本文關(guān)鍵詞：淡色庫蚊抗氯氰菊酯機理及防治研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：淡色庫蚊(Culex pipiens pallens)是我國騷擾性家棲優(yōu)勢蚊種,主要分布在中國的中東部和北部地區(qū),是乙型腦炎、班氏絲蟲病和西尼羅病毒的傳病媒介。目前控制蚊子危害主要依賴于化學(xué)合成殺蟲劑,其中以擬除蟲菊酯類殺蟲劑廣泛使用的殺蟲劑,但是它們的大量使用,使許多害蟲陸續(xù)產(chǎn)生了抗藥性,并逐漸出現(xiàn)交互抗性、多重抗性,甚至出現(xiàn)聯(lián)合抗性,深入研究抗性的分子和生理生化機理對于建立高敏感的抗性檢測方法和制定綜合防治措施具有重要意義。本研究的主要內(nèi)容包括以下五個方面:對本實驗室飼養(yǎng)的淡色庫蚊幼蟲和成蚊的抗性測定;對淡色庫蚊Na+通道不同結(jié)構(gòu)域片段ⅠS6、ⅡS4-S6、ⅡS全長片段和ⅢS6的基因克隆;比較不同齡期與性別的蚊蟲體內(nèi)羧酸酯酶(Car E)、谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶(GSTs)、O-脫甲基酶和乙酰膽堿酯酶(ACh E)的酶活力測定;最后通過氯氰菊酯和溴蟲腈的單劑,以及與PBO復(fù)配來測定對淡色庫蚊的生物防治效果。對淡色庫蚊的幼蟲和成蚊的生物測試中,處理24h后,CR品系幼蟲和成蚊點滴及接觸筒的抗性系數(shù)分別為376.79、22.98和62.73,呈顯著性差異,已達(dá)到較高的抗藥性水平。通過查找相關(guān)序列設(shè)計擊倒抗性(kdr)引物,成功克隆除了Na?通道不同結(jié)構(gòu)域的基因片段,分別為333bp的ⅠS6基因片段、371bp的ⅡS4-6基因片段、701bp的ⅡS基因片段和666bp的ⅢS6基因片段。按照推定的氨基酸差異只在ⅡS4-S6和ⅢS6,ⅠS6并無氨基酸的差異,其中ⅡS4-S6是已發(fā)現(xiàn)的突變位點,并與蚊蟲抗藥性有關(guān),但在ⅢS6并沒有報道存在本實驗克隆的突變位點,該位點是否與抗藥性有關(guān)以及相關(guān)性情況如何還需進(jìn)一步進(jìn)行功能方面的深入細(xì)致的研究。無論是CR品系還是SS品系,隨著齡期的增長,蛋白質(zhì)含量升高,在蛹期蛋白質(zhì)含量為最高,為13.22μg/μl和14.17μg/μl。兩種品系的蛋白質(zhì)含量在幼蟲和蛹期無差異,成蚊有差異,CR品系均高于SS品系,且雌成蚊均高于雄成蚊。對蚊蟲的酶活力測定,在幼蟲期,Car E和O-脫甲基酶的比活力,CR品系高于SS品系;在蛹期,Car E、O-脫甲基酶和GSTs的比活力,CR品系顯著高于SS品系;在雌成蚊中,這3種酶CR品系均高于SS品系,另外還發(fā)現(xiàn)ACh E也有差異;在雄成蚊中,也發(fā)現(xiàn)O-脫甲基酶和GSTs比活力差異顯著。齡期不同,每種品系的酶活力有差異,分化的性別不同,也呈現(xiàn)了某些酶活力的差異。對淡色庫蚊幼蟲和成蚊具有亞致死劑量的增效醚(PBO)濃度,其結(jié)果選擇的幼蟲幼蟲浸漬法的增效醚濃度為100ppm、成蚊點滴法為0.2%和WHO接觸筒法為10%。氯氰菊酯與PBO復(fù)配的對淡色庫蚊SS品系和CR品系的幼蟲的增效呈顯著性差異,24h的增效系數(shù)為6.97和115.32,成蚊點滴法的為3.62和18.26,WHO接觸筒法的為3.94和443.64。溴蟲腈是一種慢效低毒的殺蟲劑,觀察時間大約在72h。作為單劑使用時,對兩種品系的藥效相當(dāng),處理72h后,幼蟲的抗性系數(shù)為1.2,成蚊點滴法為1.23,成蚊接觸筒法為1.33,無統(tǒng)計差異。氯氰菊酯與具有亞致死劑量的PBO復(fù)配時,SS品系和CR品系幼蟲24h后的的增效系數(shù)為6.97和115.32,成蚊點滴法的為3.62和18.26,成蚊WHO接觸筒法的為3.94和443.64,增效作用均呈顯著性差異,表明PBO對氯氰菊酯具有明顯的增效作用。溴蟲腈與PBO復(fù)配后,幼蟲和成蚊均出現(xiàn)拮抗作用,表明溴蟲腈與氯氰菊酯對淡色庫蚊無交互抗性,顯示了對抗氯氰菊酯淡色庫蚊較好的防治效果。將氯氰菊酯與溴蟲腈復(fù)配,測定復(fù)配試劑對淡色庫蚊的共毒力,0.5ppm的氯氰菊酯與0.01ppm和0.02ppm的溴蟲腈復(fù)配,淡色庫蚊CR品系出現(xiàn)拮抗作用,因此可以通過不同類型殺蟲劑復(fù)配或復(fù)配增效劑,從而控制疾病載體的蚊蟲的防治。
