雙酚A(Bisphenol A,BPA)是一種常見的內(nèi)分泌干擾物,廣泛應(yīng)用于生產(chǎn)食品包裝和飲料容器以及其他塑料制品。BPA易溶于酸、堿、油脂等,從盛裝食品和飲料的塑料容器中滲出到食物中而被人體吸收。其結(jié)構(gòu)式與己烯雌酚(DES)相似,兼有雌激素和抗雄激素活性,可影響性腺的發(fā)育,干擾性激素的合成與活性。近年來關(guān)于BPA對腦發(fā)育和行為的影響更是引起廣泛關(guān)注。已有研究表明,BPA暴露能夠改變海馬神經(jīng)元的結(jié)構(gòu)功能,影響小鼠的情緒、空間學習和社會交互能力。社會行為在群居動物的生存繁殖中占據(jù)重要地位,包括人類。社會行為涵蓋了社會性行為、社會等級、攻擊性行為、通訊行為等方面。社會行為異常將導致個體社會關(guān)系紊亂,脫離群體生活而被淘汰。青春期是社會心理和各種情感及價值觀形成的關(guān)鍵時期,更是社會行為形成的關(guān)鍵時期。此時,性腺開始發(fā)育并逐漸成熟,對大腦發(fā)育及其性別分化十分重要。大腦能夠控制個體運動、記憶和情感等活動,且對BPA十分敏感。其中紋狀體、杏仁核腦區(qū)以及多巴胺獎賞系統(tǒng),在社會行為的調(diào)控作用中占據(jù)著重要地位。因此推測,青春期BPA暴露會影響成年雄鼠的性行為、攻擊等社會行為。實驗分別通過三室、社會互作、居住-入侵和墊料傾向等行為模型檢測成年雄鼠的社會交互能力、社會環(huán)境下的性行為和攻擊行為、雄鼠的嗅覺能力。采用Elise檢測成年雄鼠的血清和腦組織中的睪酮水平,蛋白質(zhì)免疫印跡實驗(Western blot)檢測紋狀體、杏仁核腦區(qū)的雄激素受體(AR)以及多巴胺系統(tǒng)相關(guān)蛋白(DAT、D1和D2)的表達水平進一步探討B(tài)PA影響社會行為的機制。研究方法購買3周齡雄性ICR小鼠常規(guī)飼養(yǎng)適應(yīng)1周后隨機分成3個BPA組(0.04、0.4、4 mg/kg/d)和1個溶媒對照組(油),分別連續(xù)灌胃18天(PND 28～PND 46)(PND,出生后天數(shù))。每天觀察小鼠的活動狀態(tài),每周定時記錄體重。PND49開始進行青春期同、異性社會玩耍行為實驗(n=14),初探BPA是否影響雄鼠與同、異性小鼠的社會玩耍時間。PND 91進行成年期行為測定。通過三室模型,檢測BPA對雄鼠社會交互能力與新奇偏好的影響。利用同、異性社會交互行為,檢測BPA是否影響雄鼠與同、異性的社會交互能力和交配行為。通過居住-入侵模型,檢測BPA是否影響雄鼠的攻擊行為。小鼠主要是通過氣味來識別個體進行交流,故采用墊料傾向模型檢測BPA對雄鼠嗅覺的影響。同時,取未進行行為實驗的成年雄鼠眼眶取血,斷頭取腦(n=12)。運用Elise分析法,檢測成年雄鼠大腦和血清的睪酮水平。另取6只未進行行為檢測的雄鼠,分離兩側(cè)紋狀體和杏仁核,用Western blot檢測雄激素受體(AR)、多巴胺轉(zhuǎn)運體(DAT)、多巴胺受體(D1和D2)的蛋白表達水平。研究結(jié)果1.激素水平與生殖發(fā)育雄鼠血清與腦內(nèi)的睪酮水平檢測發(fā)現(xiàn),4 mg/kg/d BPA暴露顯著降低成年雄鼠睪酮水平(腦:P0.05;血清:P0.01),但不影響雄鼠體重、生殖器官系數(shù)以及肛殖距。2.行為檢測(1)青春期社會玩耍實驗發(fā)現(xiàn),BPA暴露使青春期雄鼠與同、異性小鼠的玩耍時間有減少趨勢,但影響無統(tǒng)計學上的意義。