【摘要】：背景和目的:丙烯酰胺(Acrylamide),是一種在現(xiàn)實(shí)生活中廣泛被使用的化工材料,近幾年來(lái)有學(xué)者報(bào)道顯示,富含碳水化合物的食品在高溫加工的過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生大量的丙烯酰胺。研究表明該化合物可以通過(guò)皮膚、呼吸道和消化道等方式進(jìn)入機(jī)體內(nèi),并對(duì)人類或動(dòng)物的各個(gè)系統(tǒng)造成損害,尤其是生殖系統(tǒng)。已有研究顯示,妊娠期間丙烯酰胺的暴露會(huì)引起流產(chǎn)率升高、胎兒的體重下降和畸形胎兒數(shù)量增加。然而,這些不良妊娠結(jié)局的出現(xiàn)是否與妊娠期丙烯酰胺暴露導(dǎo)致胎盤的生長(zhǎng)發(fā)育障礙密切相關(guān)呢?至目前為止,還未見(jiàn)相關(guān)的研究。因此,我們擬通過(guò)建立妊娠動(dòng)物模型,采用強(qiáng)制性灌胃給予不同劑量丙烯酰胺的方式,來(lái)探究丙烯酰胺對(duì)妊娠期小鼠胎盤生長(zhǎng)發(fā)育的影響及其作用機(jī)制。方法:1.構(gòu)建動(dòng)物模型及取材:將昆明品種的成年雌性和雄性小鼠(25-30 g)交配,并以在陰道口檢出陰栓為標(biāo)準(zhǔn)作為妊娠第一天(GD 1)。從妊娠第3天(GD 3)開(kāi)始,根據(jù)實(shí)驗(yàn)小鼠的體重,通過(guò)強(qiáng)制性灌胃的方式給予小鼠不同劑量的丙烯酰胺(0,對(duì)照組;10 mg/kg/day,低劑量組;50 mg/kg/day,高劑量組),并分別在妊娠第八天(GD 8)和妊娠第十三天(GD 13)時(shí)留取小鼠子宮、胎盤、卵巢、肝臟及腎臟標(biāo)本。2.通過(guò)HE染色研究妊娠期間丙烯酰胺暴露對(duì)GD 8和GD 13小鼠胎盤組織結(jié)構(gòu)的影響。3.通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR研究妊娠期間丙烯酰胺暴露對(duì)GD 8和GD 13小鼠胎盤發(fā)育相關(guān)基因表達(dá)水平的影響。4.通過(guò)免疫組織化學(xué)研究妊娠期間丙烯酰胺暴露對(duì)GD 13小鼠胎盤迷路層血管的影響。5.通過(guò)免疫組織化學(xué)研究妊娠期間丙烯酰胺暴露對(duì)GD 8和GD 13小鼠胎盤細(xì)胞增殖的影響。6.通過(guò)Western blot檢測(cè)妊娠期間丙烯酰胺暴露對(duì)GD 8和GD 13小鼠胎盤細(xì)胞凋亡和MAPK信號(hào)通路的影響。結(jié)果:1.與對(duì)照組相比,GD 8和GD 13的小鼠暴露于不同劑量丙烯酰胺后,其肝臟和腎臟的重量及其臟器系數(shù),均未表現(xiàn)出顯著性差異(P0.05);而卵巢重量及其臟器系數(shù)顯著降低(P0.05)。在GD 8,與對(duì)照組相比,丙烯酰胺處理組小鼠的胚胎活產(chǎn)數(shù)和吸收數(shù),子宮的重量及其與體重的比值均沒(méi)有明顯的變化(P0.05)。然而,在GD 13,高劑量組小鼠的存活胚胎數(shù)明顯低于對(duì)照組(P0.05),而胚胎吸收數(shù)明顯增加(P0.01);隨著丙烯酰胺劑量的加大,與對(duì)照組相比,小鼠子宮、胎盤和胎兒的重量及其與體重的比值均顯著地降低(P0.01或0.001)。2.HE染色結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,在GD 8,丙烯酰胺的處理組明顯抑制了外胎盤錐的生長(zhǎng)與發(fā)育;在GD 13,暴露于丙烯酰胺顯著降低了胎盤總面積、胎盤海綿層及迷路層的面積(P0.01或0.001)。3.實(shí)時(shí)熒光定量PCR的結(jié)果顯示,在GD 8和GD 13,丙烯酰胺處理組小鼠的胎盤Esx1、Hand2、Hand1 mRNA的表達(dá)水平顯著低于對(duì)照組(P0.01或0.001)。在GD 8,與對(duì)照組相比,丙烯酰胺處理組的Ascl2和Fral mRNA表達(dá)水平顯著增加(P0.001);而對(duì)于Eomes mRNA的表達(dá)水平,低劑量組明顯下降,高劑量組顯著增加(P0.001)。在GD 13,與對(duì)照組相比,暴露于丙烯酰胺顯著抑制胎盤中Eome和Ascl2 mRNA的表達(dá)水平(P0.001)。4.免疫組化的結(jié)果顯示,在GD 13,與對(duì)照組相比,丙烯酰胺暴露顯著抑制小鼠胎盤迷路層血管的形成,導(dǎo)致血管塌陷和血管數(shù)量減少。5.免疫組化的結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,在GD 8,低劑量的丙烯酰胺對(duì)Ki67陽(yáng)性細(xì)胞的數(shù)量沒(méi)有顯著影響(P0.05),而高劑量組的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量與對(duì)照組相比顯著減少(P0.05)。在GD13,丙烯酰胺處理組的Ki67陽(yáng)性細(xì)胞的數(shù)量均顯著低于對(duì)照組(P0.001)。6.蛋白免疫印跡的結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,在GD 8和GD 13,丙烯酰胺處理組的Bax、Cleaved-caspase-3和Cleaved-caspase-8的表達(dá)水平均明顯增加(P0.01或0.001);而抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)水平明顯降低,高劑量組具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。7.蛋白免疫印跡的結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,在GD 8和GD 13,低劑量丙烯酰胺處理后的小鼠胎盤中磷酸化Erk1/2的表達(dá)水平?jīng)]有明顯的變化(P0.05),而高劑量組的磷酸化Erk1/2水平明顯增加并具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。結(jié)論:妊娠期丙烯酰胺的暴露抑制了小鼠胎盤的生長(zhǎng)與發(fā)育,其主要通過(guò)破壞胎盤迷路層血管的生成、下調(diào)胎盤發(fā)育相關(guān)基因、抑制胎盤細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡等途徑實(shí)現(xiàn)。
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R114
【圖文】：

