本文關鍵詞：低劑量雙酚A通過PPARγ促進小鼠3T3-L1前脂肪細胞分化的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景在近幾十年里,肥胖患病率全球性快速增加,并呈現(xiàn)持續(xù)升高的狀態(tài)�？茖W界提出了“環(huán)境致肥胖因子”的假說,環(huán)境致肥胖因子是指能夠引起脂質(zhì)代謝、脂肪儲存、代謝定位點和能量平衡異常,進而促進脂質(zhì)積累與肥胖的化學物質(zhì)。越來越多的研究證據(jù)表明環(huán)境內(nèi)分泌干擾物雙酚A(BPA)是一種環(huán)境致肥胖因子,人類可經(jīng)消化道、呼吸和皮膚接觸等途徑暴露BPA。BPA能潛在地影響脂肪細胞的分化過程和脂肪組織的生物學功能。很多研究表明低劑量BPA不僅能促進脂肪細胞分化,也能干擾脂肪細胞分泌脂肪因子和炎癥因子,這對肥胖的炎性病理狀態(tài)的形成有一定的作用。然而BPA暴露對脂肪細胞的分化及其對脂肪因子和炎癥因子的調(diào)控機制目前還不清楚。研究目的通過檢測低劑量BPA對分化過程中的小鼠3T3-L1前脂肪細胞的細胞增殖率,脂質(zhì)沉積,脂肪因子、炎癥因子以及C/EBP和PPARγ的表達影響,探討低劑量BPA對小鼠3T3-L1前脂肪細胞分化及其轉(zhuǎn)錄因子表達的影響;小鼠3T3-L1前脂肪細胞用PPARγ激動劑和抑制劑預處理后用BPA處理6天,檢測細胞中脂質(zhì)沉積、脂肪因子和炎癥因子分泌,探討PPARγ在BPA促進小鼠3T3-L1前脂肪細胞分化的調(diào)控作用。研究方法體外培養(yǎng)的小鼠3T3-L1前脂肪細胞90%融合后,用誘導培養(yǎng)基A培養(yǎng)2天,換為誘導分化培養(yǎng)基B培養(yǎng)至第8天結(jié)束。在開始誘導分化時持續(xù)用10 nmol/L、100 nmol/L或1 000 nmol/L的BPA處理細胞,并設空白對照和DMSO溶劑組。在誘導分化第2、4、6、8天,用CCK8測細胞活率,油紅O染色檢測細胞內(nèi)脂質(zhì)沉積,ELISA法分析培細胞上清脂肪因子(瘦素、脂聯(lián)素)和炎性因子(TNF-α、IL6、IL1β)的水平,實時熒光定量PCR法檢測細胞內(nèi)瘦素、脂聯(lián)素、TNF-α、IL-6、IL-1β、PPARγ和C/EBP m RNA水平,免疫組化法檢測細胞中PPARγ蛋白表達。PPARγ對BPA促進小鼠前脂肪細胞分化影響研究中,用1 000 nmol/L BPA處理細胞時用PPARγ激動劑羅格列酮或抑制劑GW9665同時處理細胞,誘導分化至第6天;油紅O染色法分析脂肪細胞脂質(zhì)沉積,ELISA分析上清中脂肪因子和炎性因子水平,實時熒光定量PCR法檢測細胞中脂肪因子、炎性因子、PPARγ和C/EBP的m RNA表達水平,免疫組化檢測細胞中PPARγ蛋白表達水平。實驗數(shù)據(jù)采用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件進行錄入和統(tǒng)計分析。結(jié)果1.低劑量BPA對分化過程中的小鼠3T3-L1前脂肪細胞活率和脂質(zhì)沉積的影響1.1對細胞活率的影響CCK8結(jié)果顯示,與同時間點空白對照組相比,誘導分化第2天,1 000 nmol/L BPA組細胞活率顯著增強;誘導分化第4、6、8天,BPA處理組細胞活率下降;第6天時,1 000 nmol/L BPA組細胞活性下降,差異有統(tǒng)計學意義;第8天時,100 nmol/L BPA組和1 000 nmol/L BPA組細胞活性下降,差異有統(tǒng)計學意義。1.2對脂質(zhì)沉積的影響油紅O染色顯示,與空白對照組相比,BPA處理組細胞內(nèi)脂滴含量增多;定量分析顯示,與空白對照組相比,第6天和第8天時,100nmol/L BPA和1 000 nmol/L BPA處理組脂滴明顯增多,差異有統(tǒng)計學意義。2.低劑量BPA對分化過程中的小鼠3T3-L1前脂肪細胞的脂肪因子和細胞因子分泌的影響與空白對照組相比,第4天時,1 000 nmol/L BPA處理組上清中瘦素、TNF-α、IL-6、IL-1β水平和細胞中m RNA表達均升高,差異均有統(tǒng)計學意義;第6天和第8天時,100 nmol/L BPA和1 000 nmol/L BPA處理組瘦素、TNF-α、IL-6、IL-1β水平和m RNA表達明顯升高,而脂聯(lián)素因子水平和m RNA表達下降,差異均具有統(tǒng)計學意義。