3/DDP細(xì)胞及對(duì)照細(xì)胞,以2×103個(gè)細(xì)胞／孔分別接種96孔板中,每組設(shè)5個(gè)復(fù)孔,每板分別于12h、24h、36h、48h72h加入CCK8 10μL,繼續(xù)常規(guī)培養(yǎng)2h,以空白對(duì)照孔調(diào)零,置酶標(biāo)儀檢測(cè)各孔吸光度(A),并最終繪制每組細(xì)胞生長(zhǎng)曲線。4.平板克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)miR-100對(duì)SKOV3/DDP細(xì)胞增殖狀態(tài)的影響收集穩(wěn)定上下調(diào)miR-100的SKOV3/DDP細(xì)胞及對(duì)照細(xì)胞,分別接種于6孔板,1×102個(gè)細(xì)胞／孔,用含10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)14天,甲醇固定,再用0.1%的結(jié)晶紫染色。樣本進(jìn)行拍照,然后計(jì)數(shù)可見細(xì)胞克隆數(shù)。5.流式細(xì)胞儀檢測(cè)miR-100對(duì)SKOV3/DDP細(xì)胞早期凋亡的影響培養(yǎng)穩(wěn)定上下調(diào)miR-100的SKOV3/DDP細(xì)胞及對(duì)照細(xì)胞,加入終濃度3μg/ml的順鉑,培養(yǎng)48h后用無EDTA的胰酶收集細(xì)胞。使用Annexin V-FITC/PI雙染細(xì)胞凋亡檢測(cè)法檢測(cè)細(xì)胞早期凋亡率。6.流式細(xì)胞儀檢測(cè)miR-100對(duì)SKOV3/DDP細(xì)胞細(xì)胞周期分布的影響收集穩(wěn)定上下調(diào)miR-100的SKOV3/DDP細(xì)胞及對(duì)照細(xì)胞,預(yù)冷PBS洗滌細(xì)胞兩次,加入70%預(yù)冷酒精,4℃固定過夜,用含RnaseA酶的PI染色,流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組細(xì)胞的細(xì)胞周期。7.蛋白印跡法檢測(cè)miR-100對(duì)SKOV3/DDP細(xì)胞中mTOR蛋白和PLK1蛋白的調(diào)節(jié)作用分別提取各組細(xì)胞中的總蛋白,蛋白上樣,聚丙烯酰胺凝膠電泳分離,轉(zhuǎn)膜封閉,一抗孵育1h,二抗孵育1h,用增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光(ECL)試劑盒顯色。應(yīng)用Quantity One軟件分析各條帶的灰度值,計(jì)算mTOR蛋白和PLKl蛋白的表達(dá)水平。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。8.利用SPSS 20.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理,計(jì)量資料用x±s表示,兩組間比較采用成組t檢驗(yàn),多組間兩兩比較采用單因素方差分析(One-way ANOVA), P0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果：1.成功構(gòu)建穩(wěn)定上下調(diào)miR-100的SKOV3/DDP細(xì)胞模型。熒光顯微鏡下觀察慢病毒感染后的SKOV3/DDP細(xì)胞,可見GFP+細(xì)胞表達(dá)率均90%。實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)慢病毒感染后的SKOV3/DDP細(xì)胞中miR-100的表達(dá)水平,結(jié)果顯示感染LV-miR-100后 SKOV3/DDP細(xì)胞中miR-100的表達(dá)量明顯高于感染LV-NC組(P0.05)；而感染LV-anti-100后SKOV3/DDP細(xì)胞中miR-100的表達(dá)量明顯低于感染LV-NC組(P0.01)。2.生長(zhǎng)曲線實(shí)驗(yàn)(CCK8法)檢鋇miR-100對(duì)SKOV3/DDP細(xì)胞增殖狀態(tài)的影響感染LV-miR-100后SKOV3/DDP細(xì)胞增長(zhǎng)較感染LV-NC后明顯減慢；感染LV-anti-100后SKO V3/DDP細(xì)胞增長(zhǎng)明顯快于感染LV-NC組。3.平板克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)miR-100對(duì)SKOV3/DDP細(xì)胞增殖狀態(tài)的影響感染LV-miR-100的SKOV3/DDP細(xì)胞克隆數(shù)明顯少于感染LV-NC細(xì)胞克隆數(shù)的(P0.05),而感染LV-anti-100的SKOV3/DDP細(xì)胞克隆數(shù)明顯多于感染LV-NC細(xì)胞克隆數(shù)(P0.05)。4.流式細(xì)胞儀檢測(cè)miR-100對(duì)于SKOV3/DDP細(xì)胞早期凋亡的影響3μg/ml順鉑作用48h后,感染LV-miR-100的SKOV3/DDP細(xì)胞早期凋亡率明顯高于感染LV-NC細(xì)胞早期凋亡率(P0.01),而感染LV-anti-100的SKOV3/DDP細(xì)胞早期凋亡率明顯低于感染LV-NC細(xì)胞早期凋亡率(P0.05)。5.流式細(xì)胞儀檢測(cè)miR-100對(duì)SKOV3/DDP細(xì)胞細(xì)胞周期分布的影響感染LV-miR-100后SKOV3/DDP細(xì)胞G1期細(xì)胞比例較感染LV-NC細(xì)胞顯著升高(P0.01),S期細(xì)胞比例卻明顯低于感染LV-NC細(xì)胞的S期細(xì)胞比例(P0.01)。相反,感染LV-anti-100的細(xì)胞G1期細(xì)胞比例較感染LV-NC細(xì)胞顯著降低(P0.05),S期細(xì)胞比例卻明顯高于感染LV-NC細(xì)胞的S期細(xì)胞比例(P0.05)。6.蛋白印跡法檢測(cè)miR-100對(duì)SKOV3/DDP細(xì)胞中mTOR蛋白和PLK1蛋白的調(diào)節(jié)作用對(duì)各組蛋白光密度值進(jìn)行采集分析,以GAPDH作為內(nèi)參照。與SKOV3細(xì)胞相比,耐藥細(xì)胞株SKOV3/DDP細(xì)胞中mTOR蛋白及PLK1蛋白的表達(dá)水平明顯升高(P0.05)。感染LV-miR-100后SKOV3/DDP細(xì)胞中的mmTOR蛋白及PLK1蛋白較感染LV-NC組明顯降低(P0.05)；感染LV-anti-100后SKOV3/DDP細(xì)胞中的mTOR蛋白及PLK1蛋白表達(dá)較感染LV-NC組明顯增加(P0.05)。結(jié)論：1.通過慢病毒感染成功構(gòu)建穩(wěn)定上下調(diào)miR-100的SKOV3/DDP細(xì)胞及陰性對(duì)照細(xì)胞模型。2.過表達(dá)miR-100可抑制SKOV3/DDP細(xì)胞增殖,阻止SKOV3/DDP細(xì)胞由G1期向S期轉(zhuǎn)換及加速SKOV3/DDP細(xì)胞凋亡；而降低SKOV3/DDP中miR-100的表達(dá)則可促進(jìn)細(xì)胞增殖,促使細(xì)胞由G1期向S期轉(zhuǎn)換以及抑制細(xì)胞凋亡。同時(shí),在SKOV3/DDP中miR-100可下調(diào)mTOR及PLK1蛋白表達(dá)。這些效應(yīng)均可能為miR-100增加上皮性卵巢癌細(xì)胞對(duì)順鉑的敏感性的相關(guān)機(jī)制。第二章MiR-100逆轉(zhuǎn)上皮性卵巢癌順鉑耐藥的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究目的：構(gòu)建人上皮性卵巢癌裸鼠順鉑耐藥移植瘤模型,通過體內(nèi)實(shí)驗(yàn)探討miR-100逆轉(zhuǎn)上皮性卵巢癌順鉑耐藥的作用及相關(guān)機(jī)制。方法：1.構(gòu)建人上皮性卵巢癌裸鼠順鉑耐藥移植瘤模型選取9只4-5周齡雌性BALB/c-nu/n裸鼠為實(shí)驗(yàn)的對(duì)象,每組3只,分別取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)的穩(wěn)定上下調(diào)miR-100的SKOV3/DDP細(xì)胞及陰性對(duì)照細(xì)胞,調(diào)整細(xì)胞密度5×107/mL,200μL/只行裸鼠肩胛部皮下注射。2.腹腔注射順鉑治療裸鼠皮下移植瘤并觀察其生長(zhǎng)情況裸鼠皮下注射三種細(xì)胞后,分為3組：LV-miR-100組,LV-anti-100組和LV-NC組。待皮下腫瘤直徑約5mm行腹腔內(nèi)注射順鉑4mg/kg,3d給藥1次,共注射7次。每3d測(cè)量皮下移植瘤的大小,繪制生長(zhǎng)曲線,移植瘤體積V=axb2/2(mm3)。結(jié)束治療后3d處死裸鼠,摘除移植瘤組織。3.免疫組化法檢測(cè)各組皮下移植瘤中mTOR及PLK1蛋白的表達(dá)免疫組化檢測(cè)各組裸鼠皮下移植瘤組織中]mTOR及PLK1蛋白的表達(dá)情況。將免疫組化的結(jié)果進(jìn)行半定量判定。隨機(jī)選取5個(gè)高倍視野,按細(xì)胞染色強(qiáng)弱及陽性細(xì)胞數(shù)進(jìn)行評(píng)分。4.利用SPSS 20.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理,計(jì)量資料用x±s表示,多組間兩兩比較采用單因素方差分析(One-way ANOVA),P0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果：1.構(gòu)建人上皮性卵巢癌裸鼠順鉑耐藥移植瘤模型。接種細(xì)胞后3d左右皮丘消失,7d左右皮下移植瘤長(zhǎng)出,皮下成瘤率100%。2.順鉑治療后各組皮下移植瘤生長(zhǎng)情況順鉑治療期間miR-100高表達(dá)的裸鼠皮下移植瘤較對(duì)照組移植瘤生長(zhǎng)緩慢,移植瘤體積較�。幌喾�,miR-100低表達(dá)的裸鼠皮下移植瘤較對(duì)照組移植瘤生長(zhǎng)快速,移植瘤體積更大。統(tǒng)計(jì)分析各組間裸鼠皮下移植瘤體積之間的差異,結(jié)果顯示順鉑治療后的第15d、18d、21d LV-miR-100組皮下移植瘤的體積要明顯小于LV-NC組皮下移植瘤體積(P0.05),而LV-anti-100組皮下移植瘤的體積明顯大于LV-NC組皮下移植瘤體積(P0.01)。3.免疫組化法檢測(cè)各組皮下移植瘤中mTOR及PLKl蛋白的表達(dá)與LV-NC組移植瘤相比,LV-miR-100組移植瘤中mTOR及PLK1的表達(dá)量下降,而]LV-anti-100組移植瘤中的mTOR及PLKl的表達(dá)量增高。結(jié)論：MiR-100可有效逆轉(zhuǎn)裸鼠上皮性卵巢癌皮下移植瘤順鉑耐藥,其機(jī)制之一可能是下調(diào)了mTOR及PLK1蛋白的表達(dá)。
【關(guān)鍵詞】：微RNAs 卵巢腫瘤 順鉑 抗藥性 mTOR PLK1
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.31
【目錄】：

