本文關(guān)鍵詞：重癥急性胰腺炎SIRS時(shí)pMΦ吞噬凋亡PMN功能異常的分子機(jī)制及中西醫(yī)結(jié)合治療，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《安徽醫(yī)科大學(xué)》 2012年

FAS/FASLG基因多態(tài)性及其mRNA水平與系統(tǒng)性紅斑狼瘡的相關(guān)性研究

盧曼曼  

【摘要】：研究背景系統(tǒng)性紅斑狼瘡（systemic lupus erythematosus, SLE）是一種典型的自身免疫性疾病，患者體內(nèi)存在自身反應(yīng)T、B淋巴細(xì)胞的過(guò)度活化，細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)失衡和細(xì)胞凋亡紊亂等多種免疫異常，從而導(dǎo)致大量致病性的自身抗體和免疫復(fù)合物的產(chǎn)生，引起多系統(tǒng)和多器官損害。SLE患者病死率高，生存質(zhì)量差。SLE的病因至今尚未闡明，一般認(rèn)為在遺傳因素和環(huán)境因素等多種因素的共同作用下導(dǎo)致機(jī)體免疫功能的異常。SLE的免疫異常與細(xì)胞凋亡紊亂密切相關(guān)，國(guó)內(nèi)外研究顯示細(xì)胞凋亡紊亂及凋亡清除障礙在SLE發(fā)病中起重要作用。 細(xì)胞凋亡，又稱(chēng)程序化細(xì)胞死亡（programmed celldeath，PCD），1972年由英國(guó)的Kerr首先提出，是一種多基因控制的細(xì)胞自主性死亡的方式。細(xì)胞凋亡與調(diào)控機(jī)體發(fā)育，維護(hù)內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定以及腫瘤的發(fā)生，病毒感染和免疫密切相關(guān)。在SLE患者體內(nèi)，由于外周免疫耐受被打破，因而凋亡細(xì)胞作為最先的免疫原刺激機(jī)體自身的免疫系統(tǒng)，造成自身反應(yīng)性淋巴細(xì)胞的異�；罨驮錾�。許多信號(hào)途徑參與了細(xì)胞凋亡的調(diào)節(jié)，其中死亡受體途徑中的Fas和FasL（Fas ligand）信號(hào)途徑有著重要地位。 人FAS（Fas）基因定位于10號(hào)染色體q24.1區(qū)，有8個(gè)內(nèi)含子和9個(gè)外顯子，基因長(zhǎng)度約25kb，其編碼的Fas分子是一個(gè)相對(duì)分子質(zhì)量為45kd的I型跨膜蛋白，又稱(chēng)Apo-1或CD95，屬于腫瘤壞死因子受體/神經(jīng)生長(zhǎng)因子受體超家族（TNFR/NGFR）；Fas廣泛表達(dá)于各類(lèi)細(xì)胞表面，尤其是活化的T、B淋巴細(xì)胞、胸腺細(xì)胞及自然殺傷細(xì)胞。人FASLG（FasL）基因定位于1號(hào)染色體q23區(qū)，有3個(gè)內(nèi)含子和4個(gè)外顯子，其編碼的FasL分子是一種相對(duì)分子質(zhì)量約40kd的三聚體II型跨膜糖蛋白，又稱(chēng)CD95L，是Fas的天然配體，屬于腫瘤壞死因子（TNF）家族的細(xì)胞因子；FasL主要表達(dá)于活化的效應(yīng)淋巴細(xì)胞表面。Fas/FasL的主要功能是誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，在維持機(jī)體自身穩(wěn)定和保持內(nèi)環(huán)境的平衡方面起重要作用。在狼瘡鼠模型的研究顯示，當(dāng)Fas或FasL基因結(jié)構(gòu)發(fā)生改變或表達(dá)缺陷時(shí)，由Fas/FasL介導(dǎo)的自身反應(yīng)性淋巴細(xì)胞凋亡受限，產(chǎn)生大量的自身抗體，免疫耐受被打破，從而誘發(fā)自身免疫性疾病。 近年來(lái)在SLE患者中的研究表明，F(xiàn)as/FasL介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡機(jī)制異常與SLE有密切關(guān)系。本課題組前期的研究發(fā)現(xiàn)SLE外周血單個(gè)核細(xì)胞凋亡速度增加，且Fas的蛋白表達(dá)水平升高，提示Fas可能在SLE發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮重要作用。SLE是一種復(fù)雜的多基因遺傳疾病，遺傳因素在SLE發(fā)病中起著至關(guān)重要的作用，在不同種族人群中的研究已證實(shí)許多基因與SLE易感性有關(guān)。 在中國(guó)漢族人群FAS和FASLG基因多態(tài)性及其mRNA表達(dá)與SLE關(guān)聯(lián)目前研究較少，因此，本研究通過(guò)收集SLE患者及正常對(duì)照的血液標(biāo)本，采用病例對(duì)照研究，并結(jié)合Meta分析，探討FAS和FASLG基因多態(tài)性與SLE的疾病易感性之間的關(guān)聯(lián)；同時(shí)，檢測(cè)了FAS和FASLG基因mRNA表達(dá)水平，并結(jié)合臨床特征，分析FAS和FASLG基因mRNA表達(dá)水平與SLE疾病活動(dòng)度及不同臨床和實(shí)驗(yàn)室特征之間的關(guān)系，并分析了基因多態(tài)性與mRNA表達(dá)水平的關(guān)系，研究分為2個(gè)部分。 第一部分FAS和FASLG基因多態(tài)性與系統(tǒng)性紅斑狼瘡的相關(guān)性研究 目的比較SLE患者和正常對(duì)照FAS基因（rs2234767和rs1800682）以及FASLG基因（rs763110）的基因型頻率和等位基因頻率，并分析單倍型，探討其與中國(guó)漢族人群SLE易感性的關(guān)系，同時(shí)結(jié)合臨床資料分析其與SLE主要臨床特征之間的關(guān)系。Meta分析研究不同人群3個(gè)SNP位點(diǎn)的多態(tài)性與SLE疾病易感性之間的關(guān)聯(lián)。 