【摘要】：目的:通過腹主動脈縮窄法建立射血分?jǐn)?shù)保留心衰(heart failure with preserved ejection fraction,HFpEF)大鼠模型,探討順心組方干預(yù)HFpEF大鼠作用及機(jī)制。方法:1.建立HFpEF大鼠模型:48只雄性SD大鼠隨機(jī)分為正常組8只、假手術(shù)組8只、造模組32只。通過縮窄大鼠腹主動脈方法,建立HFpEF大鼠模型。術(shù)后三個月,超聲檢測大鼠心功能,評價模型是否成功。2.順心組方干預(yù)HFpEF大鼠作用的觀察:將32只HFpEF大鼠隨機(jī)分為模型組8只、順心組方大劑量組8只、順心組方小劑量組8只和芪藶強(qiáng)心膠囊組8只,每天以順心組方3 ml/100g、1 ml/100g和芪藶強(qiáng)心膠囊1 ml/100g分別給予順心組方大劑量組、順心組方小劑量組和芪藶強(qiáng)心膠囊組大鼠灌胃,連續(xù)給藥14天。檢測各組大鼠心功能;腹主動脈采血分離血清,處死大鼠,分離心臟、腎臟和腦并稱重,計算心臟指數(shù);每只大鼠切取部分心室組織,做石蠟切片,進(jìn)行HE染色和Masson染色,觀察心肌細(xì)胞形態(tài)和膠原纖維變化;電鏡觀察心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu);ELISA法測定血清NT-proBNP。3.靶點預(yù)測:利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)預(yù)測順心組方各組成中藥作用于cGMP-PKG信號通路的靶點,結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)資料確定所要檢測靶點。4.順心組方干預(yù)HFpEF大鼠機(jī)制研究:將預(yù)測靶點NPRA和GC用免疫組化法檢測,eNOS、PDE5A和PKG I用免疫印跡法檢測。結(jié)果:1.造模術(shù)后三個月各組大鼠心功能:與正常組比較,造模組大鼠IVSd、PWd、E/A增高(P0.05);各組大鼠LVEF無統(tǒng)計學(xué)差異;表明成功建立HFpEF大鼠模型。2.藥物干預(yù)后:與正常組比較,模型組IVSd、PWd、E/A值均增高(P0.01);與模型組比較,順心組方大劑量組、順心組方小劑量組和芪藶強(qiáng)心膠囊組的IVSd、PWd均降低(P0.01),順心組方大劑量組E/A值降低(P0.01)。與正常組比較,模型組心臟指數(shù)增大(P0.05)。HE染色示,與模型組比較,順心組方大劑量組、順心組方小劑量組和芪藶強(qiáng)心膠囊組心肌細(xì)胞排列較整齊。Masson染色可見,與正常組相比,模型組CVF增大(P0.05)。電鏡觀察心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu),模型組可見部分肌原纖維斷裂,部分肌節(jié)溶解,肌原纖維內(nèi)部分肌絲排列疏松,心肌閏盤解離,部分線粒體腫大破裂,而順心組方大劑量組、順心組方小劑量組、芪藶強(qiáng)心膠囊組的肌原纖維和線粒體損傷較模型組輕。血清NT-proBNP檢測結(jié)果,與正常組相比,模型組NT-proBNP增高(P0.05)。3.網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)預(yù)測,確定的靶點有NPRA、GC、eNOS、PDE5A、PKG I。4.免疫組化檢測心肌NPRA、GC的結(jié)果:與正常組比較,模型組心肌NPRA、GC表達(dá)減少(P0.01);與模型組比較,順心組方小劑量組和芪藶強(qiáng)心膠囊組心肌NPRA、GC表達(dá)增多(P0.01)。WB檢測eNOS、PKG I、PDE5A的結(jié)果:與正常組比較,模型組eNOS、PKG I表達(dá)降低(P0.01),PDE5A表達(dá)增高(P0.01);與模型組比較,順心組方大劑量組eNOS表達(dá)增多(P0.01),PKG I表達(dá)增多(P0.05),順心組方大劑量組、順心組方小劑量組和芪藶強(qiáng)心膠囊組心肌PDE5A表達(dá)均減少(P0.01)。結(jié)論:順心組方可以有效改善HFpEF大鼠的心臟舒張功能;其機(jī)制是通過上調(diào)心肌細(xì)胞cGMP-PKG信號通路的NPRA、GC、eNOS表達(dá),使cGMP表達(dá)增多,下調(diào)PDE5A表達(dá),減少cGMP降解,使cGMP持續(xù)作用于PKG I靶點,逆轉(zhuǎn)心肌肥厚,有效改善HFpEF大鼠的心肌順應(yīng)性。
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5
【圖文】：

圖 1-1 腹主動脈縮窄手術(shù)流程圖.2.4 術(shù)后三個月檢測大鼠心功能造模術(shù)后三個月檢測大鼠心功能，以評價模型是否成功。檢測大鼠心臟收能，左室長軸切面，M 型超聲，檢測 IVSd（interventricular septal thickness at iastole，舒張末室間隔厚度 ）、LVDd、PWd （posterior wall thickness at iastole，舒張末左室后壁的厚度）、LVDs、IVSs （interventricular septal thicknt end systole，收縮末室間隔厚度）、PWs（posterior wall thickness at end systo縮末左室后壁的厚度）、LVEF、HR；檢測大鼠心臟舒張功能，心尖四腔面沖多普勒記錄 A 值（二尖瓣舒張早期血流峰值）和 E 值（二尖瓣舒張晚期峰值）及 E/A。超聲圖像采集由兩名經(jīng)驗豐富的超聲科醫(yī)師完成。

圖 1-2 小動物超聲儀、心尖四腔面.3 統(tǒng)計方法采用 SPSS 21 統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x±s）表示組間比較用獨立樣本 t 檢驗，多組間比較用方差分析。P<0.05，差異有統(tǒng)計義。.4 實驗結(jié)果.4.1 術(shù)前大鼠體重和腹主動脈直徑的測量術(shù)前各組大鼠體重和腹主動脈直徑的差異無統(tǒng)計學(xué)意義。表 1-3 大鼠體重與腹主動脈直徑組 大鼠（只） 術(shù)前體重（g） 腹主動脈直徑（m

注：A：正常組；B：假手術(shù)組；C：造模組。圖 1-3 術(shù)前各組大鼠心功能檢測表 1-4 術(shù)前大鼠心功能檢測結(jié)果（ x ±s）指標(biāo) 正常組 假手術(shù)組 造模組LVDd(mm) 4.56±0.34 4.54±0.42 4.56±0.33LVDs(mm) 1.64±0.41 1.85±0.32 1.90 0.33LVEF(%) 0.94±0.03 0.93±0.02 0.92±0.03FS(%) 0.64±0.09 0.60 0.04 0.58±0.06HR(次/min) 362±37 331±34 354±271.4.3 術(shù)后三個月檢測大鼠心功能

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