• 摘要3-12
• ABSTRACT12-25
• 前言25-30
• 參考文獻(xiàn)27-30
• 第一章 MIR-100逆轉(zhuǎn)上皮性卵巢癌順鉑耐藥的體外實(shí)驗(yàn)研究30-63
• 第一節(jié) MIR-100與上皮性卵巢癌細(xì)胞順鉑耐藥的關(guān)系研究30-41
• 一、目的30
• 二、材料與方法30-37
• 三、結(jié)果37-41
• 第二節(jié) MIR-100調(diào)控上皮性卵巢癌細(xì)胞對(duì)順鉑敏感性的相關(guān)機(jī)制研究41-58
• 一、目的41
• 二、材料與方法41-50
• 三、結(jié)果50-58
• 討論58-60
• 結(jié)論60
• 參考文獻(xiàn)60-63
• 第二章 MIR-100逆轉(zhuǎn)上皮性卵巢癌順鉑耐藥的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究63-73
• 一、目的63
• 二、材料與方法63-66
• 三、結(jié)果66-69
• 四、討論69-71
• 五、結(jié)論71
• 參考文獻(xiàn)71-73
• 全文小結(jié)73-74
• 綜述74-81
• 參考文獻(xiàn)78-81
• 攻讀學(xué)位期間成果81-82
• 致謝82-83