第 3 章 結(jié)果3.1 妊娠期丙烯酰胺暴露對(duì)小鼠臟器重量和臟器系數(shù)的影響于妊娠第三天（GD 3）給予不同劑量丙烯酰胺（0，10 mg/kg/day，50mg/kg/day）（圖 1），在妊娠第八天（GD 8）和第十三天（GD 13），對(duì)小鼠生殖系統(tǒng)、卵巢、肝臟、腎臟等臟器稱重后分別進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析（表 1），結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，不同劑量的丙烯酰胺（10 mg/kg/day，50 mg/kg/day）暴露后對(duì) GD 8 和 GD 13 小鼠的肝臟和腎臟的重量及臟器系數(shù)，均無(wú)明顯影響（ P>0.05 ）， 而 GD 8 和 GD 13 的 卵 巢 重 量 及 其 臟 器 系 數(shù) 均 明 顯 下 降（P<0.05）。在 GD 8，處理組生殖系統(tǒng)總重量和相對(duì)重量沒(méi)有明顯的變化，然而在 GD 13 時(shí)，丙烯酰胺暴露明顯降低生殖系統(tǒng)的總重量和臟器系數(shù)（P<0.05）。

圖 2 妊娠期丙烯酰胺暴露對(duì)小鼠胚胎活產(chǎn)數(shù)和吸收數(shù)的影響Fig. 2 Effects of acrylamide exposure on the number of viable and resorbed embryos in miceA. GD 8 和 GD 13 小鼠子宮外形圖，箭頭指示為吸收胚胎處；B. GD 8 小鼠胚胎活產(chǎn)數(shù)和吸收數(shù)的統(tǒng)計(jì)；C. GD 13 小鼠胚胎活產(chǎn)數(shù)和吸收數(shù)的統(tǒng)計(jì)，格子柱狀圖代表胚胎的吸收數(shù)；結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示（n=10），與對(duì)照組相比，* P＜0.05，** P＜0.01。

17圖 3 妊娠期丙烯酰胺暴露對(duì)小鼠子宮、胎盤、胎兒重量的影響Fig. 3 Effects of acrylamide exposure on the weight of uterus, placenta and fetus in miceA. GD 13 胎盤+胚胎和胎盤的外形圖；B. GD 8 小鼠子宮重量及子宮重量/體重；C. GD 13 小鼠子宮重量及子宮重量/體重；D. GD 13 小鼠胎盤和胎兒重量；E. GD 13 小鼠胎盤重量/體重，胎兒重量/體重；結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示（n=10），與對(duì)照組相比，** P＜0.01，*** P＜0.001。

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

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本文編號(hào)：2764727