本文關(guān)鍵詞：低劑量雙酚A通過PPARγ促進(jìn)小鼠3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景在近幾十年里,肥胖患病率全球性快速增加,并呈現(xiàn)持續(xù)升高的狀態(tài)�？茖W(xué)界提出了“環(huán)境致肥胖因子”的假說,環(huán)境致肥胖因子是指能夠引起脂質(zhì)代謝、脂肪儲存、代謝定位點和能量平衡異常,進(jìn)而促進(jìn)脂質(zhì)積累與肥胖的化學(xué)物質(zhì)。越來越多的研究證據(jù)表明環(huán)境內(nèi)分泌干擾物雙酚A(BPA)是一種環(huán)境致肥胖因子,人類可經(jīng)消化道、呼吸和皮膚接觸等途徑暴露BPA。BPA能潛在地影響脂肪細(xì)胞的分化過程和脂肪組織的生物學(xué)功能。很多研究表明低劑量BPA不僅能促進(jìn)脂肪細(xì)胞分化,也能干擾脂肪細(xì)胞分泌脂肪因子和炎癥因子,這對肥胖的炎性病理狀態(tài)的形成有一定的作用。然而BPA暴露對脂肪細(xì)胞的分化及其對脂肪因子和炎癥因子的調(diào)控機(jī)制目前還不清楚。研究目的通過檢測低劑量BPA對分化過程中的小鼠3T3-L1前脂肪細(xì)胞的細(xì)胞增殖率,脂質(zhì)沉積,脂肪因子、炎癥因子以及C/EBP和PPARγ的表達(dá)影響,探討低劑量BPA對小鼠3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化及其轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)的影響;小鼠3T3-L1前脂肪細(xì)胞用PPARγ激動劑和抑制劑預(yù)處理后用BPA處理6天,檢測細(xì)胞中脂質(zhì)沉積、脂肪因子和炎癥因子分泌,探討PPARγ在BPA促進(jìn)小鼠3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化的調(diào)控作用。研究方法體外培養(yǎng)的小鼠3T3-L1前脂肪細(xì)胞90%融合后,用誘導(dǎo)培養(yǎng)基A培養(yǎng)2天,換為誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基B培養(yǎng)至第8天結(jié)束。在開始誘導(dǎo)分化時持續(xù)用10 nmol/L、100 nmol/L或1 000 nmol/L的BPA處理細(xì)胞,并設(shè)空白對照和DMSO溶劑組。在誘導(dǎo)分化第2、4、6、8天,用CCK8測細(xì)胞活率,油紅O染色檢測細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)沉積,ELISA法分析培細(xì)胞上清脂肪因子(瘦素、脂聯(lián)素)和炎性因子(TNF-α、IL6、IL1β)的水平,實時熒光定量PCR法檢測細(xì)胞內(nèi)瘦素、脂聯(lián)素、TNF-α、IL-6、IL-1β、PPARγ和C/EBP m RNA水平,免疫組化法檢測細(xì)胞中PPARγ蛋白表達(dá)。PPARγ對BPA促進(jìn)小鼠前脂肪細(xì)胞分化影響研究中,用1 000 nmol/L BPA處理細(xì)胞時用PPARγ激動劑羅格列酮或抑制劑GW9665同時處理細(xì)胞,誘導(dǎo)分化至第6天;油紅O染色法分析脂肪細(xì)胞脂質(zhì)沉積,ELISA分析上清中脂肪因子和炎性因子水平,實時熒光定量PCR法檢測細(xì)胞中脂肪因子、炎性因子、PPARγ和C/EBP的m RNA表達(dá)水平,免疫組化檢測細(xì)胞中PPARγ蛋白表達(dá)水平。實驗數(shù)據(jù)采用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行錄入和統(tǒng)計分析。結(jié)果1.低劑量BPA對分化過程中的小鼠3T3-L1前脂肪細(xì)胞活率和脂質(zhì)沉積的影響1.1對細(xì)胞活率的影響CCK8結(jié)果顯示,與同時間點空白對照組相比,誘導(dǎo)分化第2天,1 000 nmol/L BPA組細(xì)胞活率顯著增強(qiáng);誘導(dǎo)分化第4、6、8天,BPA處理組細(xì)胞活率下降;第6天時,1 000 nmol/L BPA組細(xì)胞活性下降,差異有統(tǒng)計學(xué)意義;第8天時,100 nmol/L BPA組和1 000 nmol/L BPA組細(xì)胞活性下降,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。1.2對脂質(zhì)沉積的影響油紅O染色顯示,與空白對照組相比,BPA處理組細(xì)胞內(nèi)脂滴含量增多;定量分析顯示,與空白對照組相比,第6天和第8天時,100nmol/L BPA和1 000 nmol/L BPA處理組脂滴明顯增多,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。2.低劑量BPA對分化過程中的小鼠3T3-L1前脂肪細(xì)胞的脂肪因子和細(xì)胞因子分泌的影響與空白對照組相比,第4天時,1 000 nmol/L BPA處理組上清中瘦素、TNF-α、IL-6、IL-1β水平和細(xì)胞中m RNA表達(dá)均升高,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義;第6天和第8天時,100 nmol/L BPA和1 000 nmol/L BPA處理組瘦素、TNF-α、IL-6、IL-1β水平和m RNA表達(dá)明顯升高,而脂聯(lián)素因子水平和m RNA表達(dá)下降,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義。3.