研究目的:矽肺是最常見和最嚴(yán)重的職業(yè)病之一,長(zhǎng)期吸入高濃度矽塵即可引起矽肺。研究表明,矽肺的發(fā)生會(huì)促進(jìn)如系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)、硬皮病(SSC)等的自身免疫性疾病的發(fā)病率升高。其中,SLE為二氧化硅引起的重要的自身免疫性疾病之一。因此探索矽塵促發(fā)系統(tǒng)性紅斑狼瘡的致病機(jī)制,尋找其有效的治療藥物是目前亟待解決的任務(wù)。研究發(fā)現(xiàn)Toll樣受體(Toll-like receptors,TLRs)與SLE密切相關(guān),同時(shí)許多研究也表明內(nèi)質(zhì)網(wǎng)駐留蛋白UNC93B1在自身抗原激活TLR7/TLR9信號(hào)通路的過程中扮演著重要角色。因此本研究采用J774A.1小鼠單核細(xì)胞和MRL/lpr狼瘡傾向小鼠,探討矽塵和薯蕷皂苷對(duì)UNC93B1/TLR7/TLR9信號(hào)通路的影響,結(jié)合體內(nèi)外研究探索矽塵促發(fā)系統(tǒng)性紅斑狼瘡的發(fā)病機(jī)制和薯蕷皂苷對(duì)疾病的治療作用。研究方法:體外實(shí)驗(yàn)采用J774A.1細(xì)胞,首先給予不同濃度的二氧化硅懸液,刺激不同時(shí)間后采用MTS的方法檢測(cè)細(xì)胞增殖活力以確定后續(xù)實(shí)驗(yàn)應(yīng)用的二氧化硅濃度和刺激時(shí)間;在確定二氧化硅刺激濃度和時(shí)間之后,采取相應(yīng)濃度的二氧化硅懸液刺激細(xì)胞,提取蛋白和mRNA,通過Wes...

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
1 前言
2 材料和方法
    2.1 主要試劑和儀器
        2.1.1 主要試劑
        2.1.2 主要儀器
    2.2 主要試劑的配置
        2.2.1 4 %多聚甲醛固定液
        2.2.2 10 ×電泳緩沖液(10×Running Buffer)
        2.2.3 10 ×轉(zhuǎn)膜液(10×Trans-Buffer)
        2.2.4 10 ×TBS溶液
        2.2.5 1 %TBST溶液
        2.2.6 封閉液
        2.2.7 1 %雜交液
        2.2.8 高糖DMEM培養(yǎng)基
        2.2.9 APS過硫酸銨溶液
        2.2.10 5 ×PBS溶液
        2.2.11 10 ×抗原修復(fù)液
    2.3 研究對(duì)象與分組
        2.3.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及細(xì)胞
        2.3.2 體外實(shí)驗(yàn)分組及細(xì)胞刺激
        2.3.3 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)分組及模型建立
    2.4 細(xì)胞計(jì)數(shù)及MTS法檢測(cè)細(xì)胞活力
    2.5 炎癥因子檢測(cè)(ELISA)
    2.6 小鼠腎組織、脾組織樣品的取留
    2.7 腎組織六胺銀染色(PASM)
    2.8 總RNA的提取和Real-Time PCR檢測(cè)
        2.8.1 總RNA的提取
        2.8.2 RNA反轉(zhuǎn)錄
        2.8.3 RT-PCR檢測(cè)
    2.9 BCA法定蛋白及Western Blot檢測(cè)
        2.9.1 BCA法定蛋白
        2.9.2 Western Blot檢測(cè)
    2.10 免疫熒光染色(IF)
        2.10.1 組織免疫熒光染色
        2.10.2 細(xì)胞免疫熒光染色
    2.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 矽塵暴露能夠增加J774A.1 細(xì)胞UNC93B1 的表達(dá)水平
        3.1.1 不同時(shí)間及濃度的矽塵刺激對(duì)細(xì)胞活力的影響
        3.1.2 矽塵暴露能夠增加J774A.1 細(xì)胞UNC93B1 的表達(dá)水平
    3.2 薯蕷皂苷可以降低矽塵刺激引起的J774A.1 細(xì)胞UNC93B1 的表達(dá)上調(diào)
    3.3 薯蕷皂苷可以降低由矽塵刺激引起的J774A.1 細(xì)胞炎癥水平升高
    3.4 薯蕷皂苷可以抑制矽塵刺激引起的J774A.1 細(xì)胞UNC93B1/TLR7/TLR9 通路的活化
        3.4.1 薯蕷皂苷可以抑制矽塵刺激引起的J774A.1 細(xì)胞UNC93B1/TLR7 通路的活化
        3.4.2 薯蕷皂苷可以抑制矽塵刺激引起的J774A.1 細(xì)胞UNC93B1/TLR9 通路的活化
    3.5 薯蕷皂苷可以減輕由矽塵促發(fā)的狼瘡腎炎
    3.6 薯蕷皂苷可以降低由矽塵促發(fā)的狼瘡傾向小鼠脾臟和腎臟UNC93B1 表達(dá)升高
        3.6.1 薯蕷皂苷可以降低由矽塵促發(fā)的狼瘡傾向小鼠脾臟UNC93B1 表達(dá)升高
        3.6.2 薯蕷皂苷可以降低由矽塵促發(fā)狼瘡傾向小鼠的腎臟UNC93B1 表達(dá)升高
    3.7 薯蕷皂苷可以抑制由矽塵促發(fā)的狼瘡傾向小鼠UNC93B1/TLR7/TLR9 通路的活化
        3.7.1 薯蕷皂苷可以抑制由矽塵促發(fā)的狼瘡傾向小鼠UNC93B1/TLR7 通路的活化
        3.7.2 薯蕷皂苷可以抑制由矽塵促發(fā)的狼瘡傾向小鼠UNC93B1/TLR9 通路的活化
4 討論
本研究創(chuàng)新性的自我評(píng)價(jià)
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：3808645