本文關(guān)鍵詞：無細胞百日咳純化抗原中Triton X-100殘留量檢測方法的建立及驗證

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【摘要】：目的建立高效液相色譜法(high performance liquid chromatography,HPLC)檢測無細胞百日咳純化抗原中Triton X-100殘留量,并對該方法進行驗證及初步應(yīng)用。方法 HPLC條件:Agilent SB 300 C18色譜柱(規(guī)格:4.6 mm×250 mm,5μm);流動相:純化水與甲醇的體積比為20㑳80;檢測波長:225 nm;色譜柱溫:30℃;流速:0.8 ml/min;進樣量:10μl。對方法的系統(tǒng)適應(yīng)性、專屬性、線性、準確性、精密性、耐用性及定量限進行驗證,并用建立的方法檢測6批無細胞百日咳純化抗原中的Triton X-100殘留量。結(jié)果該方法檢測6份10μg/ml Triton X-100的理論塔板數(shù)在1 550~1 580之間,Triton X-100峰面積和保留時間的相對標準偏差(relative standard deviation,RSD)分別為2.59%和0.04%;12μg/ml的Triton X-100溶液和無細胞百日咳純化抗原樣品中,Triton X-100能與其他物質(zhì)完全分離;在2~30μg/ml范圍內(nèi),Triton X-100濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系(r2=0.999 01);該方法檢測不同濃度Triton X-100樣品的加標回收率均在98%~102%之間,RSD均不超過2%;同一實驗人員在不同工作日和不同檢測人員在同一工作日用該方法檢測供試品中Triton X-100含量的RSD均小于4%;改變流動相的甲醇比例和柱溫后,6次檢測值的RSD分別為0.95%和0.51%;定量限可達0.5μg/ml。該方法檢測6批無細胞百日咳純化抗原中的Triton X-100殘留量均較低。結(jié)論建立的HPLC法系統(tǒng)適應(yīng)性、專屬性、線性、準確性、精密性、耐用性良好,可用于無細胞百日咳純化抗原中Triton X-100殘留量的定量檢測。
【作者單位】： 成都生物制品研究所有限責任公司;
【關(guān)鍵詞】： 高效液相色譜 無細胞百日咳抗原 Triton X-
【基金】：“重大新藥創(chuàng)制”專項“疫苗綜合性技術(shù)研究開發(fā)大平臺建設(shè)”課題下所屬的子課題(2013ZX09402302-005)
【分類號】：R186
【正文快照】： 無細胞百日咳疫苗抗原純化方法的改進涉及使用非離子型去垢劑Triton X-100,因此,需對其在該制品中的殘留量進行檢測。目前已報道的Triton X-100檢測方法有化學熒光法[1]、毛細管電泳法、比色法和高效液相色譜法[2]�；瘜W熒光法和毛細管電泳法不適用于含大分子抗原和吸附劑的疫

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【共引文獻】

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【相似文獻】

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