【摘要】：【研究背景與目的】甲醛(formaldehyde,FA)是一種有毒性氣體,已經(jīng)證實(shí)當(dāng)甲醛在體內(nèi)代謝失衡時,容易引起大腦組織氧化受損,誘導(dǎo)神經(jīng)毒性。硫化氫(hydrogen sulfide,H_2S)是一種具有抗氧化作用的內(nèi)源性氣體分子,具有抗氧化和保護(hù)神經(jīng)的作用。鐵死亡(ferroptosis)是一種氧化型細(xì)胞死亡方式,與多種神經(jīng)變性疾密切相關(guān)。本文將探討硫化氫是否可拮抗甲醛誘導(dǎo)的大鼠海馬鐵死亡,為甲醛的神經(jīng)毒性的防治提供新思路�！痉椒ā�1.Western blotting檢測大鼠海馬組織中谷胱甘肽過氧化物酶4(Glutathione-dependent antioxidant enzyme glutathione peroxidase 4,GPX4)的表達(dá);2.酶聯(lián)免疫吸附法(Enzyme-linked Immunosorbent Assay,ELISA)檢測大鼠海馬組織中谷胱甘肽(Glutathione,GSH)、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)、4-羥基壬烯醛(4-Hydroxynonenal,4-HNE)的含量;3.C11-BODIPY染色流式細(xì)胞術(shù)檢測大鼠海馬組織中脂質(zhì)活性氧(Reactive oxygen species,ROS)水平;4.Calcein-acetoxymethlester(Ca-AM)染色流式細(xì)胞儀檢測大鼠海馬組織中Fe~(2+)含量;5.透射電鏡觀察大鼠海馬組織CA3區(qū)線粒體平均橫切面的大小;【結(jié)果】1.甲醛誘導(dǎo)大鼠海馬鐵死亡的作用大鼠通過側(cè)腦室微量注射2.5μL不同濃度的FA,連續(xù)7天后,取海馬進(jìn)行檢測:1.1 Elisa法檢測大鼠海馬組織中GSH、MDA、4HNE含量,結(jié)果顯示FA(0.1,1,10μM)呈濃度依賴性的降低組織GSH水平和增加MDA、4HNE的含量;1.2 Western blotting檢測海馬組織中GPX4的水平,結(jié)果顯示FA(0.1,1,10μM)呈濃度依賴性降低GPX4水平的表達(dá);1.3染色流式檢測海馬組織中脂質(zhì)ROS、Fe~(2+)含量,結(jié)果顯示FA(10μM)可顯著增加海馬脂質(zhì)ROS以及Fe~(2+)含量;1.4透射電鏡檢測海馬CA3區(qū)內(nèi)線粒體平均橫切面積的大小,結(jié)果顯示FA(10μM)可明顯縮小線粒體平均橫切面積;2.硫化氫對甲醛誘導(dǎo)大鼠海馬鐵死亡的拮抗作用大鼠通過腹腔注射H_2S供體NaHS(10,30,100μmol/kg)7 h后,再通過側(cè)腦室微量注射2.5μL的FA(1μM),連續(xù)給藥7 d后,取海馬組織進(jìn)行如下檢測:2.1 Elisa法檢測大鼠海馬組織GSH、MDA、4HNE含量,結(jié)果顯示NaHS(10,30,100μmol/kg)可拮抗FA(1μM)誘導(dǎo)的海馬組織GSH水平的降低和MDA、4HNE含量的增加;2.2 Western blotting檢測海馬組織GPX4水平,結(jié)果顯示NaHS(10,30,100μmol/kg)可逆轉(zhuǎn)FA(1μM)導(dǎo)致的海馬組織GPX4水平的降低;2.3染色流式術(shù)檢測海馬組織ROS、Fe~(2+)含量,結(jié)果顯示NaHS(10,30,100μmol/kg)可減少FA(1μM)誘導(dǎo)的海馬組織ROS以及Fe~(2+)含量的增多;2.4透射電鏡觀察海馬CA3區(qū)線粒體平均橫切面積的大小,結(jié)果顯示NaHS(30,100μmol/kg)可明顯逆轉(zhuǎn)FA(1μM)引起的海馬組織線粒體平均橫切面積的縮小;【結(jié)論】硫化氫可拮抗甲醛誘導(dǎo)大鼠海馬鐵死亡
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R114
【圖文】：