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 管先華,謝瑞夢(mèng),趙曉虹,田昌英;上皮性卵巢癌遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移15例分析[J];四川腫瘤防治;2001年01期

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中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

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8 郄明蓉;鄭艾;楊小蕓;張崇淑;;28例Ⅳ期及復(fù)發(fā)上皮性卵巢癌的治療選擇與預(yù)后分析[A];第八次全國(guó)婦產(chǎn)科學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2004年

9 郄明蓉;張崇淑;鄭艾;楊小蕓;;28例Ⅳ期及復(fù)發(fā)上皮性卵巢癌的治療選擇與預(yù)后分析[A];第八次全國(guó)婦產(chǎn)科學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2004年

10 彭素蓉;王金華;陳小祥;;上皮性卵巢癌系統(tǒng)性腹膜后淋巴結(jié)切除術(shù)及臨床意義——附102例報(bào)告[A];江蘇省抗癌協(xié)會(huì)婦科腫瘤專業(yè)委員會(huì)第四次腫瘤學(xué)術(shù)研討會(huì)暨無錫市婦產(chǎn)科年會(huì)論文匯編[C];2005年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

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5 冷若冰;Rac1在上皮性卵巢癌上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化中的作用及機(jī)制的初步研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

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7 胡建國(guó);MARCH7促進(jìn)上皮性卵巢癌惡性進(jìn)展及機(jī)制的研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2016年

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中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

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4 齊新穎;LRP、GST-π表達(dá)與上皮性卵巢癌鉑類化療耐藥及預(yù)后的關(guān)系[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

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6 賈亞靜;子宮內(nèi)膜癌、上皮性卵巢癌、早期宮頸癌預(yù)后因素分析[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

7 楊晗;77例上皮性卵巢癌預(yù)后相關(guān)因素分析[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

8 張根豪;阿司匹林對(duì)人上皮性卵巢癌SKOV3細(xì)胞SOX7表達(dá)和Wnt/β-catenin信號(hào)通路的影響[D];鄭州大學(xué);2015年

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