目的PM2.5經(jīng)呼吸道可直接進(jìn)入支氣管和肺泡深處并在肺泡中沉積。當(dāng)達(dá)到一定量后,能夠引起上呼吸道細(xì)胞和肺泡細(xì)胞發(fā)生炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激反應(yīng),能夠通過(guò)調(diào)控基因的表達(dá)來(lái)調(diào)控蛋白質(zhì)的合成,從而誘導(dǎo)細(xì)胞的凋亡和DNA損傷。本研究旨在探討PM2.5對(duì)人支氣管上皮細(xì)胞(Human bronchial epithelial cells,簡(jiǎn)稱HBE細(xì)胞)細(xì)胞凋亡、DNA損傷和致突變的分子機(jī)制,展開一系列研究,為進(jìn)一步研究PM2.5對(duì)人體毒性提供科學(xué)依據(jù),對(duì)探討大氣細(xì)顆粒物PM2.5致癌致突變的毒理學(xué)作用機(jī)制具有重要意義。方法1、用低劑量10μg/mL和高劑量50μg/mL的PM2.5水溶液對(duì)HBE細(xì)胞染毒,用未染毒的細(xì)胞作為空白照組,同時(shí)設(shè)立10μM的Cr⁶⁺染毒的HBE細(xì)胞為陽(yáng)性對(duì)照組,應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(q-PCR)檢測(cè)凋亡基因Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Bax、Bcl-2的mRNA表達(dá)水平變化,Western blot檢測(cè)凋亡基因Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Bax、Bcl-2的蛋白質(zhì)表達(dá)水平變化。2、用p38...

【文章頁(yè)數(shù)】：95 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第1章 緒論
    1.1 PM2.5 的危害
    1.2 PM2.5 對(duì)HBE細(xì)胞的毒性作用的研究現(xiàn)狀
    1.3 本課題的研究目的、意義與技術(shù)路線
    研究目的
    研究意義
    技術(shù)路線
第2章 PM2.5 對(duì)HBE細(xì)胞凋亡基因表達(dá)水平的影響
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.1 細(xì)胞來(lái)源
        2.2.2 PM2.5 樣品來(lái)源
        2.2.3 主要試劑與耗材
        2.2.4 主要儀器
        2.2.5 常用試劑的配制
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 PM2.5 樣品的處理
        2.3.2 細(xì)胞的培養(yǎng)與處理
        2.3.3 引物的設(shè)計(jì)與合成
        2.3.4 引物擴(kuò)增效率與特異性
        2.3.5 HBE細(xì)胞總RNA的提取
        2.3.6 Q-PCR檢測(cè)凋亡基因的m RNA表達(dá)水平
        2.3.7 HBE細(xì)胞蛋白的提取
        2.3.8 HBE細(xì)胞蛋白的BCA定量
        2.3.9 Western blot檢測(cè)蛋白表達(dá)水平
        2.3.10 統(tǒng)計(jì)分析
    2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.4.1 引物驗(yàn)證
        2.4.2 凋亡基因表達(dá)水平變化
        2.4.3 目的蛋白表達(dá)水平變化
    2.5 討論
第3章 MAPK/PKC信號(hào)通路對(duì)PM2.5 致凋亡基因表達(dá)的影響
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.1 細(xì)胞來(lái)源
        3.2.2 PM2.5 樣品來(lái)源
        3.2.3 主要試劑與耗材
        3.2.4 主要儀器
        3.2.5 常用試劑的配制
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 PM2.5 樣品的處理
        3.3.2 細(xì)胞的培養(yǎng)與處理
        3.3.3 引物的設(shè)計(jì)與合成
        3.3.4 引物擴(kuò)增效率與特異性
        3.3.5 HBE細(xì)胞總RNA的提取
        3.3.6 Q-PCR檢測(cè)凋亡基因的m RNA表達(dá)水平
        3.3.7 HBE細(xì)胞蛋白的提取
        3.3.8 HBE細(xì)胞蛋白的BCA定量
        3.3.9 Western blot檢測(cè) 3β-HSD蛋白表達(dá)水平