方法病例共552例，來(lái)自兩所三甲醫(yī)院的SLE住院和門(mén)診病例，病例均符合美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)1997年修訂的SLE分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)；健康對(duì)照718例，來(lái)自健康體檢中心和健康獻(xiàn)血員均排除SLE和其它自身免疫疾病。收集研究對(duì)象的一般情況和病例的相關(guān)臨床資料，采集所有研究對(duì)象的外周靜脈血，提取DNA凍存。利用ABI7300PCR儀，采用TaqMan探針基因分型技術(shù)，檢測(cè)FAS和FASLG基因3個(gè)位點(diǎn)的多態(tài)性；比較SLE病例組和對(duì)照組中各多態(tài)位點(diǎn)的基因型和等位基因頻率分布是否存在差異，用SPSS10.01軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，并應(yīng)用SHEsis軟件構(gòu)建單倍型。采用Meta分析方法檢索文獻(xiàn)，提取數(shù)據(jù)，應(yīng)用Stata10.0對(duì)各研究結(jié)果進(jìn)行異質(zhì)性檢驗(yàn)和效應(yīng)值合并以及發(fā)表偏倚評(píng)估。以=0.05作為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。 結(jié)果 （1）哈德-溫伯格平衡（Hardy-Weinverg equilibriun，HWE）檢驗(yàn)：3個(gè)位點(diǎn)rs2234767、rs1800682和rs763110的基因型分布在對(duì)照組均達(dá)到遺傳平衡。（rs2234767對(duì)照組：2=1.235，P=0.266，，病例組：2=4.451，P=0.035；rs1800682對(duì)照組：2=3.280，P=0.070，病例組：2=5.134，P=0.023；rs763110對(duì)照組：2=1.666，P=0.197，病例組：2=1.074，P=0.300）。 （2）FAS基因分型：位點(diǎn)rs2234767三種基因型G/G、A/G、A/A的頻率在病例組和對(duì)照組中分別為46.6%、40.4%、13.0%和40.3%、44.8%、14.9%，基因型A/G與G/G兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.041）；G和A等位基因的頻率在兩組中分別為66.8%、33.2%和62.7%、37.3%，兩組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.033）；位點(diǎn)rs1800682三種基因型A/A、A/G、G/G的頻率在病例組和對(duì)照組中分別為39.7%、42.9%、17.4%和35.4%、45.4%、19.2%，A和G等位基因的頻率在兩組中分別為61.1%、38.9%和58.1%、41.9%，基因型頻率及等位基因頻率在病例組和對(duì)照組之間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。 （3）FASLG基因分型：位點(diǎn)rs763110三種基因型C/C、C/T、T/T的頻率在病例組和對(duì)照組中分別為59.2%、34.4%、6.3%和58.9%、34.5%、6.5%，C和T等位基因的頻率在兩組中分別為76.4%、23.6%和76.2%、23.8%，基因型頻率及等位基因頻率在病例組和對(duì)照組間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。 （4）FAS基因單倍型分析：連鎖分析顯示，位點(diǎn)rs2234767與rs1800682存在連鎖不平衡（D'=0.937，r2=0.708），并通過(guò)軟件構(gòu)建兩位點(diǎn)的單倍型，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在中國(guó)漢族人群中主要有3種常見(jiàn)單倍型：AG、GA和GG，單倍型GA可能增加了SLE發(fā)病的風(fēng)險(xiǎn)（P=0.039）。 （5）基因分型與主要臨床特征的關(guān)系：分析rs2234767、rs1800682和rs763110多態(tài)性與SLE主要臨床特征潛在的易感性關(guān)聯(lián)，結(jié)果顯示在552例SLE患者中以上各位點(diǎn)的基因型與面部紅斑、光敏感、口腔潰瘍、狼瘡腎炎、關(guān)節(jié)炎和神經(jīng)損害均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)聯(lián)（P0.05）。 （6）Meta分析結(jié)果：包括本次實(shí)驗(yàn)研究在內(nèi)，總共8個(gè)研究納入了Meta分析， 結(jié)果發(fā)現(xiàn)3個(gè)位點(diǎn)rs2234767、rs1800682和rs763110等位基因的分布在SLE病例組和對(duì)照組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。 結(jié)論研究結(jié)果顯示，F(xiàn)AS基因rs2234767位點(diǎn)多態(tài)性可能與中國(guó)漢族人群SLE遺傳易感性有關(guān)，rs2234767和rs1800682構(gòu)建的單倍型GA可能增加SLE的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)；Meta分析研究發(fā)現(xiàn)FAS基因rs2234767和rs1800682及FASLG基因rs763110SNPs位點(diǎn)多態(tài)性可能與不同人群的SLE疾病遺傳易感性有關(guān)聯(lián)。 