本文關(guān)鍵詞：QO-58lysine鹽大鼠長(zhǎng)期毒性及相伴毒代動(dòng)力學(xué)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：QO-58是新開發(fā)的吡唑并嘧啶酮類鉀通道開放劑,對(duì)鈉通道有抑制作用,藥效學(xué)初步研究提示其有抗驚厥、抗癲癇和鎮(zhèn)痛等作用。QO-58原藥水溶性較差,為提高其溶解性,制成了賴氨酸鹽即QO-58lysine。為了評(píng)價(jià)QO-58lysine鹽的臨床前安全性,本研究將進(jìn)行其長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)及相伴毒代動(dòng)力學(xué)研究,為進(jìn)一步開發(fā)成新藥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。第一部分QO-58lysine鹽大鼠長(zhǎng)期毒性研究目的:觀察連續(xù)灌胃給予SD大鼠QO-58lysine鹽化合物4周的長(zhǎng)期毒性反應(yīng),為進(jìn)一步的研發(fā)工作提供參考。方法:SD大鼠80只,6-7周齡,體重180~220g,雌雄各半,試驗(yàn)前適應(yīng)性飼養(yǎng)和檢疫1周。試驗(yàn)時(shí)按性別、體重隨機(jī)分成4組,每組20只,雌雄分籠飼養(yǎng)。供試品分成小、中、大三個(gè)劑量組,分別為66、200、600mg/kg,對(duì)照組給予0.5%的CMC-Na溶媒。以上動(dòng)物全部灌胃給藥,灌胃容積為2ml/100g體重,每日給藥1次,每周給藥7天,連續(xù)4周。給藥期間,每日觀察動(dòng)物外觀體征、行為活動(dòng),每周測(cè)量一次體重、攝食量并計(jì)算攝食量/體重。末次給藥后24h各組剖殺12只動(dòng)物(雌雄各半),觀察各組給藥后血液學(xué)指標(biāo)及血液生化指標(biāo)的變化,并進(jìn)行大體解剖和組織病理學(xué)檢查,對(duì)心臟、肝臟、肺臟、脾臟、腎臟、腎上腺、胸腺、睪丸、附睪、子宮、卵巢、腦等進(jìn)行剝離稱重并計(jì)算臟器系數(shù),停藥恢復(fù)2周后,各組剖殺剩余動(dòng)物,進(jìn)行上述檢查。試驗(yàn)數(shù)據(jù)的處理和統(tǒng)計(jì)分析采用Excel2003和SPSS 13.0軟件。結(jié)果:1一般觀察:QO-58lysine鹽連續(xù)給藥4周及停藥恢復(fù)2周,動(dòng)物外觀體征、行為活動(dòng)與溶媒對(duì)照組基本一致;給藥4周內(nèi)及停藥2周后,各劑量組體重、攝食量和攝食量/體重與對(duì)照組相比均無明顯差異。2血液學(xué)檢查:QO-58lysine鹽小、中、大劑量連續(xù)給藥4周,與對(duì)照組相比,小劑量組單核細(xì)胞百分比(MO%)和凝血酶原時(shí)間(PT)明顯升高(P0.05),紅細(xì)胞平均血紅蛋白(MCH)明顯降低(P0.05),停藥2周后,MO%仍偏高(P0.05),其他參數(shù)恢復(fù)正常;中劑量組各項(xiàng)指標(biāo)無顯著差異(P0.05);大劑量組MO%和PT明顯升高(P0.05),恢復(fù)2周中性粒細(xì)胞百分比(NE%)明顯降低(P0.05)和血小板計(jì)數(shù)(PLT)明顯增大(P0.05)。由于MO的升高有劑量依賴關(guān)系,提示動(dòng)物可能伴有炎癥反應(yīng)。3血液生化學(xué)檢查:QO-58lysine鹽小、中、大劑量連續(xù)給藥4周,與對(duì)照組相比,小劑量組總膽紅素(T-BIL)顯著升高(P0.01)、白蛋白(ALB)降低(P0.05);中劑量組天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、肌酸激酶(CK)、血清鉀離子(K+)濃度、氯離子(Cl-)濃度明顯降低(P0.05或0.01),T-BIL、血糖(GLU)明顯升高(P0.01,P0.05);大劑量組T-BIL明顯升高(P0.01),CK明顯降低(P0.05),其它指標(biāo)無顯著性改變。