[目的]利用大鼠原代培養(yǎng)皮質(zhì)神經(jīng)細胞研究p25/CDK5-p53通路在BaP致神經(jīng)細胞凋亡中作用,探討B(tài)aP致神經(jīng)細胞凋亡的作用機制。 [方法] 1.體外原代大鼠皮質(zhì)神經(jīng)元培養(yǎng)：采用新生1-3天的SD大鼠,在無菌條件下取出大腦皮質(zhì)并用0.25%胰酶消化,以1000個／mm2接種神經(jīng)細胞。在神經(jīng)細胞培養(yǎng)第五天左右,選取生長良好的同批次細胞,以BaP同時加入S9染毒,染毒濃度分別為10、20、40μmol/L并設(shè)空白對照組、溶劑對照(DMSO)組和S9對照組,染毒后繼續(xù)培養(yǎng)觀察,分別于染毒0,6,12,24,48h后處理細胞。 2.①顯微鏡觀察神經(jīng)細胞形態(tài)學(xué)變化,采用MTT法和流式細胞儀分別檢測神經(jīng)細胞活力和凋亡率；②單細胞瓊脂糖凝膠電泳和BPDE-DNA Adduct ELISA試劑盒檢測神經(jīng)細胞DNA損傷情況；③流式細胞儀檢測神經(jīng)細胞活性氧變化情況；④Western-blot法檢測神經(jīng)細胞p25/CDK5-p53通路相關(guān)蛋白calpain、p35/25、 CDK5、p53和p-p53Ser15表達；⑤抑制calpain活性和CDK5活性后,檢測上述相關(guān)指標(biāo)變化情況。⑥RT-PCR檢測c...

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【學(xué)位級別】：碩士

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摘要
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前言
材料與方法
實驗結(jié)果
討論
總結(jié)
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