本文關(guān)鍵詞：PKC調(diào)控NMDAR在鋁致大鼠學習記憶損傷中的作用機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:通過急性側(cè)腦室和亞慢性腹腔注射染鋁,探討PKC調(diào)控NMDAR在鋁對大鼠學習記憶損傷中的作用機制。方法:1.急性側(cè)腦室染毒(1)動物的分組及處理:(1)大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后,采用隨機數(shù)字表法按體質(zhì)量隨機分為5組,即手術(shù)對照組、生理鹽水組、4mmol/L Al(mal)3組、16mmol/L Al(mal)3組、64mmol/LAl(mal)3組,每組10只。手術(shù)組不采取處理措施,生理鹽水組組、低、中和高劑量組分別側(cè)腦室給藥5μl,并在5分鐘之內(nèi)勻速緩慢注入,染毒七天,建立急性染鋁模型;(2)大鼠隨機分為5組,即手術(shù)對照組、生理鹽水組、PMA組、染鋁組(64mmol/L Al(mal)3組)、PMA+染鋁組,每組10只。生理鹽水組、PMA組、染鋁組、PMA+染鋁組分別注射5μl生理鹽水、PMA、64mmol/L Al(mal)3和PMA+Al(mal)3,染毒七天,研究PKC在鋁致大鼠學習記憶損傷的作用。(2)大鼠染毒結(jié)束后Morris水迷宮檢測大鼠學習記憶能力,分為定位航行實驗(學習能力)和空間探索實驗(記憶能力);曠場檢測大鼠對陌生環(huán)境的適應(yīng)能力。(3)免疫印跡法(Western-blot)檢測大鼠海馬組織中PKC、NMDAR1、NMDAR2A、NMDAR2B、CaMKII、Phospho-CaMKII(Thr286)蛋白的相對表達水平。(4)實時熒光定量聚合酶鏈法(RT-PCR)檢測大鼠海馬組織NMDAR1、NMDAR2A、NMDAR2B mRNA的表達。2.亞慢性腹腔注射染毒(1)動物的分組及處理:50只雄性SD大鼠隨機分為空白組、溶劑對照組、15mmol/L Al(mal)3組、30mmol/L Al(mal)3組、60mmol/L Al(mal)3組,腹腔注射染毒2個月,空白組不做任何處理。(2)免疫印跡法(western-blot)檢測大鼠海馬組織中pkc、nmdar1、nmdar2a、nmdar2b、camkii、phospho-camkii(thr286)蛋白的相對表達水平。(3)實時熒光定量聚合酶鏈法(rt-pcr)檢測大鼠腦組織nmdar1、nmdar2a、nmdar2bmrna的表達。結(jié)果:1.急性側(cè)腦室染毒(1)morris水迷宮檢測結(jié)果:(1)定位導航實驗結(jié)果顯示隨著訓練天數(shù)的增加,各組大鼠的逃避潛伏期逐漸縮短,5個時點間逃避潛伏期差異有統(tǒng)計學意義(p0.05);在每天的訓練中,各組大鼠的逃避潛伏期隨著染毒劑量的增加而增加,從第2天開始,各劑量組大鼠尋找平臺的潛伏期比手術(shù)對照組明顯延長,并且差異具有統(tǒng)計學意義(p0.01),染毒劑量與染毒時間不存在交互作用(f=0.692,p=0.833)�？臻g探索實驗顯示:高劑量組大鼠第一次穿越平臺時間比手術(shù)對照組高出68.12%,目標象限停留時間下降了23.9%(p0.05),各組大鼠穿越平臺次數(shù)沒有顯著性差異。曠場實驗結(jié)果:與空白組、手術(shù)組和生理鹽水組相比,高劑量組大鼠在中央格的停留時間明顯延長,高劑量組比手術(shù)對照組高出56.5%(p0.05),站立次數(shù)和修飾次數(shù)分別下降了36.8%和37.9%(p0.05)。(2)與染鋁組相比,注射pkc激動劑后,大鼠第一次穿越平臺次數(shù)降低了34.8%(p0.05),目標象限停留時間增加了26.9%(p0.05)。曠場結(jié)果顯示:與染鋁組相比,染鋁+pma組中央格停留時間、站立次數(shù)及修飾次數(shù)之間均無明顯差異(p0.05)。(2)免疫印跡法檢測大鼠海馬組織中pkc、camkii、phospho-camkii(thr286)和nmda受體各亞基,結(jié)果顯示:(1)nr1、nr2b隨著染毒劑量的增加呈下降趨勢。與對照組相比,高劑量組nr1和nr2b的表達量分別下降了29.9%和32.9%,且差異具有統(tǒng)計學意義(p0.05);nr2a雖也呈下降趨勢,但是差異無統(tǒng)計學意義(p=0.537)。高劑量組pkc和phospho-camkii(thr286)的表達下降了20.9%和34.7%(2)pma單獨作用并未對nmda受體各亞基產(chǎn)生影響,但與染鋁組相比,注射pma后nr1及nr2b的表達水平分別增加了34.9%和34.3%;注射pkc激動劑后,pkc表達增加了15.8%,與染鋁組比較,染鋁+pma組的pkc和phospho-CaMKII(Thr286)蛋白表達水平可恢復23.5%和40.2%。