停藥2周后,小、中、大三個(gè)劑量組生化指示基本恢復(fù)正常,僅AST、CK有顯著降低(P0.05),這種改變認(rèn)為無生物學(xué)意義。4臟器重量及臟器系數(shù):QO-58lysine鹽小、中、大劑量連續(xù)給藥4周后,各劑量組各臟器重量與對(duì)照組相比無明顯差異,僅大劑量組雄性動(dòng)物脾臟重量系數(shù)明顯降低(P0.05)。停藥2周后,與對(duì)照組相比,小劑量組雌性動(dòng)物腎臟重量明顯減少(P0.05),中劑量組雄性動(dòng)物腎上腺重量明顯增加(P0.05),大劑量組雄性動(dòng)物心臟重量明顯增加(P0.05)和雌性動(dòng)物脾臟重量明顯增加(P0.05);小劑量組雄性動(dòng)物心臟重量系數(shù)明顯減小(P0.05),大劑量組雌性動(dòng)物脾臟重量系數(shù)明顯增高(P0.05)。5病理學(xué)檢查結(jié)果:QO-58lysine鹽小、中、大劑量連續(xù)給藥4周后,對(duì)照組動(dòng)物出現(xiàn)不同程度氣管和肺炎細(xì)胞浸潤(rùn)、脾臟髓外造血,個(gè)別出現(xiàn)肝臟、心臟和腎臟的病變。給藥組大鼠小、中、大三個(gè)劑量組也均出現(xiàn)脾臟髓外造血(58.3%-83.3%),氣管炎細(xì)胞浸潤(rùn)(58.3%-91.7%),肺部支氣管炎性改變(25%-58.3%),從發(fā)生率和發(fā)生的程度上與對(duì)照比較沒有明顯差別。停藥2周后,上述病變均已減輕或消失。由于上述改變亦見于對(duì)照組,且無劑量依賴關(guān)系,認(rèn)為可能與給藥操作有關(guān),均非藥物因素所致。結(jié)論:QO-58lysine鹽連續(xù)給藥4周,各組均出現(xiàn)氣管、肺的炎性變化,認(rèn)為可能與灌胃操作有關(guān),未見明顯的藥源性毒性發(fā)現(xiàn)。但給藥組出現(xiàn)的總膽紅素呈劑量依賴性升高和心臟重量增大,提示在以后的研究中需要引起注意。第二部分QO-58lysine鹽大鼠相伴毒代動(dòng)力學(xué)研究目的:研究SD大鼠單次及多次(4周)灌胃給予QO-58lyine鹽化合物的毒代動(dòng)力學(xué),分析機(jī)體血藥濃度變化規(guī)律及體內(nèi)蓄積分布情況。方法:1 SD大鼠80只,6-7周齡,體重180~220g,雌雄各半,試驗(yàn)前適應(yīng)性飼養(yǎng)和檢疫1周以確保無異常。試驗(yàn)時(shí)按性別、體重隨機(jī)分成4組,各組均為20只,雌雄分籠飼養(yǎng)。給藥劑量及給藥方式與長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)一致。給藥第一天,每組隨機(jī)取10只大鼠(雌雄各半)做單次毒代動(dòng)力學(xué),在給藥前(0h)及藥后1 h、5 h、10 h、15 h、24h、48h共7個(gè)時(shí)間點(diǎn)采用內(nèi)眥連續(xù)取血。取完最后一個(gè)點(diǎn)的血后剖殺并取主要臟器:心臟、肝臟、肺臟、脾臟、腎臟、胃臟、肌肉、腦、脂肪、膀胱、睪丸和子宮,勻漿后測(cè)各組織中藥物是否仍有分布。剩下的40只大鼠,與長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)同期連續(xù)灌胃給藥4周。末次給藥前(0h)及藥后1 h、5 h、10 h、15 h、24h、48h共7個(gè)時(shí)間點(diǎn)采用內(nèi)眥連續(xù)取血。取完最后一個(gè)點(diǎn)的血后剖殺取主要臟器:心臟、肝臟、肺臟、脾臟、腎臟、胃臟、肌肉、腦、脂肪、膀胱、睪丸和子宮,勻漿測(cè)各組織中藥物是否仍有分布。2采用HPLC-MS/MS法測(cè)QO-58lysine鹽血藥濃度。LC條件:Phenomenex C18色譜柱(50×2.0 mm,3μm),柱溫為35℃,流動(dòng)相為乙腈-10m M乙酸銨水溶液(53:47),流速為0.3m L·min-1,進(jìn)樣量為5μL;MS條件:電噴霧離子源,正離子電離模式,多反應(yīng)離子監(jiān)測(cè)的MS掃描方式。