發(fā)布時間：2020-07-24 05:58

【摘要】：目的了解貴州、四川省5個縣夏季蚊蟲和蠓蟲種類和密度,并發(fā)現(xiàn)當(dāng)?shù)刂饕ハx蚊蟲和蠓蟲所攜帶的蟲媒病毒。本研究于2016、2017年連續(xù)2年對貴州、四川省5個縣進行系統(tǒng)的蚊蟲和蠓蟲標(biāo)本采集和蟲媒病毒的調(diào)查研究。對當(dāng)?shù)匚孟x和蠓蟲傳播人畜疾病的預(yù)防預(yù)控制提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。方法2016、2017年7、8月份在貴州、四川省5個縣村莊的人舍和動物飼養(yǎng)圈(豬圈、牛圈等)蚊蟲孳生環(huán)境采集蚊蟲和蠓蟲標(biāo)本。對采集的標(biāo)本在冰浴條件下進行形態(tài)學(xué)分類,按照采集環(huán)境和蚊蟲等信息(蚊蟲每50只分為一管,蠓蟲大約500只為一管)編號登記,立即放入液氮中保存并轉(zhuǎn)移至實驗室進行鑒定。標(biāo)本在實驗室研磨、離心,離心上清液平行接種BHK-21細胞(金黃色地鼠腎細胞)和C6/36細胞(白紋伊蚊卵細胞)進行病毒分離和病毒基因檢測。細胞出現(xiàn)病變作用(CPE)時收取病毒液使用分子生物學(xué)方法對陽性分離物進行分子生物學(xué)鑒定,使用多種軟件對病毒基因組核苷酸序列進行序列同源性分析及分子遺傳學(xué)分析。結(jié)果1.貴州省吸血昆蟲及蟲媒病毒的分離及鑒定2016、2017年8月在貴州省銅仁市德江縣、江口縣共采集蚊蟲3屬5種16175只蚊蟲(中華按蚊、致倦庫蚊、騷擾阿蚊、三帶喙庫蚊、褐尾庫蚊),1300只蠓蟲。騷擾阿蚊和中華按蚊是當(dāng)?shù)氐膬?yōu)勢蚊種,分別占蚊蟲采集總數(shù)的43.7%(7072/16175)和34.1%(5518/16175)。蚊蟲和蠓蟲標(biāo)本共研磨270批次。經(jīng)實驗室常規(guī)處理后接種BHK-21細胞和C6/36細胞,共獲得11株可以穩(wěn)定傳代的病毒分離物,經(jīng)分子生物學(xué)檢測與鑒定其中2株病毒為寨卡病毒(分別分離自致倦庫蚊和騷擾阿蚊),4株分離物為乙腦病毒(3株來自致倦庫蚊,1株來自三帶喙庫蚊),2株版納病毒(分別分離自致倦庫蚊和中華按蚊),1株濃核病毒(騷擾阿蚊),2株蓋塔病毒(均分離自騷擾阿蚊),蠓蟲標(biāo)本未獲得病毒分離物。使用12種病毒屬特異性和種特異性病毒基因擴增引物對270批標(biāo)本研磨液進行病毒基因擴增均未獲得陽性結(jié)果。2.四川省吸血昆蟲及蟲媒病毒的分離及鑒定2016、2017年8月在四川省瀘州市合江縣、古藺縣、宜賓市南溪區(qū)共采集到3屬4種蚊蟲17019只,蠓蟲12700只。其中三帶喙庫蚊是當(dāng)?shù)氐膬?yōu)勢蚊蟲,占蚊蟲采集總數(shù)的79.4%(13519/17019),其次是騷擾阿蚊,占蚊蟲采集總數(shù)的11.1%(1897/17019)。所有蠓蟲和蚊蟲標(biāo)本共研磨為275批次。經(jīng)實驗室常規(guī)處理后接種BHK-21細胞和C6/36細胞,在合江縣三帶喙庫蚊標(biāo)本獲得3株可以穩(wěn)定傳代的病毒分離物,經(jīng)分子生物學(xué)檢測與鑒定為乙腦病毒。使用12對屬特異性和種特異性病毒基因擴增引物對275批標(biāo)本研磨液進行病毒基因擴增,蚊蟲標(biāo)本均為陰性,而在3批蠓蟲標(biāo)本中獲得阿卡斑病毒基因擴增陽性。結(jié)論本研究于2016和2017年夏季連續(xù)在我國西南地區(qū)的貴州和四川省共5個縣自然環(huán)境采集到大量蚊蟲和蠓蟲,其中貴州省2縣采集到5種蚊蟲而騷擾阿蚊為當(dāng)?shù)貎?yōu)勢蚊種,四川省3縣采集到4種蚊蟲以三帶喙庫蚊為優(yōu)勢蚊種。在以上兩地的蚊蟲標(biāo)本中共分離到14株可以穩(wěn)定傳代的病毒分離物,其中在貴州省采集的兩種蚊蟲標(biāo)本中分離到寨卡病毒,這不僅是我國首次在自然界發(fā)現(xiàn)寨卡病毒的存在,甚至在東亞地區(qū)也是首次發(fā)現(xiàn),具有重要的流行病學(xué)意義。在以上兩地蚊蟲標(biāo)本中分離到多株乙腦病毒,提示當(dāng)?shù)厝匀淮嬖谝夷X病毒在自然界的循環(huán),這一研究結(jié)果為解釋當(dāng)?shù)匾夷X持續(xù)多年的流行提供了病原學(xué)依據(jù)。此外,在四川省采集的多批蠓蟲標(biāo)本中檢測到阿卡班病毒基因擴增陽性,這是首次在四川省自然界采集的吸血昆蟲標(biāo)本中發(fā)現(xiàn)阿卡班病毒的存在,對當(dāng)?shù)貏游锛膊〉念A(yù)防控制提出新的挑戰(zhàn)。
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R181.3
【圖文】：