(3)基因檢測結(jié)果:(1)隨著染毒劑量增加,各組大鼠NR1、NR2A基因的表達水平逐漸下降,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),與手術(shù)對照組相比,高劑量組NR1、NR2A分別下降的48%和32%(P0.05),NR2B也呈下降趨勢,但無顯著性差異(P=0.537)。2.亞慢性腹腔注射染毒(1)Western-blot結(jié)果顯示:隨著染毒劑量的增加,NR1、NR2A、NR2B的蛋白水平呈下降趨勢,與空白對照組相比,高劑量組NR1、NR2A、NR2B的表達分別下降22.0%、29.7%、29.8%(P0.05)。PKC、Phospho-CaMKII(Thr286)的蛋白表達水平隨著染毒劑量的增加逐漸降低,高劑量組比空白對照組分別下降了29.3%和31.5%.(2)NR1和NR2A的基因水平下降了一半以上(P0.05),NR2B的基因無明顯變化。結(jié)論:1.側(cè)腦室染鋁可以損傷大鼠學習記憶,損傷程度隨著染毒劑量的增加而加重;2.急性染鋁引起NMDAR2B蛋白的改變不是由于轉(zhuǎn)錄水平改變引起的,主要是由于PKC調(diào)控修飾NR2B引起的,在亞慢性腹腔染毒中進一步得到證實;3.鋁引起學習記憶損傷與NMDA受體表達改變有關(guān),可能是由于鋁進入腦組織后,抑制PKC的轉(zhuǎn)位與激活,影響NMDA受體通道開放及NMDAR/CaMKII復合物的形成,從而損傷學習記憶。
【關(guān)鍵詞】：鋁 NMDA受體 PKC CaMKII 學習記憶
【學位授予單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R114
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 常用縮寫詞中英文對照表13-14
• 前言14-19
• 參考文獻17-19
• 第一部分 PKC調(diào)控NMDA受體在急性染鋁對大鼠學習記憶損傷中的作用19-43
• 1 材料與方法19-27
• 1.1 實驗材料19-22
• 1.2 實驗方法22-27
• 2 結(jié)果27-43
• 一、急性染鋁對大鼠學習記憶及NMDA受體的影響27-36
• 2.1 急性染毒期間大鼠一般情況27
• 2.2 急性染毒對大鼠學習記憶的影響（Morris水迷宮結(jié)果）27-31
• 2.3 曠場試驗31-32
• 2.4 急性染鋁對大鼠海馬組織中PKC、CaMKII、Phospho-CaMKII(Thr286)及NMDA受體各亞基蛋白表達的影響32-34
• 2.5 急性染鋁對大鼠海馬組織中NR1、NR2A、NR2BmRNA的影響34-36
• 二、PKC在鋁引起NMDA受體表達改變中的作用機制36-43
• 2.6 水迷宮結(jié)果37-39
• 2.7 曠場結(jié)果39-40
• 2.8 各組大鼠海馬組織中PKC、CaMKII、Phospho-CaMKII(Thr286)及NMDA受體各亞基的表達水平40-43
• 第二部分 亞慢性染毒對大鼠腦組織NMDA受體的影響43-49
• 1 材料與方法43-44
• 1.1 實驗材料43
• 1.2 實驗方法43-44
• 2 結(jié)果44-49
• 2.1 亞慢性染毒期間大鼠一般情況44
• 2.2 各組大鼠腦組織中PKC、CaMKII、Phospho-CaMKII(Thr286)及NMDA受體各亞基蛋白表達水平44-45
• 2.3 測定大鼠腦組織中NMDA受體各亞基mRNA表達情況45-49
• 討論49-54
• 結(jié)論54-55
• 參考文獻55-58
• 綜述58-64
• 參考文獻61-64
• 致謝64-65
• 在學期間承擔/參與的科研課題與研究成果65-66
• 個人簡歷66

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中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王卉;;Research on the relationship between NR3A subunit of NMDAR and brain hypoxia and ischemia[J];中國藥理學與毒理學雜志;2012年03期

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本文編號：411419