支鏈脂肪酸(Branched-Chain Fatty Acids,BCFAs)是一類碳鏈骨架上帶有一個(gè)或者多個(gè)支鏈的脂肪酸,是母乳脂中微量脂肪酸的主要成分。BCFAs也是嬰幼兒出生前腸道內(nèi)的重要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),具有對(duì)腸道黏膜的保護(hù)作用和抑制病原菌形成生物膜的作用。早產(chǎn)兒腸道發(fā)育不完全,母乳源的BCFAs能為其提供重要保護(hù)。目前國(guó)內(nèi)外對(duì)母乳中BCFAs的研究還很少見,特別是對(duì)早產(chǎn)兒母乳BCFAs的研究還是空白,對(duì)于其分布、存在形式、天然來(lái)源及功能評(píng)價(jià)的相關(guān)研究鮮有報(bào)道。所以,本文主要研究了母乳脂,特別是早產(chǎn)兒母乳、胎脂和胎便中BCFAs的組成規(guī)律,考察了胎齡、泌乳期、膳食和乳母狀況對(duì)母乳中BCFAs含量及其位置分布的影響,對(duì)比了BCFAs在胎脂和胎便中的組成差異,并以紫色桿菌及腸道致病菌為細(xì)菌模型研究了從羊毛脂分離的BCFAs對(duì)微生物生物膜的抑制作用。主要研究?jī)?nèi)容如下:首先,以早產(chǎn)兒母乳為原料,采用本實(shí)驗(yàn)室建立起來(lái)的尿素薄層結(jié)合銀離子薄層富集的方法對(duì)早產(chǎn)兒母乳脂進(jìn)行了預(yù)處理,然后檢測(cè)了其中總BCFAs組成。結(jié)果表明母乳脂中BCFAs較為復(fù)雜,通過富集分離,早產(chǎn)兒母乳脂肪酸中BCFAs占總脂肪酸的百分比含量達(dá)到19.42%,低于足月兒母乳中BCFAs含量(23%),BCFAs多數(shù)為常見的末端甲基,碳鏈長(zhǎng)度為C12~C22。同時(shí)選用GC-MS對(duì)早產(chǎn)兒母乳中常見的單甲基BCFAs進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果顯示母乳脂中主要的BCFAs有異(iso)-C14:0、iso-C15:0、反異(anteiso)-C15:0、iso-C16:0、iso-C17:0和anteiso-C17:0。母乳BCFAs最高為0.55%,最低為0.27%,其中,anteiso-C17:0是所有母乳中含量最豐富的BCFAs。其次,對(duì)收集得到的母乳樣本的背景信息進(jìn)行整理,分析了胎齡、泌乳期、膳食和乳母狀況對(duì)母乳中BCFAs含量及其位置分布的影響。結(jié)果表明胎齡、泌乳期、膳食是影響母乳中BCFAs含量的主要因素。母乳BCFAs占總脂肪酸的百分比在整個(gè)泌乳階段顯著不同,其中初乳中含量最高,其次是過渡乳和成熟乳(百分比中位數(shù)分別為0.41%、0.31%和0.28%,p0.05)。早產(chǎn)兒母乳BCFAs與足月兒母乳相比含量較低。偏肉食特別是反芻動(dòng)物產(chǎn)品攝入越多的乳母,其母乳中總BCFAs的含量越高。BCFAs主要位于甘油三酯的sn-2位上(52%~65%),與棕櫚酸相似。再次,用薄層板分離胎脂和胎便的脂質(zhì),采用GC-MS分析對(duì)比了胎脂和胎便中各種脂質(zhì)中的脂肪酸組成,從而全面了解嬰幼兒BCFAs的來(lái)源及去路情況。結(jié)果表明胎脂中含有多種脂質(zhì)種類,其中胎脂總脂質(zhì)中BCFAs占總脂肪酸約17.16%,碳鏈長(zhǎng)度范圍為C12~C26,主要BCFAs是anteiso-BCFAs和iso-BCFAs。胎脂甘油三酯中BCFAs的含量約19.8%。胎脂蠟酯中的BCFAs含量最高(約18.78%),胎脂游離脂肪酸(FFA)中BCFAs含量約為15.14%,說明BCFAs比較均勻地分布于胎脂的各種脂質(zhì)種類中。在乳母妊娠期的最后一個(gè)月約有214.2 mg BCFAs通過胎脂被吞食進(jìn)入其胎兒的消化道中。足月兒胎便脂肪酸中BCFAs的含量約為10.24%,估算胎便中BCFAs的總含量約為20.9mg。早產(chǎn)兒胎便脂肪酸中BCFAs總含量約為5.55%,低于足月兒胎便。胎兒從胎脂中吞食的BCFAs的量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于出生后嬰兒胎便中排出的量,這表明大部分BCFAs在進(jìn)入消化道時(shí)被吸收或保留在腸腔中。最后,采用GC-MS分析了羊毛脂中脂肪酸組成,發(fā)現(xiàn)主要是飽和脂肪酸,且近50%是BCFAs,anteiso-BCFAs和iso-BCFAs分別占22.89%、22.72%,包含了胎脂中可檢測(cè)到的絕大部分種類的BCFAs。說明羊毛脂具有作為BCFAs天然來(lái)源的潛能。通過制備液相純化分離,制得的脂肪酸產(chǎn)品中與胎脂和母乳中含有的BCFAs相同的組分可達(dá)到48.57%,其他脂肪酸均是可食用的常見脂肪酸。BCFAs對(duì)生物膜的形成有顯著的抑制作用,BCFAs濃度在大于80μg/m L時(shí)可明顯的抑制紫色桿菌紫色素的產(chǎn)生。研究發(fā)現(xiàn)BCFAs(1/2 MIC)對(duì)銅綠假單胞桿菌、金黃色葡萄球菌和沙門氏菌生物膜的抑制率分別為12.96%,28.99%,36.9%,且濃度越高,抑制作用越大。
【學(xué)位單位】：江南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R174
【部分圖文】：