運(yùn)用DAS3.2.6軟件計(jì)算AUC0-48、Cmax、Tmax等毒代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。結(jié)果:1 QO-58lysine鹽血藥濃度線性范圍為0.05~250mg/L,標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y=135000X-211(r=0.9959),最低定量限為0.05mg/L;低濃度(0.1 mg/L)的日內(nèi)和日間精密度良好,RSD均小于20%,準(zhǔn)確度在±15%以內(nèi),中濃度(25 mg/L)和高濃度(250 mg/L)的日內(nèi)和日間精密度RSD均小于15%,準(zhǔn)確度均在±15%以內(nèi);基質(zhì)效應(yīng)和回收率均符合要求;其常溫放置2h、-20℃儲(chǔ)存15日及反復(fù)凍融3次的穩(wěn)定性良好。2動(dòng)物性別對(duì)藥物峰濃度(Cmax)和藥時(shí)曲線下面積(AUC)無明顯影響,雌雄差別不明顯。各劑量組AUC與給藥劑量呈線性相關(guān)。多次給藥的Cmax和AUC0-48比單次給藥的低,Tmax與單次給藥相比縮短。48h的組織濃度分布結(jié)果顯示,藥物主要?dú)埩粲诟魏湍I,其它主要臟器停藥48h后未見明顯殘留。結(jié)論:本試驗(yàn)第一次用HPLC-MS/MS法測(cè)定了QO-58lysine鹽的毒代參數(shù),該方法專屬性強(qiáng)、靈敏度高、操作簡(jiǎn)便。QO-58lysine鹽比QO-58原藥相近劑量下的Cmax和AUC均明顯增大,說明QO-58lysine鹽經(jīng)口給藥比原藥吸收更好。單次給藥毒代參數(shù)與多次給藥毒代參數(shù)有所不同,提示藥物可能對(duì)肝臟代謝酶有影響。從毒代組織分布結(jié)果和給藥劑量與AUC線性相關(guān)的結(jié)果分析,該藥物沒有引起體內(nèi)蓄積現(xiàn)象。
【關(guān)鍵詞】：QO-58lysine鹽 長(zhǎng)期毒性 毒代動(dòng)力學(xué) HPLC-MS/MS 灌胃 SD大鼠
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R114
【目錄】：

• 中文摘要4-8
• 英文摘要8-14
• 英文縮寫14-16
• 引言16-17
• 第一部分QO-58lysine鹽大鼠長(zhǎng)期毒性研究17-39
• 前言17
• 材料與方法17-19
• 結(jié)果19-21
• 附圖21-26
• 附表26-37
• 討論37-38
• 小結(jié)38
• 參考文獻(xiàn)38-39
• 第二部分QO-58lysine鹽大鼠相伴毒代動(dòng)力學(xué)研究39-55
• 前言39
• 材料與方法39-43
• 結(jié)果43-45
• 附圖45-50
• 附表50-53
• 討論53
• 小結(jié)53-54
• 參考文獻(xiàn)54-55
• 結(jié)論55-56
• 綜述 抗癲癇藥物作用靶點(diǎn)研究新進(jìn)展56-68
• 參考文獻(xiàn)64-68
• 致謝68-69
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷69

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 路蟬伊;劉立雄;張?jiān)品?;癲癇發(fā)病機(jī)制的研究進(jìn)展[J];解放軍醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2014年08期

2 朱亞濤;白宏英;;難治性癲癇治療方法探討[J];中國(guó)醫(yī)學(xué)工程;2014年03期

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 彭毓h，

本文編號(hào)：392430