第二部分FAS和FASLG基因mRNA水平與系統(tǒng)性紅斑狼瘡的相關(guān)性研究 目的比較SLE患者組和正常對(duì)照組、SLE腎炎組和非腎炎組以及活動(dòng)期SLE患者組和非活動(dòng)期SLE患者組，F(xiàn)AS和FASLG基因mRNA表達(dá)水平的差異，分析其與SLE臨床與實(shí)驗(yàn)室特征以及疾病活動(dòng)度的關(guān)聯(lián)，并探討FAS和FASLG基因多態(tài)性與mRNA水平之間的關(guān)系。 方法隨機(jī)選取研究一的SLE病例35例和正常對(duì)照34例。參照SLE疾病活動(dòng)指數(shù)、美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)1997年修訂的SLE分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)，收集病例的臨床和實(shí)驗(yàn)室資料。采集研究對(duì)象外周血，提取RNA，采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（real timequantitative polymerase chain reaction，RTQ-PCR）技術(shù)檢測(cè)PBMC中FAS和FASLG基因mRNA表達(dá)水平，利用Mann-Whitney秩和檢驗(yàn)比較在SLE病例組和對(duì)照組間是否存在差異。Spearman相關(guān)分析FAS和FASLG基因mRNA表達(dá)水平與SLEDAI評(píng)分的關(guān)系。采用SPSS10.01軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，P0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果 （1）FAS mRNA表達(dá)水平：RTQ-PCR結(jié)果顯示SLE患者PBMC中FAS mRNA表達(dá)水平高于正常對(duì)照水平（P=0.011），活動(dòng)期SLE患者組高于非活動(dòng)期患者組（P=0.045），然而狼瘡腎炎組與非狼瘡腎炎組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。 （2）FASLG mRNA表達(dá)水平：RTQ-PCR結(jié)果顯示SLE患者PBMC中FASLGmRNA表達(dá)水平與正常對(duì)照水平相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05），狼瘡腎炎組高于非狼瘡腎炎組（P=0.015），然而活動(dòng)期SLE患者組與非活動(dòng)期患者組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。 （3）FAS和FASLG mRNA表達(dá)水平與SLE主要臨床特征的關(guān)系：分析結(jié)果顯示SLE患者FAS mRNA表達(dá)與面部紅斑（P=0.041）和發(fā)熱（P=0.016）有關(guān)， SLE患者FASLG mRNA表達(dá)與皮疹（P=0.023）和面部紅斑（P=0.029）有關(guān)；而對(duì)SLE患者FAS和FASLG mRNA水平與主要實(shí)驗(yàn)室特征之間的研究均未發(fā)現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)聯(lián)（P0.05）。 （4）FAS和FASLG基因多態(tài)性與mRNA水平的關(guān)系：將69名研究對(duì)象FAS基因位點(diǎn)rs2234767和rs1800682以及FASLG基因位點(diǎn)rs763110的基因分型結(jié)果，按3個(gè)位點(diǎn)的基因型分組比較mRNA表達(dá)水平，結(jié)果均未顯示統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 結(jié)論SLE患者FAS mRNA表達(dá)水平升高，且活動(dòng)期患者表達(dá)水平高于非活動(dòng)期患者。FAS mRNA和FASLG mRNA表達(dá)水平與部分臨床特征有關(guān)。但未發(fā)現(xiàn)FAS（rs2234767，rs1800682）和FASLG（rs763110）多態(tài)性與mRNA水平的關(guān)聯(lián)。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類(lèi)號(hào)】：R593.241
【目錄】：

英文縮略詞表5-6

中文摘要6-12

Abstract12-18

第一部分 FAS 和 FASLG 基因多態(tài)性與系統(tǒng)性紅斑狼瘡的相關(guān)性研究18-52

1 前言18-20

2 材料與方法20-30

3 結(jié)果30-45

4 討論45-51

5 結(jié)論51-52

第二部分 FAS 和 FASLG 基因 mRNA 水平與系統(tǒng)性紅斑狼瘡的相關(guān)性研究52-76

1 前言52-53

2 材料與方法53-60

3 結(jié)果60-71

4 討論71-75

5 結(jié)論75-76

參考文獻(xiàn)76-87

附錄87-90

致謝90-91

綜述91-110

參考文獻(xiàn)102-110

附件110-111

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【相似文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：重癥急性胰腺炎SIRS時(shí)pMΦ吞噬凋亡PMN功能異常的分子機(jī)制及中西醫(yī)結(jié)合治療，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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