【摘要】：鼻飼營養(yǎng)品是一類氨基酸含量較高且成分復雜的特殊醫(yī)用配方食品,對其中氨基酸含量進行研究,即可為臨床上量化營養(yǎng)支持效果和生產(chǎn)上進行產(chǎn)品質(zhì)控提供方法,也可為進一步完善相關(guān)標準提供參考。本研究通過對衍生條件和色譜條件進行優(yōu)化,成功建立了鼻飼營養(yǎng)品中21種氨基酸的高效液相分析方法。采用異硫氰酸苯酯(PITC)作為衍生劑,通過對衍生劑用量、萃取劑用量、衍生化反應時間和衍生化反應溫度參數(shù)進行優(yōu)化;衍生劑用量為1.0mL,萃取劑用量為4.0mL,反應時間為60 min,反應溫度為室溫時,氨基酸衍生化效果理想,且衍生物在48 h內(nèi)保持穩(wěn)定。通過對流動相、洗脫程序、色譜柱、峰型優(yōu)化劑、柱溫和流速等因素進行優(yōu)化,流動相A為10 mmol/L磷酸緩沖液,流動相B為乙腈/甲醇/水(45/45/10),色譜柱為InertSil ODS-3(3.0 mm×100 mm,3μm),優(yōu)化劑為0.15%三乙胺,柱溫為40℃,流速為1.0 mL/min時,30 min內(nèi)即可獲得理想的氨基酸分離效果。方法學驗證表明,21種氨基酸在0.01-20.0μmol/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,相關(guān)系數(shù)均大于0.999,檢出限為0.002-0.038μmol/L。在高、中、低三個添加水平下,方法重復性良好,分離效果理想。使用已建立的高效液相分析方法,對經(jīng)前處理后的鼻飼營養(yǎng)品樣品進行氨基酸含量測定。前處理方面,首先使用聚乙二醇/乙醇溶液(40/60)80 mL作為蛋白沉淀劑,然后建立陽離子交換樹脂法對氨基酸進行分離純化。當上柱液pH值為2.5,上柱液體積小于115 mL,流速為3柱體積/小時,洗脫液為3%氨水80 mL時,不同含量水平下21種氨基酸的回收率為62.48%-82.79%,回收效果理想。經(jīng)前處理的樣品測定結(jié)果表明,不同來源的4組樣品中氨基酸含量差異明顯。其中石藥集團樣品中氨基酸含量最為豐富;科室自配和東澤特醫(yī)樣品中氨基酸含量均衡,產(chǎn)品針對性強;恩特紐健樣品中氨基酸含量較低且各氨基酸濃度不均衡。綜上所述,本研究建立的鼻飼營養(yǎng)品中21種氨基酸含量測定方法具有線性范圍廣泛、重復性良好、回收率理想和定量準確等特點,可為產(chǎn)品質(zhì)控和相關(guān)標準的制訂與更新提供參考。
【學位授予單位】：長春理工大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R155.5
【圖文】：

需要使用衍生劑與氨基酸反應，生成具有強熒光/強紫外吸收的衍生物，以便于進行定量分析。本研究選用兩種應用較為廣泛的衍生劑 2,4-二硝基氟苯（C6H3FN2O4，F(xiàn)DNB）和異硫氰酸苯酯（C7H5NS，PITC）分別進行衍生化操作，并對比衍生化效果。FDNB與氨基酸的反應式如圖 2.1 所示；PITC 與氨基酸的反應式如圖 2.2 所示。

條件即可進行，且操作便捷；相比之下 FDNB 衍生法在需要暗處 60 ℃水浴環(huán)境的同時，操作繁瑣，需多次加入外來試劑，有增大操作誤差的可能，也不利于進行優(yōu)化。將標準工作液濃度降低為 0.2 μmol/L，分別使用上述步驟再次進行衍生化操作。通過對比 2 種氨基酸衍生化方法的 21 種氨基酸色譜峰面積，再次對 2 種方法做出評價（圖 2.3）。

衍生化操作步驟為：取樣品 1 mL，加入 0.1 mol/L 異硫氰酸苯酯-乙腈溶液 1mL 和 1 mol/L 三乙胺-乙腈溶液 1mL，室溫避光放置 1 小時。向反應液中加入 4mL 正己烷，渦旋振蕩 5min。靜置分層后取下層液，經(jīng) 0.22 μm 有機相濾膜過濾后裝入進樣瓶中。2.3 色譜條件的建立2.3.1 流動相 A 的選擇流動相溶劑類型和組成選擇通常是色譜條件優(yōu)化的最優(yōu)先操作。本方法將流動相A 設(shè)為水相，目前氨基酸分析方法中水相流動相多為甲酸水溶液，乙酸鈉水溶液和磷酸緩沖液。通過對比不同流動相 A 的分離效果，對方法適用流動相 A 進行確定。使用 2 μmol/L 標準工作液，流動相 A 分別設(shè)置為 0.2%甲酸水溶液、20 mmol/L乙酸鈉水溶液和 20 mmol/L 磷酸緩沖液，其他液相條件參照 2.1.4 節(jié)（2），考察不同體積分數(shù)的甲酸水溶液對分離效果的影響（圖 2.10）。

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 趙英蓮;牟德華;李艷;;2,4-二硝基氟苯柱前衍生HPLC檢測樹莓中游離氨基酸[J];食品科學;2015年06期

相關(guān)重要報紙文章 前1條

1 徐亞靜;;特醫(yī)盛宴 從激情起步到理性回歸[N];中國醫(yī)藥報;2017年

本文編號：2765632