本文關(guān)鍵詞：�？颂婺嵩谖卫w維化進展中的體外干預(yù)作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的觀察�？颂婺釋Χ趸�(SiO2)致肺上皮細胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化中E鈣粘蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌激動蛋白(α-SMA)表達的影響,并探討表皮生長因子受體(EGFR)信號通路在肺纖維化上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化中的作用。 方法采用體外制備矽肺細胞模型方法,用50ug/ml的SiO2粉塵刺激肺泡巨噬細胞(AM),分別作用3、6、12、18、24、36h后收集上清液,用ELISA方法檢測上清中TGF-β1蛋白的表達,并以TGF-β1表達的高峰時間點(Tm)的AM培養(yǎng)上清作為條件培養(yǎng)上清。用終濃度分別為0(對照組)、50、100、200ug/ml的SiO2粉塵與AM培養(yǎng)上清液(Tm)共同刺激肺上皮細胞,作用48h后,用�？颂婺岣深A(yù)染塵肺上皮細胞,實驗分組：正常對照組(N組,SiO2粉塵濃度為Oug/ml)、模型組(F組,SiO2粉塵濃度為200ug/ml).低劑量干預(yù)組(A1組,SiO2粉塵濃度為200ug/ml+�？颂婺釢舛�20umol/L)、中劑量干預(yù)組(A2組,SiO2粉塵濃度為200ug/ml+�？颂婺釢舛�40umol/L)、高劑量干預(yù)組(A3組,SiO2粉塵濃度為200ug/ml+�？颂婺釢舛�80umol/L),干預(yù)48h后,于倒置光學(xué)顯微鏡觀察細胞形態(tài)學(xué)改變,并收集不同時段細胞,用RT-PCR檢測E-cadherin、α-SMA、EGFR mRNA表達水平,細胞免疫熒光方法檢測E-cadherin、α-SMA及EGFR蛋白表達的變化。 結(jié)果染塵組AM培養(yǎng)上清液中TGF-β1蛋白的表達在各時間點均明顯高于對照組,且隨作用時間的延長呈先升高后降低的趨勢,18h水平最高,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。倒置顯微鏡觀察肺上皮細胞經(jīng)SiO2處理后細胞形態(tài)出現(xiàn)間質(zhì)細胞特點,由鵝卵石狀轉(zhuǎn)變?yōu)榧忓N型或梭型,偽足樣改變,似成纖維細胞,SiO2濃度為200ug/ml時最明顯；�？颂婺岣深A(yù)48h后,進展停滯,纖維狀偽足變短,呈類圓形。體外細胞染塵,隨著SiO2濃度的升高,E-cadherin mRNA和蛋白表達逐漸下調(diào),在200ug/ml組表達最低,α-SMA、EGFR mRNA和蛋白表達逐漸上調(diào),200ug/ml組α-SMA表達最高；實驗組50、100、200ug/ml與對照組的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。�？颂婺岣深A(yù)后,E-cadherin mRNA陽蛋白表達無明顯變化,F組、A1組、A2組、A3組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),與N組之間差異顯著(P0.05)；α-SMA mRNA和蛋白表達明顯下調(diào),信號轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白EGFR mRNA和蛋白表達逐漸下調(diào),各組之間差異具有統(tǒng)計學(xué)學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論SiO2體外刺激AM,使TGF-β1蛋白表達水平明顯升高,呈時間-效應(yīng)關(guān)系,上清液與SiO2可共同誘導(dǎo)肺上皮細胞向間質(zhì)細胞轉(zhuǎn)化,其機制可能與EGFR信號通路有關(guān)。�？颂婺崮芤种粕掀らg質(zhì)轉(zhuǎn)化,其機制可能與下調(diào)α-SMA表達和抑制EGFR活性有關(guān)。由此我們推測,抑制EGFR信號通路的活化可能為臨床治療肺纖維化提供新的思路和途徑。
【關(guān)鍵詞】：�？颂婺� 二氧化硅 EGFR 上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化 矽肺
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R135.2
【目錄】：

• 摘要2-4
• Abstract4-8
• 引言8-9
• 第一章 試劑及儀器9-11
• 1.1 細胞來源9
• 1.2 試劑及耗材9-10
• 1.3 儀器10-11
• 第二章 方法11-20
• 2.1 實驗器具的處理11
• 2.2 試劑的配置11-12
• 2.2.1 磷酸鹽緩沖液PBS溶液的配制11
• 2.2.2 細胞凍存液的配制11
• 2.2.3 10%DMEM培養(yǎng)液的配制11
• 2.2.4 10%山羊血清配置11
• 2.2.5 0.3%TritionX-100溶液的配制11
• 2.2.6 4%多聚甲醛溶液的配制11
• 2.2.7 一抗稀釋液的配置11
• 2.2.8 辣根酶標(biāo)記二抗稀釋液的配置11-12
• 2.2.9 75%乙醇配置12
• 2.2.10 二氧化硅(SiO_2)的配置12
• 2.2.11 �？颂婺崛芤旱呐渲�12
• 2.3 細胞的培養(yǎng)12-13
• 2.3.1 細胞復(fù)蘇12
• 2.3.2 細胞傳代12-13
• 2.3.3 細胞計數(shù)法13
• 2.3.4 細胞凍存13
• 2.4 矽肺細胞模型制備13-15
• 2.4.1 AM條件培養(yǎng)上清液的制備14
• 2.4.2 肺上皮細胞染塵14-15
• 2.5 光學(xué)顯微鏡下觀察細胞的形態(tài)學(xué)變化15
• 2.6 實時熒光定量PCR (RT-PCR)檢測A549細胞E-cadherin、α-SMA、EGFR mRNA的表達15-18
• 2.6.1 檢測染塵肺上皮細胞E-cadherin、α-SMA、EGFR mRNA的表達15
• 2.6.2 檢測�？颂婺岣深A(yù)染塵肺上皮細胞后E-cadherin、α-SMA、EGFR mRNA的表達15-16
• 2.6.3 Trizol法提取細胞總RNA16
• 2.6.4 RNA純度與濃度的測定16
• 2.6.5 逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)cDNA的合成16-17
• 2.6.6 PCR擴增17-18
• 2.7 細胞免疫熒光法檢測E-cadherin、α-SMA、EGFR蛋白表達的影響18-19
• 2.7.1 實驗分組18
• 2.7.2 細胞免疫熒光步驟18-19
• 2.8 統(tǒng)計學(xué)處理19-20
• 第三章 實驗結(jié)果20-29
• 3.1 ELISA方法檢測SiO_2刺激AM培養(yǎng)上清液中TGF-β1表達變化20
• 3.2 倒置相差顯微鏡下A549細胞形態(tài)學(xué)觀察20-22
• 3.3 RT-PCR檢測E-cadherin、α-SMA、EGFR mRNA的表達結(jié)果22-26
• 3.3.1 染塵肺上皮細胞E-cadherin、α-SMA、EGFR mRNA的表達22
• 3.3.2 �？颂婺釋θ緣m肺上皮細胞E-cadherin、α-SMA、EGFR mRNA的表達水平的影響22-26
• 3.4 細胞免疫熒光法檢測E-cadherin、α-SMA、EGFR蛋白表達結(jié)果26-29
• 第四章 討論29-34
• 第五章 結(jié)論34-35
• 參考文獻35-39
• 綜述39-58
• 綜述參考文獻50-58
• 攻讀學(xué)位期間成果58-59
• 致謝59-60

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前7條

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  本文關(guān)鍵詞：�？颂婺嵩谖卫w維化進展中的體外干預(yù)作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：282986