的動物飼養(yǎng)圈（豬圈、牛圈等）蚊蟲孳生環(huán)境采集蚊蟲（圖1.1）。于晚 19:00 到次日早 06:00 左右在采集地點捕蚊。1.2 采集工具本研究的吸血昆 蟲使用“功夫小帥 ”牌紫外誘蚊燈（ Wuhan Lucky StarEnvironmental Protection Technology Co., Ltd., Hubei, China）。由于蚊蟲對溫度敏感，具有趨光性、習(xí)慣群聚。因此誘蚊燈能夠高效捕蚊，將誘蚊燈懸掛在人房、豬圈、牛圈、雞圈等易于蚊蟲孳生的環(huán)境，誘蚊燈懸掛距離地面大約 1.5 米，蚊蟲比較密集。其它采集工具包括：定位儀、電池、手電筒、蚊蟲收集網(wǎng)、剪刀、鑷子、冰排、平皿、凍存管、記號筆、采集信息本、膠布、放大鏡、液氮罐。1.3 吸血昆蟲標(biāo)本的處理采集的昆蟲當(dāng)天在當(dāng)?shù)丶膊】刂祁A(yù)防中心進行冷鏈處理，第一步將誘蚊燈的收

圖 1.2 貴州省采集吸血昆蟲標(biāo)本的構(gòu)成Figure 1.2 Composing of blood sucking insects collected in Guizhou province3 討論貴州省屬于亞熱帶氣候，雨量較多，地形地貌復(fù)雜，非常適宜蚊蟲的孳生，7、8 月份蚊蟲密度最大，本研究在 2016、2017 年 8 月份開展蟲媒病毒的調(diào)查，保證了采集蚊蟲的數(shù)量，德江縣的居池壩村和石打頭村位于德江縣的東西兩邊，可以在一

量的脫落、融合。研究結(jié)果能夠代表貴州省采集當(dāng)?shù)氐南x媒病毒種類，共采集 5 種蚊蟲（中華按蚊、騷擾阿蚊、致倦庫蚊、三帶喙庫蚊）中均分離離物的分離地點來看，11 株病毒物均來自于貴州省德江縣，在江到病毒，可能與采集蚊蟲的生境環(huán)境有關(guān)，太平鎮(zhèn)距離梵凈山景、河流清、衛(wèi)生工作較好，加上在江口縣采集時間較少，采集蚊蟲能在江口縣分離到病毒。結(jié)016、2017 年貴州省德江縣，江口縣共采集 3 屬 5 種 16175 只蚊蟲，磨了 270 批標(biāo)本，上清液分別 BHK-21 細胞和 C6/36 細胞，共獲得離物。 株病毒株均分離自貴州省德江縣，從地區(qū)分布來看，7 株分離自德壩村，4 株分離自德江縣青龍鎮(zhèn)石打頭村。從蚊種來源來看，5 株庫蚊，4 株病毒株來自騷擾阿蚊，1 株病毒分離物來自中華按蚊，自三帶喙庫蚊。

【參考文獻】

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本文編號：2768420