低劑量BPA對分化過程中的小鼠3T3-L1前脂肪細(xì)胞中PPARγ和C/EBP表達(dá)的影響與空白對照組相比,第4天時,1 000 nmol/L BPA處理組細(xì)胞中PPARγ和C/EBP m RNA水平升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義;第6天和第8天時,100 nmol/L BPA和1 000 nmol/L BPA組PPARγ和C/EBP m RNA水平均升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。免疫組化檢測顯示PPARγ在細(xì)胞核周圍表達(dá),與空白對照組相比,BPA處理組PPARγ表達(dá)增強(qiáng)。4.PPARγ對BPA促進(jìn)小鼠前脂肪細(xì)胞分化的調(diào)控4.1 PPARγ激動劑對BPA促進(jìn)小鼠3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化的影響與空白對照組相比,羅格列酮組和羅格列酮+1 000 nmol/L BPA組細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)沉積明顯增多,定量分析顯示差異有統(tǒng)計學(xué)意義;上清中瘦素、TNF-α、IL-6、IL-1β水平和細(xì)胞中瘦素、TNF-α、IL-6、PPARγ、C/EBP m RNA表達(dá)均上升,而上清中脂聯(lián)素水平和細(xì)胞中脂聯(lián)素m RNA表達(dá)下降,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。與1000 nmol/L BPA組相比,羅格列酮+1 000 nmol/L BPA組細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)沉積增多,定量分析顯示差異有統(tǒng)計學(xué)意義;上清中瘦素、TNF-α、IL-6水平和細(xì)胞中瘦素、TNF-α、IL-6、PPARγ、C/EBP m RNA表達(dá)均上升,而上清中脂聯(lián)素水平和細(xì)胞中脂聯(lián)素m RNA表達(dá)下降,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。與羅格列酮組相比,羅格列酮+1000 nmol/L BPA組細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)沉積增多,定量析顯示差異無統(tǒng)計學(xué)意義;上清中瘦素、TNF-α、IL-6的表達(dá)升高,但無統(tǒng)計學(xué)意義;細(xì)胞中瘦素、TNF-α、IL-6、PPARγm RNA基因表達(dá)和PPARγ蛋白的表達(dá)均升高,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。4.2 PPARγ抑制劑對BPA促進(jìn)小鼠3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化的影響與空白對照組相比,GW9665組和GW9665+1 000 nmol/L BPA組細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)沉積明顯減少,定量分析顯示差異有統(tǒng)計學(xué)意義;上清中瘦素、TNF-α、IL-6、IL-1β水平和細(xì)胞中瘦素、TNF-α、IL-6、PPARγ、C/EBP m RNA表達(dá)均下降,而上清中脂聯(lián)素水平和細(xì)胞中脂聯(lián)素m RNA表達(dá)升高,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。與1 000nmol/L BPA組相比,GW9665+1 000 nmol/L BPA組細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)沉積明顯減少,定量分析顯示差異有統(tǒng)計學(xué)意義;上清中瘦素、TNF-α、IL-6水平和細(xì)胞中瘦素、TNF-α、IL-6、PPARγ、C/EBP m RNA表達(dá)均下降,而上清中脂聯(lián)素水平和細(xì)胞中脂聯(lián)素m RNA表達(dá)升高,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。與GW9665組相比,GW9665+1 000 nmol/L BPA組細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)沉積變化不明顯,定量析顯示差異無統(tǒng)計學(xué)意義;上清中瘦素、TNF-α、IL-6的表達(dá)稍升高,但差異無統(tǒng)計學(xué)意義;細(xì)胞中瘦素、TNF-α、IL-6、PPARγm RNA基因表達(dá)和PPARγ蛋白的表達(dá)變化也不明顯,差異無統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論1.在體外誘導(dǎo)分化條件下,低劑量BPA促進(jìn)小鼠3T3-L1前脂肪細(xì)胞的分化成熟,上調(diào)轉(zhuǎn)錄因子C/EBP和PPARγ的表達(dá),干擾脂肪因子和炎癥因子的表達(dá)。2.低劑量BPA可能通過PPARγ途徑促進(jìn)體外誘導(dǎo)分化的小鼠3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化成熟。
【關(guān)鍵詞】：雙酚A 小鼠3T3-L1前脂肪細(xì)胞 分化 PPARγ
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R114
【目錄】：

• 中英文縮略詞表5-7
• 摘要7-11
• 英文摘要11-16
• 1.前言16-18
• 2. 材料與方法18-24
• 3. 結(jié)果24-39
• 4. 討論39-44
• 5. 結(jié)論44-45
• 參考文獻(xiàn)45-53
• 附錄53-54
• 致謝54-55
• 綜述55-67
• 參考文獻(xiàn)61-67

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