目的:多氯聯(lián)苯(polychlorinated biphenyls,PCBs)是一類具有持久性、生物蓄積性、高毒性的有機(jī)污染物。2,2',4,4',5,5'-六氯聯(lián)苯(2,2',4,4',5,5'-hexachlorobiphenyl,PCB153)是人體組織中含量最多的PCBs同系物之一,與人類健康關(guān)系密切。PCB153可導(dǎo)致DNA損傷,基因組不穩(wěn)定等。長(zhǎng)散在重復(fù)序列-1(long interspersed element-1,LINE-1)是人類基因組中唯一可以自主轉(zhuǎn)座的逆轉(zhuǎn)座子,LINE-1發(fā)生轉(zhuǎn)座可降低基因組穩(wěn)定性。本研究分析了PCB153暴露下,人腎上皮細(xì)胞系(293T細(xì)胞)中LINE-1的表達(dá)及轉(zhuǎn)座、細(xì)胞凋亡和DNA損傷情況,為PCBs的分子毒理學(xué)研究提供新思路。方法:(1)流式細(xì)胞法檢測(cè)293T細(xì)胞的凋亡情況。(2)熒光定量技術(shù)(Real-time PCR)檢測(cè)LINE-1 m RNA基因的表達(dá)水平。蛋白質(zhì)免疫印記技術(shù)(Western blot)檢測(cè)LINE-1蛋白表達(dá)水平。(3)Real-time PCR檢測(cè)LINE-1在基因組上的拷貝數(shù)。(4)焦磷酸測(cè)序技術(shù)檢測(cè)LINE-1啟動(dòng)子區(qū)域甲基化狀態(tài)。Real-time PCR技術(shù)檢測(cè)甲基化相關(guān)基因m RNA的表達(dá)水平。(5)免疫熒光技術(shù)檢測(cè)293T細(xì)胞的DNA損傷情況。Real-time PCR技術(shù)檢測(cè)DNA損傷修復(fù)相關(guān)基因m RNA的表達(dá)水平。結(jié)果:(1)與對(duì)照組相比,15μmol/L PCB153可致293T細(xì)胞凋亡率增加。(2)與對(duì)照組相比,不同濃度PCB153(5μmol/L,10μmol/L,15μmol/L)作用293T細(xì)胞48h后,細(xì)胞中LINE-1 m RNA的表達(dá)升高。在染毒96h時(shí),LINE-1蛋白表達(dá)升高,且差異最為明顯。(3)與對(duì)照組相比,不同濃度PCB153(5μmol/L,10μmol/L,15μmol/L)作用293T細(xì)胞96h后,細(xì)胞中LINE-1拷貝數(shù)均增加。15μmol/L PCB153染毒組差異最為明顯。(4)在染毒96h時(shí),與對(duì)照組相比,15μmol/L PCB153可導(dǎo)致293T細(xì)胞中LINE-1甲基化水平下降。同時(shí),293T細(xì)胞中甲基化酶DNMT3B基因m RNA表達(dá)量下降,去甲基化酶TET1基因m RNA表達(dá)量升高。(5)在染毒96h時(shí),與對(duì)照組相比,15μmol/L PCB153可致細(xì)胞發(fā)生DNA損傷。與對(duì)照組相比,15μmol/L PCB153可導(dǎo)致293T細(xì)胞中RAD51D和XRCC2 m RNA表達(dá)量下降,XRCC5和XRCC6 m RNA表達(dá)量升高。結(jié)論:(1)PCB153暴露可誘導(dǎo)293T細(xì)胞凋亡。(2)PCB153暴露能降低LINE-1甲基化,增加LINE-1表達(dá)量,可能誘導(dǎo)LINE-1轉(zhuǎn)座。(3)PCB153暴露可導(dǎo)致DNA損傷,并且對(duì)DNA損傷修復(fù)有影響。
【學(xué)位單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R114
【部分圖文】：

笱?妒墾?宦畚?一、PCB153 對(duì) 293T 細(xì)胞凋亡的影響9圖3 流式細(xì)胞法檢測(cè)染毒96h時(shí)293T細(xì)胞的凋亡率（A：對(duì)照組；B：15μmol/L PCB153 染毒組）圖4 染毒96h時(shí)，PCB153對(duì)293T細(xì)胞凋亡的影響（*P＜0.05）1.4 討論P(yáng)CBs 是由德國(guó)科學(xué)家最早合成的，由美國(guó)最先開始生產(chǎn)的。PCBs 因具有良好的化學(xué)穩(wěn)定性、熱穩(wěn)定性、導(dǎo)熱性、阻燃性、高粘性、絕緣性，被廣泛應(yīng)用于生產(chǎn)領(lǐng)域。目前，某些富含 PCBs 的電子垃圾目前仍存在流失和非法利用的現(xiàn)象。大氣污染中的 PCBs 是脂溶性的，會(huì)隨著呼吸、飲食等方式進(jìn)入機(jī)體內(nèi)。PCBs中所有的羥基代謝物都是通過膽汁經(jīng)胃腸道從糞便排出，只有一小部?

圖3 流式細(xì)胞法檢測(cè)染毒96h時(shí)293T細(xì)胞的凋亡率（A：對(duì)照組；B：15μmol/L PCB153 染毒組）圖4 染毒96h時(shí)，PCB153對(duì)293T細(xì)胞凋亡的影響（*P＜0.05）1.4 討論P(yáng)CBs 是由德國(guó)科學(xué)家最早合成的，由美國(guó)最先開始生產(chǎn)的。PCBs 因具有良好的化學(xué)穩(wěn)定性、熱穩(wěn)定性、導(dǎo)熱性、阻燃性、高粘性、絕緣性，被廣泛應(yīng)用于生產(chǎn)領(lǐng)域。目前，某些富含 PCBs 的電子垃圾目前仍存在流失和非法利用的現(xiàn)象。大氣污染中的 PCBs 是脂溶性的，會(huì)隨著呼吸、飲食等方式進(jìn)入機(jī)體內(nèi)。PCBs中所有的羥基代謝物都是通過膽汁經(jīng)胃腸道從糞便排出，只有一小部分 PCBs 在A B

士學(xué)位論文 二、PCB153 對(duì) 293T 細(xì)胞中 LINE-1 表達(dá)及拷貝48h時(shí)，對(duì)照組與10μmol/L PCB153染毒組的LINE-1 ORF-1為0.99±0.04和1.51±0.10，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05/L PCB153 染 毒 組的 LINE-1 ORF-1 mRNA相 對(duì) 表達(dá) 量.60±0.12，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。在PCB153染mol/L PCB153染毒組的LINE-1 ORF-1 mRNA相對(duì)表達(dá).46±0.13，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；對(duì)照組與組的LINE-1 ORF-1 mRNA相對(duì)表達(dá)量分別為1.31±0.19和2學(xué)意義（P<0.05）；對(duì)照組與15μmol/L PCB153染毒組A相對(duì)表達(dá)量分別為1.31±0.19和2.60±0.11，差異具有統(tǒng)
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