本文關(guān)鍵詞：�？颂婺嵩谖卫w維化進(jìn)展中的體外干預(yù)作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的觀察�？颂婺釋�(duì)二氧化硅(SiO2)致肺上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化中E鈣粘蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌激動(dòng)蛋白(α-SMA)表達(dá)的影響,并探討表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)信號(hào)通路在肺纖維化上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化中的作用。 方法采用體外制備矽肺細(xì)胞模型方法,用50ug/ml的SiO2粉塵刺激肺泡巨噬細(xì)胞(AM),分別作用3、6、12、18、24、36h后收集上清液,用ELISA方法檢測(cè)上清中TGF-β1蛋白的表達(dá),并以TGF-β1表達(dá)的高峰時(shí)間點(diǎn)(Tm)的AM培養(yǎng)上清作為條件培養(yǎng)上清。用終濃度分別為0(對(duì)照組)、50、100、200ug/ml的SiO2粉塵與AM培養(yǎng)上清液(Tm)共同刺激肺上皮細(xì)胞,作用48h后,用�？颂婺岣深A(yù)染塵肺上皮細(xì)胞,實(shí)驗(yàn)分組：正常對(duì)照組(N組,SiO2粉塵濃度為Oug/ml)、模型組(F組,SiO2粉塵濃度為200ug/ml).低劑量干預(yù)組(A1組,SiO2粉塵濃度為200ug/ml+�？颂婺釢舛�20umol/L)、中劑量干預(yù)組(A2組,SiO2粉塵濃度為200ug/ml+�？颂婺釢舛�40umol/L)、高劑量干預(yù)組(A3組,SiO2粉塵濃度為200ug/ml+埃克替尼濃度80umol/L),干預(yù)48h后,于倒置光學(xué)顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變,并收集不同時(shí)段細(xì)胞,用RT-PCR檢測(cè)E-cadherin、α-SMA、EGFR mRNA表達(dá)水平,細(xì)胞免疫熒光方法檢測(cè)E-cadherin、α-SMA及EGFR蛋白表達(dá)的變化。 結(jié)果染塵組AM培養(yǎng)上清液中TGF-β1蛋白的表達(dá)在各時(shí)間點(diǎn)均明顯高于對(duì)照組,且隨作用時(shí)間的延長(zhǎng)呈先升高后降低的趨勢(shì),18h水平最高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。倒置顯微鏡觀察肺上皮細(xì)胞經(jīng)SiO2處理后細(xì)胞形態(tài)出現(xiàn)間質(zhì)細(xì)胞特點(diǎn),由鵝卵石狀轉(zhuǎn)變?yōu)榧忓N型或梭型,偽足樣改變,似成纖維細(xì)胞,SiO2濃度為200ug/ml時(shí)最明顯；�？颂婺岣深A(yù)48h后,進(jìn)展停滯,纖維狀偽足變短,呈類圓形。體外細(xì)胞染塵,隨著SiO2濃度的升高,E-cadherin mRNA和蛋白表達(dá)逐漸下調(diào),在200ug/ml組表達(dá)最低,α-SMA、EGFR mRNA和蛋白表達(dá)逐漸上調(diào),200ug/ml組α-SMA表達(dá)最高；實(shí)驗(yàn)組50、100、200ug/ml與對(duì)照組的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。�？颂婺岣深A(yù)后,E-cadherin mRNA陽蛋白表達(dá)無明顯變化,F組、A1組、A2組、A3組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),與N組之間差異顯著(P0.05)；α-SMA mRNA和蛋白表達(dá)明顯下調(diào),信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白EGFR mRNA和蛋白表達(dá)逐漸下調(diào),各組之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論SiO2體外刺激AM,使TGF-β1蛋白表達(dá)水平明顯升高,呈時(shí)間-效應(yīng)關(guān)系,上清液與SiO2可共同誘導(dǎo)肺上皮細(xì)胞向間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化,其機(jī)制可能與EGFR信號(hào)通路有關(guān)。�？颂婺崮芤种粕掀らg質(zhì)轉(zhuǎn)化,其機(jī)制可能與下調(diào)α-SMA表達(dá)和抑制EGFR活性有關(guān)。由此我們推測(cè),抑制EGFR信號(hào)通路的活化可能為臨床治療肺纖維化提供新的思路和途徑。
【關(guān)鍵詞】：�？颂婺� 二氧化硅 EGFR 上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化 矽肺
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R135.2
【目錄】：