(2)成年期三室模型檢測發(fā)現(xiàn),BPA暴露不影響雄鼠在各個隔間的停留時間,但顯著降低雄鼠對陌生鼠的探索時間(0.4～4 mg/kg/d,P0.05,P0.001,P0.05)以及社會與非社會隔間探索時間比值(0.4mg/kg/d,P0.05),顯著延長雄鼠對熟悉鼠的探究(4 mg/kg/d,P0.001),顯著升高探索熟悉與陌生鼠的時間比值(0.4～4 mg/kg/d,均P0.01),表明BPA暴露降低了雄鼠對社會區(qū)域和陌生鼠的探索意愿。(3)墊料傾向?qū)嶒灲Y(jié)果顯示,0.04～4 mg/kg/d BPA暴露顯著降低了雄鼠在雌性墊料區(qū)的探索時間(P0.05,P0.01,P0.05)。0.4、4mg/kg/dBPA暴露延長了雄鼠對雄性墊料的探索時間(P0.01,P0.05),且顯著降低雌、雄墊料區(qū)停留時間比值(P0.01,P0.05),提示BPA暴露降低了雄鼠對雌性氣味的偏好,嗅覺功能可能受損。(4)社會互作實驗發(fā)現(xiàn),0.04、4 mg/kg/d BPA暴露顯著增加雄鼠同性之間的爬跨發(fā)生率(P0.05,P0.01),縮短爬跨潛伏期(P0.05,P0.01),但不影響與異性之間的爬跨行為。BPA暴露還顯著增加了雄鼠對雄性生殖器的嗅探時間(0.04～4 mg/kg/d;P0.05,P0.01,P0.001),降低了其與異性的交互時間(0.04 mg/kg/d,P0.05),并不顯著影響對雌性生殖器的嗅探、以及與同性的交互時間。綜上,BPA暴露可增加雄鼠與同性之間的交配行為和生殖器探索,卻降低與異性之間的交互作用。(5)居住-入侵實驗發(fā)現(xiàn),4mg/kg/dBPA暴露降低雄鼠攻擊行為的發(fā)生率和攻擊總時間(P0.05),延長了攻擊潛伏期(P0.05);0.04、4mg/kg/dBPA還顯著增加雄鼠親和行為時間(P0.01,P0.05),提示BPA暴露降低了雄鼠的攻擊行為,增加其親和行為的發(fā)生。3.Western Blot 分析BPA暴露顯著上調(diào)紋狀體腦區(qū)AR(0.04、0.4 mg/kg/d,均P0.05)和DAT(0.04 mg/kg/d,P0.05)表達,但對杏仁核腦區(qū)無顯著影響;0.04、4mg/kg/d BPA暴露上調(diào)紋狀體和杏仁核腦區(qū)D1和D2受體表達(紋狀體:D1,P0.001,P0.05;D2,P0.05,P0.001;杏仁核:D1,均P0.05;D2,P0.05,P0.001)。提示BPA暴露改變了紋狀體AR表達水平,并干擾紋狀體和杏仁核的DA遞質(zhì)系統(tǒng)的活動。結(jié)論:青春期BPA暴露雖然不顯著影響青年雄鼠的社會玩耍,但改變雄鼠成年后的社會行為,降低其社會交互能力和社會新奇偏好,增加同性之間的爬跨、親和行為,降低入侵攻擊行為。這些社會行為的改變可能與BPA暴露降低成年雄鼠腦和血清的睪酮水平、改變紋狀體AR表達水平有關(guān);此外,與社會行為相關(guān)的紋狀體和杏仁核的DA遞質(zhì)系統(tǒng)的改變可能也有關(guān)。由于BPA對雄性社會行為的影響具有永久的毒性作用,這應(yīng)該引起高度重視。
【學位單位】：浙江師范大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R114
【部分圖文】：

