目的利用煤焦瀝青煙提取物（Coal tar pitch extracts,CTPE）構(gòu)建的體外永生化人支氣管上皮細(xì)胞（Immortalized human bronchial epithelial,BEAS-2B）惡性轉(zhuǎn)化模型,研究ENST00000501520在細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化中對(duì)細(xì)胞功能的影響,以及可能的靶向基因,為從LncRNAs水平探討惡性轉(zhuǎn)化發(fā)生發(fā)展機(jī)制提供理論支持。方法1.UCSC數(shù)據(jù)庫(kù)檢索ENST00000501520轉(zhuǎn)錄基因基因信息和臨近基因情況。編碼潛能預(yù)測(cè)器（Coding potential calculator,CPC）、編碼潛能預(yù)測(cè)軟件（Coding PotentialAssessmentTool,CPAT）預(yù)測(cè) ENST00000501520 蛋白質(zhì)翻譯能力。細(xì)胞核質(zhì)分離技術(shù)分離細(xì)胞核質(zhì)RNA,qRT-PCR檢測(cè)細(xì)胞核、質(zhì)中ENST00000501520相對(duì)表達(dá)含量,計(jì)算核質(zhì)百分比,明確其亞細(xì)胞定位。qRT-PCR 檢測(cè) CTPE15、20、25、30、35 代細(xì)胞中 ENST00000501520 相對(duì)含量隨細(xì)胞代數(shù)變化的變化情況。2.小干擾 RNA（Small... 

【文章來(lái)源】：鄭州大學(xué)河南省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：73 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

ENST00000501520的轉(zhuǎn)錄基因定位及其臨近基因情況

３．２．２各組ＣＴＰＥ染毒細(xì)月包中ＥＮＳＴ０００００５０１５２０表達(dá)情況??分別提�。茫裕校牛保�、２０、２５、３０、３５代細(xì)胞總ＲＮＡ，并通過(guò)ｑＲＴ－ＰＣＲ檢??測(cè)各代數(shù)細(xì)胞中ＥＮＳＴ０００００５０１５２０的相對(duì)表達(dá)量。結(jié)果如表３．３和圖３．３所??示，在ＣＴＰＥ３０代及以前，ＥＮＳＴ０００００５０１５２０的相對(duì)表達(dá)量隨著細(xì)胞代數(shù)的增??加逐漸增加。ＣＴＰＥ３０代與ＣＴＰＥ１５、２０、２５代比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義??（均Ｐ＜０．０５）。ＣＴＰＥ３０和ＣＴＰＥ３５代比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＝０．８０４）。??表３．?３各組細(xì)胞ＥＮＳＴ０００００５０１５２０的相對(duì)表達(dá)量情況（ｎ＝８，?ｆ±ｓ）??組別?ＥＮＳＴ０００００５０１５２０相對(duì)表達(dá)量?Ｆ?Ｐ??ＣＴＰＥ１５?０．２７８±〇．〇７７??ＣＴＰＥ２０?０．８７５±０．３１４??ＣＴＰＥ２５?１．１５１±０．３６３?１９?６４７?＜０００１??ＣＴＰＥ３０?１．８６１±０．３８５＊??ＣＴＰＥ３５?１．９１６±０．７６５???注：＊表示與３０代前細(xì)胞組相比，ＣＴＰＥ３０組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，Ｐ＜０．０５？??１８??

分別配置５０ｎＭ、１００ｎＭ、１５０ｎＭ轉(zhuǎn)染濃度的ｓｉＲＮＡ干擾溶液對(duì)ＣＴＰＥ３０??代細(xì)胞干預(yù)培養(yǎng)４８ｈ，然后提取總ＲＮＡ進(jìn)行ｑＲＴ－ＰＣＲ檢測(cè)ＥＮＳＴ０００００５０１５２０??的相對(duì)表達(dá)量，并計(jì)算干擾效率。結(jié)果如表３．４和圖３．４所示，與ＣＴＰＥ３０組比??較，不同干擾濃度組ＥＮＳＴ０００００５０１５２０的相對(duì)表達(dá)量明顯下降（均Ｐ＜０．０５），??其中５０ｎＭ干擾組減少５２．２８４％，ｌＯＯｎＭ干擾組減少６９．３７１％，１５０ｎＭ干擾組??減少２５．７３４％。選用丨ＯＯｎＭ為最佳干擾濃度，同時(shí)設(shè)立Ｍｏｃｋ組、ＮＣ組和無(wú)??任何處理的ＣＴＰＥ３０組。結(jié)果如表３．５和圖３．５所示，Ｍｏｃｋ組和ＮＣ組比較差??異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＝０．４７８），且均與ＣＴＰＥ３０組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（分別??／ＭＸ７１８，尸＝０．７２３）。１００ｎＭ?組相比?Ｍｏｃｋ、ＮＣ?和?ＣＴＰＥ３０?組，??ＥＮＳＴ０００００５０１５２０相對(duì)表達(dá)量明顯下降（均Ｐ＜０．００１?），轉(zhuǎn)染試劑和ｓｉＲＮＡ陰??性對(duì)照均不影響ＥＮＳＴ０００００５０１５２０的表達(dá)水平

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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