紅波羅花堿A(Delavatine A)是一種從紫葳科角蒿屬植物紅波羅花(Incarvillea delavayi)中分離的含有異喹啉并環(huán)烷新型骨架的生物堿類化合物。經(jīng)課題組前期的活性篩選發(fā)現(xiàn),Delavatine A對顱腦創(chuàng)傷造成的星形膠質(zhì)細(xì)胞過度活化具有抑制作用,對腫瘤細(xì)胞的增值也具有一定的抑制作用。目前尚未有其它活性的報道。缺血性腦卒中是由于腦部血管阻塞導(dǎo)致血液不能流入大腦而引起的腦組織損傷的急性腦血管疾病,其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,興奮性神經(jīng)毒性作用、神經(jīng)炎癥、能量代謝障礙、半暗帶去極化及細(xì)胞凋亡等都共同參與了缺血性腦卒中的病理變化過程�？紤]到Delavatine A在前期篩選中表現(xiàn)出的可能的神經(jīng)保護(hù)作用,我們在本課題中對Delavatine A在谷氨酸誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞損傷、LPS誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞活化方面進(jìn)行了體外神經(jīng)保護(hù)作用研究,并對Delavatine A在大鼠缺血再灌注損傷模型的保護(hù)作用進(jìn)行了研究。1.神經(jīng)保護(hù)作用的細(xì)胞篩選。首先在多個細(xì)胞水平,采用谷氨酸損傷模型,考察Delavatine A對細(xì)胞存活率、LDH釋放、細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞凋亡以及凋亡蛋白的影響。分別采用CCK-8法、LDH...

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞英漢注釋表
第一章 緒論
    1.1 興奮性神經(jīng)毒性理論
    1.2 神經(jīng)炎癥反應(yīng)
    1.3 NF-ΚB信號通路
    1.4 本課題的立題依據(jù)和研究意義
第二章 Delavatine A抑制興奮性神經(jīng)毒性的研究
    2.1 實驗材料與儀器
        2.1.1 實驗細(xì)胞株
        2.1.2 實驗試劑
        2.1.3 實驗儀器
    2.2 實驗方法
        2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.2 Delavatine A對PC12、SH-SY5Y細(xì)胞的細(xì)胞毒作用
        2.2.3 Delavatine A對Glu損傷神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)作用
        2.2.4 Delavatine A對Glu引起的興奮性神經(jīng)毒性中鈣穩(wěn)態(tài)的影響
        2.2.5 Delavatine A對Glu引起的興奮性神經(jīng)毒性中氧化應(yīng)激反應(yīng)的影響.
    2.3 統(tǒng)計分析
    2.4 實驗結(jié)果與討論
        2.4.1 Delavatine A對PC12、SH-SY5Y細(xì)胞的細(xì)胞毒作用
        2.4.2 Delavatine A對Glu損傷PC12、SH-SY5Y細(xì)胞的保護(hù)作用
        2.4.3 Delavatine A減少Glu損傷細(xì)胞LDH的釋放
        2.4.4 熒光顯微鏡觀察Delavatine A對Glu損傷PC12細(xì)胞的保護(hù)作用
        2.4.5 Delavatine A降低Glu損傷PC12細(xì)胞的凋亡率
        2.4.6 Delavatine A調(diào)控凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)
        2.4.7 Delavatine A減少Ca²⁺內(nèi)流以維持細(xì)胞內(nèi)鈣穩(wěn)態(tài)
        2.4.8 Delavatine A維持PC12細(xì)胞線粒體膜電位正常
        2.4.9 Delavatine A不具備體外化學(xué)還原性
        2.4.10 Delavatine A減少細(xì)胞內(nèi)ROS的產(chǎn)生
        2.4.11 Delavatine A增強(qiáng)細(xì)胞內(nèi)GSH和SOD的活力
    2.5 本章小結(jié)
第三章 Delavatine A 對LPS誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞的神經(jīng)炎癥作用研究
    3.1 實驗材料與儀器
        3.1.1 實驗細(xì)胞株
        3.1.2 實驗試劑
        3.1.3 實驗儀器
    3.2 實驗方法
        3.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        3.2.2 Delavatine A作用于BV-2細(xì)胞的適宜濃度范圍
        3.2.3 Delavatine A對BV-2細(xì)胞NO分泌的影響
        3.2.4 ELISA法檢測Delavatine A對上清液中炎癥因子TNF-α、IL-6、IL-1β的影響
        3.2.5 RT-PCR檢測Delavatine A對細(xì)胞TNF-α、IL-6、IL-1βmRNA的影響
        3.2.6 Delavatine A對炎癥相關(guān)通路蛋白的影響
    3.3 統(tǒng)計分析
    3.4 實驗結(jié)果與討論
        3.4.1 Delavatine A作用于BV-2細(xì)胞的適宜濃度范圍
        3.4.2 Delavatine A減少LPS刺激下小膠質(zhì)細(xì)胞NO的分泌
        3.4.3 Delavatine A減少LPS刺激下小膠質(zhì)細(xì)胞炎癥因子的分泌
        3.4.4 Delavatine A減少LPS刺激下小膠質(zhì)細(xì)胞炎癥因子的mRNA水平
        3.4.5 Delavatine A通過下調(diào)iNOS、COX-2的表達(dá)以減少NO的分泌
        3.4.6 Delavatine A通過影響NF-κB信號通路IκBα和p65蛋白以調(diào)控炎癥因子的表達(dá)
    3.5 本章小結(jié)
第四章 Delavatine A治療缺血性腦卒中的作用研究
    4.1 實驗材料與儀器
        4.1.1 實驗動物
        4.1.2 實驗用具及耗材
        4.1.3 實驗試劑
    4.2 實驗方法
        4.2.1 Delavatine A作用于SD大鼠的適宜濃度范圍
        4.2.2 實驗分組與給藥方案
        4.2.3 大鼠MCAO模型的制備
        4.2.4 神經(jīng)行為學(xué)評分
        4.2.5 TTC法染色
    4.3 統(tǒng)計分析
    4.4 實驗結(jié)果與討論
        4.4.1 Delavatine A作用于SD大鼠的適宜濃度范圍
        4.4.2 Delavatine A改善大鼠腦缺血再灌注后的神經(jīng)行為學(xué)評分
        4.4.3 Delavatine A改善大鼠腦缺血再灌注后的腦梗死體積
    4.5 本章小結(jié)
第五章 總結(jié)與展望
    5.1 主要研究成果
    5.2 研究創(chuàng)新點
    5.3 工作展望
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表論文



本文編號：3807696