受需求的驅(qū)動，出現(xiàn)追求一定目標的行為。這一行為活動中，多巴胺獎賞系統(tǒng)尤為逡逑重要。該系統(tǒng)涉及到前額葉皮質(zhì)、紋狀體、杏仁核、海馬、中腦腹側(cè)被蓋區(qū)（ＶＴＡ）逡逑等多個腦區(qū)，其中ＶＴＡ及其投射區(qū)伏隔核（ＮＡｃ）是主要的神經(jīng)基礎(chǔ)（如圖１．１）。逡逑ＮＡｃ位于前腦基底，是腹側(cè)紋狀體的一個組成部分，參與動物獎賞活動的重要部位。逡逑（＂＂＂＂邋Ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ邋＾逡逑ＰＰ：逡逑＇邐邐邐邋＾邐ＧＡＢＡ逡逑——？邋Ｄｏｐａｍｉｎｅ逡逑－？邋Ｇｌｕｔａｍａｔｅ逡逑圖１．１多巴胺獎賞系統(tǒng)逡逑７逡逑

l#備＇ｈｒｔ■、柳邱；咖妙邐＇逡逑圖３．１社會玩耍行為模型裝置圖逡逑３．２．２社會交互與新奇偏好實驗逡逑該實驗測試的模型是一個四周涂黑的木制矩形無蓋的籠盒（５６Ｘ２９Ｘ２３邋ｃｍ），逡逑由固定的兩個木隔板分成三個等分，分別為社會隔間（含陌生小鼠），中間隔間和逡逑非社會隔間（空滾筒）。實驗小鼠可以自由出入三個隔間。實驗用的兩個滾筒上有空逡逑隙可供小鼠與滾筒中的小鼠互相嗅探氣味和交流（如圖３．２）。逡逑】７ｃｒｏ邐？－逡逑Ｉｆｆ邐１１１邐１邋＼）逡逑［Ｉ—Ｉ￣￣Ｉ——逡逑１１１１逡逑？邐邐邐ｉ逡逑＾Ｉｃｎｉ逡逑圖３．２三室行為模型裝置圖逡逑第一部分為社會交互能力測試（ＳｏｃｉａｂＵｉｔｙｔｅｓｔ）。撫摸實驗鼠三次后從中間隔逡逑間放入模型中，自由探索５邋ｍｉｎ，熟悉陌生的環(huán)境，減少新環(huán)境帶來的焦慮感。熟逡逑悉后，拿出待測小鼠，將空滾筒和裝有１號陌生鼠的滾筒分別放入兩邊的隔間內(nèi)，逡逑再次將實驗小鼠放入三室模型中。錄像系統(tǒng)記錄５邋ｍｉｎ內(nèi)待測小鼠在三個隔間的停逡逑留時間和相應(yīng)的進入次數(shù)，以及其對空滾筒和陌生鼠的嗅探時間和次數(shù)，以此來逡逑檢測小鼠的社會交互能力。實驗鼠嗅探陌生鼠時間越多或社會隔間停留時間越長，逡逑則可表示該小鼠的社會交互能力越強。逡逑第二部分社會新奇偏好檢測。將待測小鼠和１號陌生小鼠取出。此時１號陌生鼠逡逑可作為熟悉鼠，２號新陌生鼠放入空籠內(nèi)。同樣，將兩個滾筒分別放入兩個隔間，逡逑１８逡逑

由固定的兩個木隔板分成三個等分，分別為社會隔間（含陌生小鼠），中間隔間和逡逑非社會隔間（空滾筒）。實驗小鼠可以自由出入三個隔間。實驗用的兩個滾筒上有空逡逑隙可供小鼠與滾筒中的小鼠互相嗅探氣味和交流（如圖３．２）。逡逑】７ｃｒｏ邐？－逡逑Ｉｆｆ邐１１１邐１邋＼）逡逑［Ｉ—Ｉ￣￣Ｉ——逡逑１１１１逡逑？邐邐邐ｉ逡逑＾Ｉｃｎｉ逡逑圖３．２三室行為模型裝置圖逡逑第一部分為社會交互能力測試（ＳｏｃｉａｂＵｉｔｙｔｅｓｔ）。撫摸實驗鼠三次后從中間隔逡逑間放入模型中，自由探索５邋ｍｉｎ，熟悉陌生的環(huán)境，減少新環(huán)境帶來的焦慮感。熟逡逑悉后，拿出待測小鼠，將空滾筒和裝有１號陌生鼠的滾筒分別放入兩邊的隔間內(nèi)，逡逑再次將實驗小鼠放入三室模型中。錄像系統(tǒng)記錄５邋ｍｉｎ內(nèi)待測小鼠在三個隔間的停逡逑留時間和相應(yīng)的進入次數(shù)，以及其對空滾筒和陌生鼠的嗅探時間和次數(shù)，以此來逡逑檢測小鼠的社會交互能力。實驗鼠嗅探陌生鼠時間越多或社會隔間停留時間越長，逡逑則可表示該小鼠的社會交互能力越強。逡逑第二部分社會新奇偏好檢測。將待測小鼠和１號陌生小鼠取出。此時１號陌生鼠逡逑可作為熟悉鼠，２號新陌生鼠放入空籠內(nèi)。同樣，將兩個滾筒分別放入兩個隔間，逡逑１８逡逑

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本文編號：2810602