        3.3.10 統(tǒng)計(jì)分析
    3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.4.1 p38 MAPK對(duì)凋亡基因m RNA和蛋白表達(dá)水平的影響
        3.4.2 ERK和PKC對(duì)凋亡基因的相對(duì)表達(dá)水平的影響
    3.5 討論
第4章 PM2.5 對(duì)HBE細(xì)胞DNA損傷作用探討
    4.1 引言
    4.2 實(shí)驗(yàn)材料
        4.2.1 細(xì)胞來(lái)源
        4.2.2 PM2.5 樣品來(lái)源
        4.2.3 主要試劑與耗材
        4.2.4 主要儀器
        4.2.5 常用試劑的配制
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 PM2.5 樣品的處理
        4.3.2 細(xì)胞的培養(yǎng)與處理
        4.3.3 引物的設(shè)計(jì)與合成
        4.3.4 引物擴(kuò)增效率與特異性
        4.3.5 HBE細(xì)胞總RNA的提取
        4.3.6 Q-PCR檢測(cè)DNA損傷修復(fù)基因h OGG1和h MTH1的m RNA表達(dá)水平
        4.3.7 HBE細(xì)胞蛋白的提取
        4.3.8 HBE細(xì)胞蛋白的BCA定量
        4.3.9 Western blot檢測(cè) 3β-HSD蛋白表達(dá)水平
        4.3.10 單細(xì)胞凝膠電泳(彗星)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)DNA損傷情況
        4.3.11 統(tǒng)計(jì)分析
    4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.4.1 引物驗(yàn)證
        4.4.2 DNA損傷修復(fù)基因表達(dá)水平變化
        4.4.3 目的蛋白表達(dá)水平變化
        4.4.4 細(xì)胞DNA損傷情況
    4.5 討論
第5章 PM2.5 樣品致突變作用研究
    5.1 引言
    5.2 實(shí)驗(yàn)材料
        5.2.1 PM2.5 樣品來(lái)源
        5.2.2 主要試劑與耗材
        5.2.3 主要儀器
        5.2.4 常用試劑的配制
    5.3 實(shí)驗(yàn)方法
        5.3.1 PM2.5 樣品的處理
        5.3.2 鑒定菌株
        5.3.3 Ames實(shí)驗(yàn)
        5.3.4 統(tǒng)計(jì)分析
    5.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        5.4.1 菌株鑒定結(jié)果
        5.4.2 Ames實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    5.5 討論
第6章 PM2.5 染毒HBE細(xì)胞的基因芯片檢測(cè)分析
    6.1 引言
    6.2 實(shí)驗(yàn)材料
        6.2.1 PM2.5 樣品來(lái)源
        6.2.2 主要試劑與耗材
        6.2.3 主要儀器
        6.2.4 常用試劑的配制
        6.2.5 基因芯片
    6.3 實(shí)驗(yàn)方法
        6.3.1 PM2.5 樣品的處理
        6.3.2 細(xì)胞的培養(yǎng)與處理
        6.3.3 樣本RNA提取和純化
        6.3.4 樣本制備質(zhì)控
        6.3.5 芯片雜交與掃描
        6.3.6 生物信息分析
        6.3.7 引物的設(shè)計(jì)與合成
        6.3.8 Q-PCR驗(yàn)證核心基因的m RNA表達(dá)水平
    6.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        6.4.1 基因的差異表達(dá)與聚類分析
        6.4.2 差異表達(dá)基因的GO功能注釋富集分析
        6.4.3 差異表達(dá)基因的通路富集分析
        6.4.4 差異表達(dá)基因的蛋白交互作用分析
        6.4.5 引物驗(yàn)證
        6.4.6 Q-PCR驗(yàn)證h PHACTR2、h SFRP1、h WFDC1基因表達(dá)水平
    6.5 討論
第7章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間取得的成果
致謝



本文編號(hào)：3877037