第 3 章 結(jié)果導(dǎo)大鼠海馬鐵死亡誘導(dǎo)大鼠海馬脂質(zhì) ROS 水平的升高作為鐵依賴和氧化形式的細(xì)胞死亡方式，目前研究與脂質(zhì) ROS 相關(guān)，細(xì)胞中脂質(zhì) ROS 的積累是誘發(fā)了探討甲醛是否可引起海馬發(fā)生鐵死亡，我們首先術(shù)檢測大鼠海馬脂質(zhì) ROS 水平，結(jié)果如圖 3.1 所示7 天后，大鼠海馬脂質(zhì) ROS 水平增加。

圖 3.2 流式細(xì)胞術(shù)檢測 FA 對大鼠海馬 Fe2+水平的影響大鼠給予 2.5 μL 的 FA(0.1, 1, 10 μM，i .c.v.) 處理 7 d 后，取海馬組織制成細(xì)胞懸液，Calcein-AM染色流式細(xì)胞術(shù)檢測海馬 Fe2+水平。3.1.3 FA 誘導(dǎo)大鼠海馬抗氧化力降低鐵死亡作為一種氧化型的死亡方式，其在生化方面主要是谷胱甘肽(γ-glutamylcysteinylglycine ， GSH) 耗竭，谷胱甘肽過氧化物酶 4(glutathioneperoxidase 4，GPX4) 活性下降，細(xì)胞抗氧化能力下降，脂質(zhì)過氧化反應(yīng)增加，引起細(xì)胞死亡。有研究發(fā)現(xiàn)當(dāng) GSH 的合成或 GPX4 活性水平在體內(nèi)外抑制時，即可觸發(fā)鐵死亡[21, 22]。之后為了明確甲醛對大鼠海馬組織抗氧化能力的影響，我們使用Elisa 法和 Western blotting 法分別檢測大鼠海馬 GSH 的含量和 GPX4 活性水平。結(jié)果如 3.3 所示，0.1、1、10 μM 的 FA 處理大鼠后，大鼠海馬組織 GSH 的含量均明顯下降（圖 3.3A）；FA 在 1、10 μM 時可明顯減少 GPX4 的表達(dá)，而 0.1 μM 的 FA對其沒有明顯的影響（圖 3.3 B）。這些結(jié)果說明甲醛可降低大鼠海馬組織的抗氧化能力。

圖 3.2 流式細(xì)胞術(shù)檢測 FA 對大鼠海馬 Fe2+水平的影 FA(0.1, 1, 10 μM，i .c.v.) 處理 7 d 后，取海馬組織制成細(xì)測海馬 Fe2+水平。大鼠海馬抗氧化力降低為一種氧化型的死亡方式，其在生化方面主inylglycine ， GSH) 耗竭，谷胱甘肽過氧化物PX4) 活性下降，細(xì)胞抗氧化能力下降，脂質(zhì)過氧化究發(fā)現(xiàn)當(dāng) GSH 的合成或 GPX4 活性水平在體內(nèi)外之后為了明確甲醛對大鼠海馬組織抗氧化能力的rn blotting 法分別檢測大鼠海馬 GSH 的含量和 GP0.1、1、10 μM 的 FA 處理大鼠后，大鼠海馬組織A）；FA 在 1、10 μM 時可明顯減少 GPX4 的表達(dá)影響（圖 3.3 B）。這些結(jié)果說明甲醛可降低大鼠海

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