本文關(guān)鍵詞：母鼠圍生期雙酚A暴露對子代Th17細胞的影響及維生素D補充的改善效應(yīng)

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【摘要】：研究背景人工合成化學(xué)物雙酚A（BisphenolA，BPA）是合成聚碳酸酯和環(huán)氧樹脂的主要單體，工業(yè)上廣泛應(yīng)用于奶瓶、食品和飲料包裝材料等人類日常生活用品，醫(yī)療設(shè)備以及熱敏紙等的制造。隨著需求量的逐漸增加，BPA已經(jīng)成為世界上高產(chǎn)量化學(xué)物之一。在酸性環(huán)境或加熱情況下，BPA會從這些物品中釋放出來，經(jīng)消化道、呼吸道和皮膚等多種途徑進入人體，人群調(diào)查顯示人類已廣泛暴露于環(huán)境BPA。作為一種已公認的環(huán)境內(nèi)分泌干擾化學(xué)物（environmentalendocrine disrupting chemical，EDC），BPA具有弱雌激素活性，可以對包括內(nèi)分泌、神經(jīng)行為、生殖發(fā)育等產(chǎn)生不良影響，對人類健康造成極大威脅。近年來，有研究顯示圍生期母體BPA暴露對子代出生后免疫功能有明顯影響，如改變CD4+T細胞亞群輔助性T細胞（help T cell，Th）1和Th2的平衡，減少調(diào)節(jié)性T細胞（T regulation cell，Treg cell）數(shù)量等。Th17細胞是近年來新發(fā)現(xiàn)的一類CD4+T細胞亞群，通過分泌促炎細胞因子IL-17等發(fā)揮作用，參與炎癥、自身免疫性疾病和腫瘤等的發(fā)生和發(fā)展。然而，到目前為止，圍生期BPA暴露對出生后子代Th17細胞有何影響尚無報道。 維生素D是機體生長發(fā)育所必需的一類維生素，研究顯示維生素D在免疫應(yīng)答中也發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用，可以抑制Th17細胞的增殖和分化。維生素D對BPA誘導(dǎo)的Th17改變有何調(diào)節(jié)作用目前還不清楚，但這對BPA免疫危害的防治具有重要意義。 研究目的通過檢測圍生期飲水?dāng)z入不同劑量BPA母鼠所生子代出生后不同時期脾臟Th17細胞數(shù)量、特異性轉(zhuǎn)錄因子維甲酸相關(guān)孤兒核受體（retinoic acidrelated orphan receptor gamma t，RORγt）mRNA水平和血清中白介素（interleukin，IL）-6、IL-17、IL-21、IL-23、轉(zhuǎn)化生長因子-β（transforming growth factor-β，TGF-β）含量，探討母鼠圍生期BPA暴露對子代出生后Th17細胞的影響。通過檢測圍生期飲水暴露上述高劑量BPA且腹腔注射補充不同劑量維生素D的母鼠所生子代出生后不同時期上述指標的改變，探討維生素D補充對母鼠圍生期BPA暴露所致子代Th17細胞影響的改善效應(yīng)。 研究方法選用8周齡ICR雌鼠和9周齡ICR雄鼠飼養(yǎng)于清潔級動物房，，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，交配查到陰栓確認為受孕。將孕鼠分為空白對照組、溶劑對照組、10nM BPA組、100nM BPA組、1000nM BPA組、1000nM BPA+0.25μg/kg維生素D組、1000nMBPA+1μg/kg維生素D組、1000nM BPA+4μg/kg維生素D組。母鼠自孕第一天（gestation day0，GD0）至斷乳（postnatal day21，PND21）每天經(jīng)飲水暴露BPA，同時每天經(jīng)腹腔注射給予BPA高劑量組母鼠一次維生素D。在子代PND21、PND42時，采集外周血，酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）檢測血清IL-6、IL-17、IL-21、IL-23、TGF-β含量；處死小鼠，雌雄各半，無菌取脾臟，采用流式細胞儀（flow cytometry，F(xiàn)CM）檢測脾臟Th17細胞數(shù)量，并以CD4+細胞中IL-17+細胞所占的比例表示。