本文關鍵詞：2，5-己二酮誘導PC12細胞凋亡及其機制探討，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景：正己烷作為一種有機溶劑，廣泛應用于工業(yè)粘膠、印刷、電子微電子等行業(yè)。職業(yè)暴露過程中如果防護不當，正己烷將經(jīng)呼吸道、皮膚等途徑進入機體導致中毒。長期接觸正己烷可導致以多發(fā)性周圍神經(jīng)病為主要臨床特征的慢性中毒，臨床上主要表現(xiàn)為四肢麻木、行走無力，肌肉萎縮等。2,5-己二酮（2,5-HD）是正己烷在體內的最終代謝產物，也是正己烷誘發(fā)神經(jīng)毒性的終毒物。 2,5-HD神經(jīng)毒性作用的發(fā)生機制尚不明確。許多研究顯示，2,5-HD可導致神經(jīng)元胞體和軸突損傷、神經(jīng)元數(shù)量減少。研究發(fā)現(xiàn)，Bax、Bcl-2和Caspase-3參與多種因素誘導的神經(jīng)細胞凋亡，Bax和Bcl-2是最重要的凋亡調控基因，，Caspase-3是最關鍵的凋亡執(zhí)行蛋白酶。那么，2,5-HD誘導的神經(jīng)毒性是否與凋亡有關， Bax、Bcl-2和Caspase-3是否參與了2,5-HD的神經(jīng)毒性機制？這些問題引起了我們的關注。 目的：探討2,5-HD誘導PC12細胞凋亡及相關機制，為闡明2,5-HD的神經(jīng)毒作用機制提供依據(jù)。 方法：以PC12細胞作為神經(jīng)元的細胞模型，0、10mM、20mM和40mM2,5-HD分別染毒12h、24h、36h。用MTT比色法檢測細胞存活率；用蘇木素-伊紅(HE)染色法觀察細胞形態(tài)學的變化；Hoechst33342熒光染色觀察細胞核的變化；透射電子顯微鏡觀察細胞超微結構的變化；用Annexin V-FITC/PI雙染流式細胞儀檢測PC12的細胞凋亡率；用Real-time PCR檢測Bax、Bcl-2和Caspase-3基因的表達情況；用Western blot檢測Bax與Bcl-2的蛋白表達情況。 結果：MTT檢測結果顯示，隨2,5-HD濃度增加和染毒時間延長，細胞存活率下降（P 0.05）。蘇木素-伊紅(HE)染色法觀察到2,5-HD染毒后PC12細胞形態(tài)發(fā)生明顯變化。Hoechst33342熒光染色觀察到特征性凋亡細胞核。透射電子顯微鏡觀察可見，40mM的2,5-HD作用36h后，核仁消失，染色質聚集移動，有特征性凋亡小體形成。Annexin V-FITC/PI雙染流式細胞儀檢測到細胞凋亡率隨2,5-HD劑量增高而上升，呈劑量反應關系。Real Time PCR結果顯示隨2,5-HD劑量的增加和染毒時間延長，Bax和Caspase-3mRNA表達水平上調，Bcl-2mRNA表達水平下調。Western blot顯示，隨2,5-HD濃度增加和染毒時間延長，Bax蛋白表達水平上調，Bcl-2蛋白表達水平下調。 結論：2,5-HD暴露可誘導PC12細胞凋亡，上調Bax和Caspase-3的表達及下調Bcl-2表達。且2,5-HD的凋亡誘導作用可能與凋亡調節(jié)蛋白的表達紊亂有關。
【關鍵詞】：2 5-己二酮 細胞凋亡 周圍神經(jīng)病 正己烷 PC12
【學位授予單位】：大連醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R114
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-10
• 前言10-11
• 材料和方法11-19
• 結果19-27
• 討論27-29
• 結論29
• 參考文獻29-33
• 綜述33-41
• 參考文獻37-41
• 致謝41-42

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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本文編號：382660