本文關(guān)鍵詞：工頻磁場誘導(dǎo)小鼠胚胎成纖維細胞ROS相關(guān)的自噬，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景：工頻磁場是指頻率為50Hz或60Hz,由各種電壓等級輸電線及各種家用電器等產(chǎn)生的磁場,其屬于極低頻電磁場(0-300Hz)的范疇。工頻磁場被報道可以改變神經(jīng)組織的Ca2+的內(nèi)穩(wěn)態(tài),引起不同細胞ROS的上升,引起細胞或生物內(nèi)穩(wěn)態(tài)的改變導(dǎo)致其細胞功能的改變。自噬對維持細胞、組織或生物體的內(nèi)穩(wěn)態(tài)發(fā)揮重要功能。細胞自噬將受損的細胞器或生物大分子包裹進自噬體,與溶酶體結(jié)合后降解內(nèi)容物供機體重新利用,是機體重要的一種防御和保護機制。暴露于工頻磁場后,細胞穩(wěn)態(tài)的變化是否會引起細胞發(fā)生自噬,以適應(yīng)這一新的環(huán)境目前還未知。 目的：本研究擬探索2mT工頻磁場對小鼠胚胎成纖維細胞自噬的影響。 方法：MEF細胞暴露于2mT工頻磁場30分鐘、2小時、6小時、12小時和24小時后,通過Western blotting實驗檢測細胞內(nèi)自噬標(biāo)志物L(fēng)C3-Ⅱ表達水平。監(jiān)測到暴露組自噬標(biāo)志物增加的時間點后,我們通過激光共聚焦顯微鏡檢測細胞內(nèi)GFP-LC3定位自噬小體情況,用透射電鏡觀察細胞內(nèi)自噬體形成情況,通過添加溶酶體抑制劑氯喹檢測自噬流量變化。并且,我們用ROS檢測試劑盒測定細胞內(nèi)ROS水平,用流式細胞儀及TUNEL染色檢測細胞凋亡。 結(jié)果：在本實驗條件下,工頻磁場暴露6h可引起MEF細胞自噬標(biāo)志物水平上升,包括(1)LC3-Ⅱ表達水平升高；(2)GFP-LC3亮點數(shù)量增加；(3)自噬小體形成數(shù)量增加。另外,通過添加氯喹,我們發(fā)現(xiàn)工頻磁場輻照6h后自噬流量增加,提示工頻磁場誘導(dǎo)的MEF自噬標(biāo)志物水平上升,是由于上游誘導(dǎo)增加,與自噬降解通路的抑制無關(guān)。在探究工頻磁場誘導(dǎo)的MEF細胞自噬機制時,我們發(fā)現(xiàn)其可能與ROS相關(guān),是非1nTOR依賴的。工頻磁場暴露6h對MEF細胞凋亡無影響。 結(jié)論：在本實驗條件下,工頻磁場暴露6h引起MEF細胞ROS相關(guān)的自噬。
【關(guān)鍵詞】：工頻磁場 細胞自噬 ROS 小鼠胚胎成纖維細胞
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R131
【目錄】：

• 致謝4-6
• 中文摘要6-8
• abstract8-10
• 縮略語10-12
• 目次12-14
• 1. 前言14-18
• 2. 主要儀器設(shè)備、材料與試劑18-23
• 2.1 主要儀器設(shè)備和耗材18
• 2.2 細胞及其培養(yǎng)液18-19
• 2.3 主要試劑19-20
• 2.4 試劑配制20-23
• 2.4.1 細胞培養(yǎng)液配制20
• 2.4.2 Western blotting相關(guān)試劑配制20-22
• 2.4.3 激光共聚焦實驗試劑配制22
• 2.4.4 透射電子顯微鏡實驗相關(guān)試劑配制22-23
• 3. 實驗方法23-29
• 3.1 sXc-ELF工頻磁場輻照系統(tǒng)23-24
• 3.2 細胞培養(yǎng)與分組24
• 3.3 工頻磁場對MEF細胞自噬影響的檢測24-27
• 3.3.1 Western blotting檢測工頻磁場對MEF細胞LC3-Ⅱ蛋白表達的影響24-26
• 3.3.2 激光共聚焦焦顯微鏡觀察工頻磁場對穩(wěn)轉(zhuǎn)GFP-LC3 MEF細胞GFP-LC3亮點數(shù)的影響26
• 3.3.3 透射電子顯微鏡觀察工頻磁場對MEF細胞自噬泡形成的影響26-27
• 3.4 工頻磁場對MEF細胞ROS影響的檢測27
• 3.5 工頻磁場對MEF細胞凋亡影響的檢測27-29
• 3.5.1 流式細胞儀檢測工頻磁場對MEF細胞凋亡的影響27
• 3.5.2 Tunel法檢測工頻磁場對MEF細胞凋亡的影響27-29
• 4. 實驗結(jié)果29-39
• 4.1 工頻磁場暴露對MEF細胞自噬的影響29-34
• 4.1.1 工頻磁場暴露對MEF細胞自噬標(biāo)志物的表達水平的影響29-32
• 4.1.2 工頻磁場暴露對MEF細胞自噬流量的影響32-34
• 4.1.3 工頻磁場暴露對MEF細胞p70s6k磷酸化的影響34
• 4.2 工頻磁場暴露對MEF細胞ROS水平的影響34-35
• 4.3 工頻磁場暴露對MEF細胞凋亡的影響35-39
• 5. 討論39-41
• 6. 結(jié)論41-42
• 參考文獻42-48
• 綜述48-65
• 參考文獻57-65
• 作者簡歷及在讀期間所取得的科研成果65

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 呂琰;宋濤;;電磁場生物效應(yīng)機制的研究進展[J];科技通報;2013年04期

2 曹學(xué)成;寧鐳;;極低頻磁場生物效應(yīng)的生物物理機制研究[J];山東農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2007年03期

  本文關(guān)鍵詞：工頻磁場誘導(dǎo)小鼠胚胎成纖維細胞ROS相關(guān)的自噬，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：382038