實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（realtime-quantitative polymerase chain reaction，RT-qPCR）檢測Th17細胞特異轉(zhuǎn)錄因子RORγt mRNA表達水平，用SPSS13.0統(tǒng)計軟件包對實驗結(jié)果進行統(tǒng)計分析。 結(jié)果 1一般情況試驗期間各組孕鼠一般情況良好，在孕期未觀察到死亡、流產(chǎn)、死胎和死產(chǎn)現(xiàn)象。孕期各組母鼠體重增長差異無統(tǒng)計學(xué)意義；出生后至斷乳時各組子鼠的平均窩仔數(shù)、平均體重沒有統(tǒng)計學(xué)差異；PND42時BPA高劑量組體重高于空白對照組（P0.05），斷乳后其余各組間體重均無統(tǒng)計學(xué)意義。 2母鼠圍生期飲水?dāng)z入BPA對子代Th17細胞的影響 2.1對子代Th17細胞分化等相關(guān)指標表達的影響 PND21和PND42時，空白對照組和溶劑對照組相比，子鼠脾臟Th17數(shù)量和RORγt mRNA水平、血清IL-6、TGF-β和IL-23水平差異均沒有統(tǒng)計學(xué)意義；除血清TGF-β水平外，其他指標均隨BPA暴露劑量的增加而升高；與對照組相比，除血清TGF-β水平外，BPA中、高劑量組其他指標均升高（P0.05，P0.01）。PND42時，除血清TGF-β水平外，BPA中、高劑量組其他指標較PND21時有所下降，BPA低劑量組RORγt mRNA水平也較PND21時有所降低，但差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。相關(guān)性分析顯示，脾臟Th17細胞數(shù)量與RORγt mRNA表達水平、血清中IL-6、IL-23含量均存在顯著正相關(guān)（r=0.771，0.818，0.795，P0.05）。 2.2對子代Th17細胞特征性細胞因子分泌的影響 在PND21和PND42時，兩個對照組血清IL-17水平差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義；血清IL-17水平隨BPA劑量的增加而升高。PND21時，BPA中劑量和高劑量組IL-17水平顯著高于對照組（P0.01）；PND42時，BPA中劑量組高于對照組（P0.05），BPA高劑量組明顯高于對照組（P0.01）。PND42時各BPA暴露組血清IL-17水平較PND21時有所降低，但差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義。相關(guān)性分析顯示，脾臟Th17細胞數(shù)量與血清中IL-17含量均存在顯著正相關(guān)（r=0.855，P0.05）。 2.3對子代Th17細胞擴增相關(guān)細胞因子分泌的影響 在PND21和PND42時，兩個對照組血清IL-21水平差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義；血清IL-21水平隨BPA劑量的增加而升高。PND21時，BPA低劑量組血清IL-21水平高于對照組（P0.05），中劑量和高劑量組血清IL-21水平顯著高于對照組（P0.01）；PND42時，BPA中、高劑量組血清IL-21水平明顯高于對照組（P0.05）。PND42時，BPA各組血清IL-21水平較PND21時有所降低，但差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義。相關(guān)性分析顯示，脾臟Th17細胞數(shù)量與血清中IL-21含量均存在顯著正相關(guān)（r=0.709，P0.05）。 3維生素D補充對母鼠圍生期BPA暴露所致子代Th17細胞相關(guān)指標增加的影響 3.1對子代Th17細胞分化等相關(guān)指標表達增強的影響 母鼠腹腔注射不同劑量維生素D對圍生期1000nM BPA暴露引起的子代脾臟Th17細胞數(shù)量和RORγt mRNA表達水平、血清IL-6和IL-23水平上升具有抑制作用，且呈現(xiàn)一定的劑量反應(yīng)關(guān)系。在PND21和PND42時，與1000nM BPA組比較，維生素D中、高劑量補充組上述四個指標明顯下降，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05，P0.01）；與空白對照組相比，除PND42時維生素D中劑量組IL-23外，維生素D低、中劑量補充組上述指標明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.01，P0.05），僅維生素D高劑量補充組升高不明顯，差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義。