【摘要】：目的研究莪術含藥血清調節(jié)瘦素(leptin)活化的大鼠肝星狀細胞(HSCs)中刺猬(hedgehog,Hh)信號途徑和Wnt信號途徑相關因子表達的機制。方法將30只清潔級sprague-dawley(SD)大鼠,按隨機數(shù)字表法,均分3組。分別給予莪術水煎劑、秋水仙堿、生理鹽水灌胃取血制備含藥血清。用高效液相色譜法(HPLC),測定莪術含藥血清中莪術的有效成分。體外培養(yǎng)大鼠HSCs,分為8組:空白組、模型(leptin)組、Hh通路抑制劑(Cyclopamine)組、莪術組、Cyclopamine+莪術組、Hh通路激動劑(Purmorphamine)組、Purmorphamine+莪術組、秋水仙堿組。除空白組外,其余各組均給予0.1μg/m L leptin誘導后,各組再給予相應藥物干預24 h,收集細胞。MTT法檢測HSCs增殖情況,RT-PCR法檢測Shh、Gli1、SFRP1、β-catenin的m RNA表達,Western blot檢測Shh、Gli1、SFRP1、β-catenin蛋白表達,免疫熒光檢測Gli1和β-catenin在不同組別HSCs中的表達。結果同空白組相比,用leptin活化HSCs后,Shh、Gli1、β-catenin表達均顯著上調(均P0.01),SFRP1表達顯著下調(P0.01)。同模型(leptin)組相比,Cyclopamine、莪術含藥血清、秋水仙堿分別干預后,Shh、Gli1、β-catenin表達均顯著下調(均P0.01),SFRP1表達顯著上調(P0.01);莪術含藥血清與Cyclopamine協(xié)同干預后,Shh、Gli1、β-catenin表達顯著下調(均P0.01),SFRP1表達顯著上調(P0.01);Purmorphamine干預后,Shh、Gli1、β-catenin表達顯著上調(均P0.01),SFRP1表達顯著下調(P0.01)。同Purmorphamine組相比,用莪術含藥血清干預Purmorphamine組后,Shh、Gli1、β-catenin表達顯著下調(均P0.01),SFRP1表達顯著上調(P0.01)。結論莪術含藥血清能調控leptin誘導活化的大鼠HSCs中Hh途徑和Wnt途徑相關因子的表達,而抑制HSCs的增殖。
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5
【圖文】：

A.姜黃素、莪術醇混合標準品；B.莪術含藥血清；C.空白血清；1.姜黃素；2.莪術醇圖 1 姜黃素、莪術醇混合標準品、莪術含藥血清及空白血清的 HPLC 圖Fig.1 HPLC chromatograms of hybrid reference substance, ezhu drug-containingserumand normal saline serum3.2 莪術含藥血清對 HSCs 增殖抑制情況實驗結果：同空白組相比，模型(leptin)組 OD 值顯著增高(P＜0.01)。同模leptin)組相比，Hh 通路抑制劑(Cyclopamine)組、莪術組、Cyclopamine+莪術組 O均顯著降低(均 P＜0.01)；秋水仙堿組的 OD 值明顯降低(P＜0.05)；Hh 通路激(Purmorphamine)組OD值顯著增高(P＜0.01)。同 Hh通路激動劑（Purmorphamin相比，Purmorphamine+莪術組的 OD 值顯著降低(P＜0.01)。（見表 1）表 1 不同組別 HSCs 的增殖抑制情況( ±s, n=6)Tab.1 Proliferation inhibition of HSCs in different groups ( ±s, n=6)組別 劑量 OD 值

Cyclopamine+莪術 20 μmol/L+6.25 g/kg 0.372±0.007**0.742±0.031**Hh 通路激動劑(Purmorphamine) 1 μmol/L 0.696±0.011**1.985±0.043**Purmorphamine+莪術 1 μmol/L+6.25 g/kg 0.556±0.008△△1.724±0.027△△秋水仙堿 0.1 mg/kg 0.541±0.012**1.755±0.040**圖 2 圖 3

圖 8 圖 9圖 6-9：不同組別 HSCs 中 Shh、Gli1、SFRP1、β-catenin 蛋白表達情況Fig.6-9 The expression of Shh,Gli1,SFRP1,β-catenin protein in different groups of HSCs注：1.空白組；2.模型(leptin)組；3.Hh 通路抑制劑(Cyclopamine)組；4.莪術組；5.Cyclopamine+莪術組；6.Hh通路激動劑(Purmorphamine)組；7.Purmorphamine+莪術組；8.秋水仙堿組3.4 不同組別 HSCs 中 Gli1、β-catenin 免疫熒光表達結果顯示：用紅色熒光標記 Gli1 蛋白；綠色熒光標記β-catenin 蛋白。同空白組相比，模型(leptin)組和 Hh 通路激動劑(Purmorphamine)組 Gli1、β-catenin 在 HSCs中呈高表達。同模型(leptin)組相比，Hh 通路抑制劑(Cyclopamine)組、莪術組、Cyclopamine+莪術組、秋水仙堿組 Gli1、β-catenin 表達明顯減弱。同 Hh 通路激動劑(Purmorphamine)組相比，Purmorphamine+莪術組 Gli1、β-catenin 表達明顯減弱。（見圖 10-11）。表 6 不同組別 HSCs 中 Gli1 and β-catenin 的免疫熒光表達

【參考文獻】

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本文編號：2785687