1 緒論1 緒論（BCFAs）簡(jiǎn)述與分布碳鏈骨架上帶有一個(gè)或者多個(gè)支鏈(主要是甲基)的脂母乳中主要的是單甲基 BCFAs。單甲基 BCFAs 的甲基位于脂肪酸分子碳鏈骨架倒數(shù)第 2 個(gè)碳原子上，甲基位于脂肪酸碳鏈骨架倒數(shù)第 3 個(gè)碳原子上，形iso-C15:0 和 anteiso-C15:0 分支結(jié)構(gòu)見圖 1-1[1]。BCF肪酸不同的性質(zhì)，具有凍點(diǎn)低、穩(wěn)定性好[2, 3]、膜透[4 的代謝途徑也與直鏈脂肪酸不同。

1 緒論中脂肪并甲酯化后進(jìn) GC 分析，通過使重點(diǎn)在于檢測(cè)樣品中已知的BCFAs以及用法（GC-MS）：氣相色譜儀與質(zhì)譜儀相測(cè)方法。有研究者通過先去除其中的直鏈采用尿素薄層結(jié)合銀離子薄層層析法富集用 GC-MS 鑒定其中常見的 BCFAs 結(jié)構(gòu)胎脂和胎便中 BCFAs 的組成，通過對(duì)比會(huì)選擇性的吸收和保留 BCFAs，與正常譜法：利用物質(zhì)分子對(duì)入射光所產(chǎn)生的頻。Stefanovs 等[30]研究了傅里葉-拉曼光譜力。結(jié)果表明：在不同處理溫度和不同掃As 定量檢測(cè)，純奇數(shù)碳鏈脂肪酸和 BCF

80%以上）的細(xì)菌性感染導(dǎo)致的相關(guān)疾病都與生物膜的形成有關(guān)，形成生物膜的經(jīng)常定殖在魚、釀造、乳品、家禽、肉類、即食包裝食品和包裝材料上[67-69]。QS易形成生物膜菌的分化以及生長(zhǎng)過程中是必需的，對(duì)于其形成復(fù)雜的生物膜的過重要作用[70-72]；這也暗示了治療生物膜的一種可能的方法，使用信號(hào)因子類似物方法阻斷 QS 系統(tǒng)。因此，QS 介導(dǎo)的生物膜形成的抑制研究一直是抗感染研究領(lǐng)點(diǎn)。微生物從浮游形式向無(wú)梗（生物膜）狀態(tài)的轉(zhuǎn)變經(jīng)歷了一系列階段。生物膜形成包括：（i）最初的定植階段，（ii）不可逆黏附階段，（iii）結(jié)構(gòu)分化階段，（iv成熟階段和解聚再定植階段(圖1-3)。簡(jiǎn)而言之，細(xì)菌首先在生物體或者多聚物表．而后由于細(xì)菌之間相互作用聚集形成細(xì)菌團(tuán)塊，隨著細(xì)菌的逐漸增多而形成成的生物膜。最后．生物膜中部分細(xì)菌離開菌群向遠(yuǎn)處播散，從而啟動(dòng)又一個(gè)生物過程。這個(gè)動(dòng)態(tài)的過程取決于生長(zhǎng)介質(zhì)和細(xì)菌細(xì)胞表面的特性，并且這個(gè)過程可各種環(huán)境刺激如溫度和pH的影響。與浮游細(xì)胞相比，生物膜細(xì)胞具有更強(qiáng)的抗環(huán)能力，如饑餓、干燥、殺蟲劑、干燥表面和抗菌劑等。

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