腹腔注射不同劑量維生素D對圍生期1000nM BPA暴露母鼠所生子代PND21和PND42時TGF-β水平影響不明顯，各組之間差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義。 3.2對子代Th17細胞特征性細胞因子分泌增強的影響 腹腔注射不同劑量維生素D對母鼠圍生期1000nM BPA暴露引起的IL-17水平上升具有抑制作用，且呈現(xiàn)一定的劑量反應(yīng)關(guān)系。PND21時，與1000nM BPA組比較，維生素D中、高劑量補充組IL-17水平下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05，P0.01）；與對照組相比，維生素D低劑量補充組IL-17水平明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.01）；與空白對照組相比，維生素D中劑量補充組升高（P0.05）；而與對照組相比，維生素D高劑量補充組IL-17水平升高不明顯，差異已沒有統(tǒng)計學(xué)意義。PND42時，與1000nM BPA組比較，維生素D中、高劑量補充組IL-17水平明顯下降，差異具有統(tǒng)計學(xué)差異（P0.01）；與對照組相比，維生素D低劑量補充組IL-17水平升高（P0.05），而維生素D中、高劑量補充組IL-17水平升高不明顯，差異已沒有統(tǒng)計學(xué)意義。 3.3對子代Th17細胞擴增相關(guān)細胞因子分泌增強的影響 腹腔注射不同劑量維生素D對母鼠圍生期1000nM BPA暴露引起的子代血清IL-21水平上升具有抑制作用，且呈現(xiàn)一定的劑量反應(yīng)關(guān)系。PND21時，維生素D中劑量組和維生素D高劑量組兩指標高于BPA高劑量組（P0.05），且維生素D高劑量組更加明顯（P0.01）。維生素D低劑量組和維生素D中劑量組兩指標顯著高于空白對照組（P0.01，P0.05）。PND42時，維生素D低劑量組IL-21水平顯著高于空白對照組（P0.01），維生素D中劑量組IL-21水平高于空白對照組（P0.05），維生素D各組IL-21水平與BPA高劑量組差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)論 1母鼠圍生期經(jīng)水?dāng)z入BPA對子代出生后不同時期Th17細胞有顯著的影響，導(dǎo)致Th17細胞數(shù)量升高、特異性轉(zhuǎn)錄因子RORγt mRNA表達上調(diào)、血清Th17細胞分泌和功能相關(guān)的細胞因子IL-6、IL-17、IL-21、IL-23含量增高。 2維生素D補充對母鼠圍生期BPA暴露引起的子代Th17細胞改變具有顯著的影響，維生素D可抑制母鼠BPA暴露所致子代Th17細胞上述指標的升高。3. BPA可能通過促進Th17細胞增殖和分化的細胞因子分泌，上調(diào)特異性轉(zhuǎn)錄因子表達，從而增加Th17細胞的數(shù)量和其分泌的細胞因子水平。
【關(guān)鍵詞】：雙酚A 維生素D Th17細胞 發(fā)育免疫毒性
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R114
【目錄】：

• 中文摘要5-10
• Abstract10-16
• 引言16-19
• 材料與方法19-23
• 結(jié)果23-49
• 討論49-53
• 結(jié)論53
• 參考文獻53-60
• 個人簡歷60-61
• 致謝61-62
• 綜述62-74
• 參考文獻68-74

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 石文標;謝明;侯水生;黃葦;喻俊英;;維生素D生物學(xué)效價研究的一些新進展[J];動物營養(yǎng)學(xué)報;2012年11期

2 焦鳳茹;孫秀娟;龐振濤;;雙酚A市場分析[J];化學(xué)工業(yè);2008年09期

3 周建烈;毛絢霞;顧景范;;維生素D膳食參考攝入量的再評估[J];生理科學(xué)進展;2009年01期

本文編號：995714