【關(guān)鍵詞】：淡色庫蚊 氯氰菊酯 增效醚 擊倒抗性 酶活力 溴蟲腈
【學(xué)位授予單位】：上海師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R184.31
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 第1章 綜述11-18
• 1.1 淡色庫蚊的生物學(xué)特點11-12
• 1.2 抗藥性機理12-15
• 1.3 抗藥性防治15-16
• 1.4 研究的目的意義和內(nèi)容16-18
• 第2章 淡色庫蚊抗氯氰菊酯水平的生物測定18-24
• 2.1 引言18
• 2.2 實驗材料與試劑儀器18
• 2.3 實驗方法18-19
• 2.4 實驗結(jié)果與分析19-22
• 2.5 結(jié)論22-24
• 第3章 淡色庫蚊的Na~+通道不同結(jié)構(gòu)域的基因片段的克隆24-37
• 3.1 引言24-25
• 3.2 實驗材料與試劑儀器25-27
• 3.3 實驗方法27-32
• 3.3.1 淡色庫蚊總RNA的提取27
• 3.3.2 反轉(zhuǎn)錄為c DNA27-28
• 3.3.3 Na+通道結(jié)構(gòu)域ⅠS6片段、ⅡS4-S6片段、ⅡS全長片段和ⅢS6片段的基因克隆28-32
• 3.4 實驗結(jié)果與分析32-35
• 3.5 結(jié)論35-37
• 第4章 淡色庫蚊體內(nèi)水解酶活性的測定37-51
• 4.1 引言37
• 4.2 實驗材料與試劑儀器37-39
• 4.3 實驗方法39-44
• 4.3.1 蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線制作39-40
• 4.3.2 淡色庫蚊4齡幼蟲、蛹、雌成蚊和雄成蚊蛋白含量的測定40
• 4.3.3 不同齡期與性別的淡色庫蚊Car E活力測定40-41
• 4.3.4 不同齡期與性別的淡色庫蚊GSTs活力測定41-42
• 4.3.5 不同齡期與性別的淡色庫蚊O-脫甲基酶活力測定42-43
• 4.3.6 不同齡期與性別的淡色庫蚊ACh E活力測定43-44
• 4.4 實驗結(jié)果與分析44-49
• 4.5 結(jié)論49-51
• 第5章 氯氰菊酯抗性淡色庫蚊的防治研究51-59
• 5.1 引言51
• 5.2 實驗試劑51
• 5.3 實驗方法51-53
• 5.3.1 PBO濃度選擇51-52
• 5.3.2 氯氰菊酯與PBO復(fù)配對淡色庫蚊的防治效果52
• 5.3.3 溴蟲腈單劑對淡色庫蚊的防治效果52
• 5.3.4 溴蟲腈與PBO復(fù)配對淡色庫蚊的防治效果52
• 5.3.5 溴蟲腈與氯氰菊酯復(fù)配對淡色庫蚊的防治效果52-53
• 5.4 實驗結(jié)果與分析53-57
• 5.5 結(jié)論57-59
• 第6章 結(jié)論與展望59-61
• 6.1 通過研究得出的結(jié)論59-60
• 6.2 展望60-61
• 參考文獻(xiàn)61-65
• 攻讀學(xué)位期間取得的研究成果65-66
• 致謝66

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：淡色庫蚊抗氯氰菊酯機理及防治研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：392492