3.低劑量BPA對分化過程中的小鼠3T3-L1前脂肪細胞中PPARγ和C/EBP表達的影響與空白對照組相比,第4天時,1 000 nmol/L BPA處理組細胞中PPARγ和C/EBP m RNA水平升高,差異有統(tǒng)計學意義;第6天和第8天時,100 nmol/L BPA和1 000 nmol/L BPA組PPARγ和C/EBP m RNA水平均升高,差異有統(tǒng)計學意義。免疫組化檢測顯示PPARγ在細胞核周圍表達,與空白對照組相比,BPA處理組PPARγ表達增強。4.PPARγ對BPA促進小鼠前脂肪細胞分化的調(diào)控4.1 PPARγ激動劑對BPA促進小鼠3T3-L1前脂肪細胞分化的影響與空白對照組相比,羅格列酮組和羅格列酮+1 000 nmol/L BPA組細胞內(nèi)脂質(zhì)沉積明顯增多,定量分析顯示差異有統(tǒng)計學意義;上清中瘦素、TNF-α、IL-6、IL-1β水平和細胞中瘦素、TNF-α、IL-6、PPARγ、C/EBP m RNA表達均上升,而上清中脂聯(lián)素水平和細胞中脂聯(lián)素m RNA表達下降,差異均有統(tǒng)計學意義。與1000 nmol/L BPA組相比,羅格列酮+1 000 nmol/L BPA組細胞內(nèi)脂質(zhì)沉積增多,定量分析顯示差異有統(tǒng)計學意義;上清中瘦素、TNF-α、IL-6水平和細胞中瘦素、TNF-α、IL-6、PPARγ、C/EBP m RNA表達均上升,而上清中脂聯(lián)素水平和細胞中脂聯(lián)素m RNA表達下降,差異均有統(tǒng)計學意義。與羅格列酮組相比,羅格列酮+1000 nmol/L BPA組細胞內(nèi)脂質(zhì)沉積增多,定量析顯示差異無統(tǒng)計學意義;上清中瘦素、TNF-α、IL-6的表達升高,但無統(tǒng)計學意義;細胞中瘦素、TNF-α、IL-6、PPARγm RNA基因表達和PPARγ蛋白的表達均升高,差異均有統(tǒng)計學意義。4.2 PPARγ抑制劑對BPA促進小鼠3T3-L1前脂肪細胞分化的影響與空白對照組相比,GW9665組和GW9665+1 000 nmol/L BPA組細胞內(nèi)脂質(zhì)沉積明顯減少,定量分析顯示差異有統(tǒng)計學意義;上清中瘦素、TNF-α、IL-6、IL-1β水平和細胞中瘦素、TNF-α、IL-6、PPARγ、C/EBP m RNA表達均下降,而上清中脂聯(lián)素水平和細胞中脂聯(lián)素m RNA表達升高,差異均有統(tǒng)計學意義。與1 000nmol/L BPA組相比,GW9665+1 000 nmol/L BPA組細胞內(nèi)脂質(zhì)沉積明顯減少,定量分析顯示差異有統(tǒng)計學意義;上清中瘦素、TNF-α、IL-6水平和細胞中瘦素、TNF-α、IL-6、PPARγ、C/EBP m RNA表達均下降,而上清中脂聯(lián)素水平和細胞中脂聯(lián)素m RNA表達升高,差異均有統(tǒng)計學意義。與GW9665組相比,GW9665+1 000 nmol/L BPA組細胞內(nèi)脂質(zhì)沉積變化不明顯,定量析顯示差異無統(tǒng)計學意義;上清中瘦素、TNF-α、IL-6的表達稍升高,但差異無統(tǒng)計學意義;細胞中瘦素、TNF-α、IL-6、PPARγm RNA基因表達和PPARγ蛋白的表達變化也不明顯,差異無統(tǒng)計學意義。結(jié)論1.在體外誘導分化條件下,低劑量BPA促進小鼠3T3-L1前脂肪細胞的分化成熟,上調(diào)轉(zhuǎn)錄因子C/EBP和PPARγ的表達,干擾脂肪因子和炎癥因子的表達。2.低劑量BPA可能通過PPARγ途徑促進體外誘導分化的小鼠3T3-L1前脂肪細胞分化成熟。
【關鍵詞】：雙酚A 小鼠3T3-L1前脂肪細胞 分化 PPARγ
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R114
【目錄】：

• 中英文縮略詞表5-7
• 摘要7-11
• 英文摘要11-16
• 1.前言16-18
• 2. 材料與方法18-24
• 3. 結(jié)果24-39
• 4. 討論39-44
• 5. 結(jié)論44-45
• 參考文獻45-53
• 附錄53-54
• 致謝54-55
• 綜述55-67
• 參考文獻61-67

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