�、蛐蛦渭儼捳畈《�(Herpes simplex virus type Ⅱ,HSV-Ⅱ)的膜糖蛋白G(HSV-Ⅱ gG)在生物合成過程中被切割為兩個片段,然而,HSV-Ⅱ gG蛋白的切割位點迄今未被實驗測定。HSV-Ⅱ gG上帶有大量的糖基化,然而糖基修飾在蛋白鏈上的分布還沒有詳細的實驗確定。在本研究中,中國倉鼠卵巢細胞(CHO細胞)重組表達的HSV-Ⅱ gG的胞外區(qū)(HSV-Ⅱ gG ECD)的兩個切割產(chǎn)物(一個39kD,一個64kD)被用串聯(lián)液相色譜-質(zhì)譜(LC/MS)進行肽圖分析。LC/MS肽圖分析顯示,39kD的產(chǎn)物是HSV-Ⅱ gG ECD蛋白切割后的N端片段,LC/MS肽圖分析可以確定HSV-Ⅱ gG ECD的肽鏈切割點在第335位氨基酸。親和層析和蛋白免疫印跡實驗顯示64kD產(chǎn)物是HSV-Ⅱ gG ECD蛋白切割后的C端片段。對兩個片段的糖基化分析顯示,39kD和64kD蛋白產(chǎn)物帶有相似程度的N-連接的糖基修飾(各片段帶兩個N-連接的糖基化),而O-連接的糖基化僅發(fā)生在64kD片段上,而且糖基化程度非常高(幾乎相當于該段蛋白鏈本身的分子量)。本研究的結(jié)果支持HSV-Ⅱ gG...

【文章頁數(shù)】：10 頁

【文章目錄】：
材料與方法
    1穩(wěn)定表達HSV-II gG-ECD的CHO細胞株的篩選
    2 SDS-PAGE、Western Blot和LC/MS肽圖分析
    3HSV-II gG ECD的39kD和64kD蛋白產(chǎn)物的純化
    4HSV-II gG-ECD的蛋白產(chǎn)物的肽糖苷酶F(PNGase F）消化
    5HSV-II gG-ECD的蛋白產(chǎn)物的O-連接糖基化的檢驗
結(jié)果
    1 CHO細胞表達的HSV-II gG ECD
    2HSV-II gG ECD兩個蛋白產(chǎn)物的液-質(zhì)肽譜分析
    3 HSV-II gG ECD的39kD和64kD蛋白產(chǎn)物的N-連接糖基化
    4HSV-II gG ECD的切割產(chǎn)物的O-連接的糖基化
討論



本文編號：3805611