本文關(guān)鍵詞：赭曲霉毒素模擬抗原表位及phage ELISA的建立

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【摘要】：本研究以驢抗鼠二抗包被微孔板,然后進一步包被抗赭曲霉毒素A(OTA)單克隆抗體,利用噬菌體隨機七肽庫篩選赭曲霉毒素A模擬抗原表位,并以其替代檢測抗原建立了phage ELISA檢測OTA方法。實驗結(jié)果顯示篩選獲得的OTA7肽模擬氨基酸序列為GMSWMMA;基于模擬表位噬菌體建立的phage ELISA方法檢測OTA的IC50值為0.145±0.018 ng/mL,線性范圍為0.03~0.50 ng/mL,檢測下限為0.020 ng/mL,且與其它四種常見真菌毒素無交叉反應;大米樣品OTA加標實驗結(jié)果顯示批Qg加標回收率為96.95%~115.2%,批間加標回收率為107.23%~123.13%;將phage ELISA與商業(yè)化的ELISA試劑盒檢測結(jié)果進行統(tǒng)計學分析,顯示無顯著性差異。以上結(jié)果顯示本研究建立的phage ELISA可用于赭曲霉毒素A的快速篩查。
【關(guān)鍵詞】：赭曲霉毒素A 噬菌體展示肽庫 模擬表位
【學位授予單位】：江西師范大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R155.5
【目錄】：

• 縮略語(Abbreviations)3-4
• 摘要4-5
• ABSTRACT5-8
• 第一章 文章綜述8-22
• 1.1 赭曲霉毒素A及其研究進展8-14
• 1.1.1 OTA的理化性質(zhì)8
• 1.1.2 OTA毒性作用及其機理8-10
• 1.1.3 OTA在谷物中的污染狀況10-11
• 1.1.4 OTA的殘留限量標準11
• 1.1.5 OTA的常用脫毒方法11-12
• 1.1.6 OTA的分析檢測方法12-14
• 1.2 噬菌體展示技術(shù)及其在真菌毒素安全檢測中的應用14-20
• 1.2.1 噬菌體展示簡介及系統(tǒng)的原理14-15
• 1.2.2 噬菌體展示技術(shù)的分類15-17
• 1.2.3 噬菌體展示技術(shù)在食品中真菌毒素的研究運用17-20
• 1.3 主要研究內(nèi)容、目的和意義20-22
• 1.3.1 本研究的目的和主要研究內(nèi)容20-21
• 1.3.2 本研究的意義21-22
• 第二章 赭曲霉毒素A模擬表位的淘選22-29
• 2.1 實驗試劑與儀器22-23
• 2.1.1 試驗試劑22
• 2.1.2 試驗所需溶液和培養(yǎng)基22-23
• 2.1.3 試驗儀器23
• 2.2 實驗方法23-25
• 2.2.1 OTA抗原模擬的生物淘選23-24
• 2.2.2 競爭ELISA篩選OTA抗原模擬表位24-25
• 2.2.3 陽性克隆的測序25
• 2.3 實驗結(jié)果25-27
• 2.3.1 噬菌體的生物淘選的產(chǎn)率25-26
• 2.3.2 OTA抗原模擬表位的鑒定26-27
• 2.3.3 測序結(jié)果27
• 2.4 小結(jié)與討論27-29
• 第三章 Phage ELISA方法的建立29-39
• 3.1 實驗試劑和儀器29
• 3.1.1 試驗試劑29
• 3.1.2 試驗所需溶液29
• 3.1.3 試驗儀器29
• 3.2 實驗方法29-31
• 3.2.1 棋盤法確定抗體包被濃度和噬菌體投入量29-30
• 3.2.2 phage ELISA體系的優(yōu)化30
• 3.2.3 繪制phage ELISA競爭抑制曲線30-31
• 3.2.4 Phage ELISA性能評價31
• 3.3 實驗結(jié)果31-38
• 3.3.1 抗體包被濃度和噬菌體投入量的確定31-32
• 3.3.2 ELISA條件優(yōu)化32-35
• 3.3.3 直接競爭ELISA標準抑制曲線35
• 3.3.4 Phage ELISA方法性能評價35-38
• 3.4 小結(jié)與討論38-39
• 3.4.1 確定phage ELISA的工作條件38
• 3.4.2 成功繪制標準曲線38
• 3.4.3 建立了phage ELISA檢測OTA38-39
• 結(jié)論與展望39-40
• 參考文獻40-46
• 致謝46-47
• 在讀期間公開發(fā)表論文（著）及科研情況47

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 郭延奎,牛鐘相,孫蕙蘭;赭曲霉毒素A中毒雞肝臟超微結(jié)構(gòu)的觀察[J];華南農(nóng)業(yè)大學學報;1992年S1期

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本文編號：671256