• 摘要2-4
• Abstract4-8
• 引言8-9
• 第一章 試劑及儀器9-11
• 1.1 細(xì)胞來源9
• 1.2 試劑及耗材9-10
• 1.3 儀器10-11
• 第二章 方法11-20
• 2.1 實(shí)驗(yàn)器具的處理11
• 2.2 試劑的配置11-12
• 2.2.1 磷酸鹽緩沖液PBS溶液的配制11
• 2.2.2 細(xì)胞凍存液的配制11
• 2.2.3 10%DMEM培養(yǎng)液的配制11
• 2.2.4 10%山羊血清配置11
• 2.2.5 0.3%TritionX-100溶液的配制11
• 2.2.6 4%多聚甲醛溶液的配制11
• 2.2.7 一抗稀釋液的配置11
• 2.2.8 辣根酶標(biāo)記二抗稀釋液的配置11-12
• 2.2.9 75%乙醇配置12
• 2.2.10 二氧化硅(SiO_2)的配置12
• 2.2.11 �？颂婺崛芤旱呐渲�12
• 2.3 細(xì)胞的培養(yǎng)12-13
• 2.3.1 細(xì)胞復(fù)蘇12
• 2.3.2 細(xì)胞傳代12-13
• 2.3.3 細(xì)胞計(jì)數(shù)法13
• 2.3.4 細(xì)胞凍存13
• 2.4 矽肺細(xì)胞模型制備13-15
• 2.4.1 AM條件培養(yǎng)上清液的制備14
• 2.4.2 肺上皮細(xì)胞染塵14-15
• 2.5 光學(xué)顯微鏡下觀察細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化15
• 2.6 實(shí)時(shí)熒光定量PCR (RT-PCR)檢測(cè)A549細(xì)胞E-cadherin、α-SMA、EGFR mRNA的表達(dá)15-18
• 2.6.1 檢測(cè)染塵肺上皮細(xì)胞E-cadherin、α-SMA、EGFR mRNA的表達(dá)15
• 2.6.2 檢測(cè)�？颂婺岣深A(yù)染塵肺上皮細(xì)胞后E-cadherin、α-SMA、EGFR mRNA的表達(dá)15-16
• 2.6.3 Trizol法提取細(xì)胞總RNA16
• 2.6.4 RNA純度與濃度的測(cè)定16
• 2.6.5 逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)cDNA的合成16-17
• 2.6.6 PCR擴(kuò)增17-18
• 2.7 細(xì)胞免疫熒光法檢測(cè)E-cadherin、α-SMA、EGFR蛋白表達(dá)的影響18-19
• 2.7.1 實(shí)驗(yàn)分組18
• 2.7.2 細(xì)胞免疫熒光步驟18-19
• 2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理19-20
• 第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果20-29
• 3.1 ELISA方法檢測(cè)SiO_2刺激AM培養(yǎng)上清液中TGF-β1表達(dá)變化20
• 3.2 倒置相差顯微鏡下A549細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察20-22
• 3.3 RT-PCR檢測(cè)E-cadherin、α-SMA、EGFR mRNA的表達(dá)結(jié)果22-26
• 3.3.1 染塵肺上皮細(xì)胞E-cadherin、α-SMA、EGFR mRNA的表達(dá)22
• 3.3.2 �？颂婺釋�(duì)染塵肺上皮細(xì)胞E-cadherin、α-SMA、EGFR mRNA的表達(dá)水平的影響22-26
• 3.4 細(xì)胞免疫熒光法檢測(cè)E-cadherin、α-SMA、EGFR蛋白表達(dá)結(jié)果26-29
• 第四章 討論29-34
• 第五章 結(jié)論34-35
• 參考文獻(xiàn)35-39
• 綜述39-58
• 綜述參考文獻(xiàn)50-58
• 攻讀學(xué)位期間成果58-59
• 致謝59-60

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前7條

1 李理;李偉峰;蔡琳;袁偉鋒;黃文杰;;吉非替尼對(duì)博萊霉素致肺纖維化小鼠α平滑肌肌動(dòng)蛋白的抑制作用[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2010年12期

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5 李偉峰;李理;袁偉鋒;黃文杰;;吉非替尼抑制博萊霉素誘導(dǎo)的小鼠肺纖維化[J];中國(guó)病理生理雜志;2010年08期

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  本文關(guān)鍵詞：�？颂婺嵩谖卫w維化進(jìn)展中的體外干預(yù)作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：282986