【摘要】：花生粕發(fā)酵后營養(yǎng)特性得到明顯改善。本次研究以花生粕納豆桿菌發(fā)酵提取物對衰老雌鼠和初斷乳小鼠進行灌胃干預(yù),探究其對鼠的生長發(fā)育、學(xué)習(xí)記憶能力的影響及抗氧化活性研究。第一部分:花生粕發(fā)酵物對衰老雌鼠臟器指數(shù)、脂質(zhì)代謝、認(rèn)知及抗氧化活性的影響目的:應(yīng)用D-半乳糖建立大鼠衰老模型,同時給予花生粕發(fā)酵提取物(HFW)灌胃干預(yù),分析HFW對衰老雌鼠臟器指數(shù)、脂質(zhì)代謝、認(rèn)知及抗氧化活性的影響,探究HFW對衰老雌鼠安全性和生理機能的影響,為疾病的防控和開發(fā)利用花生粕資源提供理論依據(jù)。方法:將大鼠隨機分為正常對照組(N)、衰老模型組(M)、HFW低劑量+M組(FL)、HFW中劑量+M組(FM)、HFW高劑量+M組(FH)和維生素E陽性對照組(Y)。除N組注射生理鹽水外,其余各組應(yīng)用D-半乳糖誘導(dǎo)衰老模型。誘導(dǎo)模型同時給予不同物質(zhì)灌胃,N組及M組給予生理鹽水灌胃;FL組、FM組及FH組給予不同劑量HFW灌胃;Y組給予維生素E灌胃。(1)每周記錄大鼠體重及一般情況;(2)8 w后,進行Morris水迷宮實驗檢測學(xué)習(xí)記憶能力;(3)試劑盒法測定血清和腦組織的超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,全自動生化分析儀檢測血清脂質(zhì)代謝相關(guān)指標(biāo);(4)取出海馬經(jīng)固定、包埋、制成組織切片,經(jīng)HE染色觀察組織形態(tài)學(xué)變化;免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測海馬區(qū)γ-氨基丁酸受體1(GABAR1)和N-甲基-D-天冬氨酸2B受體(NMDAR2B)的表達(dá)。結(jié)果:1.模型評價:M組大鼠血清SOD活性(312.475±15.019 U/m L)明顯低于N組(341.678±16.727 U/m L),MDA含量(15.183±0.714 mmol/m L)明顯高于N組(8.557±0.613 mmol/m L),說明造模成功。2.臟器指數(shù)及脂質(zhì)代謝指標(biāo):(1)試驗期間,FM、FH組大鼠平均體重分別增加7.99%、12.18%;(2)各組大鼠的肝臟指數(shù)和脾臟指數(shù)均無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05);與N組相比,M組大鼠的胸腺指數(shù)明顯減小(P0.05);FM、FH組和Y組大鼠的胸腺指數(shù)均明顯高于M組(P0.05);(3)與M組相比,HFW各處理組的膽固醇(TC)含量、甘油三酯(TG)含量及低密度脂蛋白(LDL)含量均表現(xiàn)為降低的趨勢(P0.05),而高密度脂蛋白(HDL)含量呈現(xiàn)升高的趨勢(P0.05);各組大鼠血脂酶含量無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),表明實驗劑量的HFW對大鼠肝臟無損傷。3.認(rèn)知功能:(1)水迷宮實驗結(jié)果顯示,M組大鼠平均潛伏期較N組明顯延長,跨越平臺次數(shù)減少,在目標(biāo)象限的時間比和路程比明顯減少(P0.05);FM、FH和Y組大鼠平均潛伏期較M組均明顯縮短,跨越平臺次數(shù)增多,在目標(biāo)象限的時間比和路程比均明顯增加(P0.05)。(2)M組大鼠腦組織細(xì)胞排列紊亂,數(shù)目減少,可見空泡樣改變;HFW各劑量組隨灌胃劑量增加,細(xì)胞形態(tài)及排列均明顯改善,變形細(xì)胞數(shù)量顯著減少;Y組細(xì)胞的數(shù)目及排列均明顯改善。(3)與N組相比,M組大鼠海馬GABAR1表達(dá)明顯上調(diào),NMDAR2B表達(dá)明顯下調(diào)(P0.05)。與M組相比,FH組大鼠的GABAR1表達(dá)明顯下調(diào)(P0.05)。HFW各組與Y組大鼠的NMDAR2B表達(dá)與M組大鼠差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。4.抗氧化活性:與N組相比,M組大鼠血清及腦組織中SOD活性明顯降低(P0.05),MDA含量明顯升高(P0.05)。FM組、FH組大鼠的SOD活性明顯高于M組,MDA含量明顯低于M組(P0.05)。結(jié)論:利用D-半乳糖造模成功。(1)中、高劑量的HFW可有效改善衰老引起的體重下降、血脂代謝異常,有效提高衰老大鼠的抗氧化活性;(2)HFW可通過提高抗氧化活性及下調(diào)GABAR1的表達(dá),明顯延緩衰老引起的認(rèn)知功能下降。第二部分:花生粕發(fā)酵物對小鼠生長發(fā)育及學(xué)習(xí)記憶能力的影響目的:探究HFW對小鼠生長發(fā)育和學(xué)習(xí)記憶能力的影響。方法:將50只初斷乳雄性昆明小鼠按體重隨機分為5組:正常對照組(A)、花生粕發(fā)酵物低劑量組(B)、花生粕發(fā)酵物中劑量組(C)、花生粕發(fā)酵物高劑量組(D)、花生粕未發(fā)酵組(E)。每天灌胃干預(yù),干預(yù)物質(zhì)分別為生理鹽水、低劑量發(fā)酵物、中劑量發(fā)酵物、高劑量發(fā)酵物和未發(fā)酵物提取液,持續(xù)4周。每周記錄小鼠體重及一般情況,Morris水迷宮實驗檢測小鼠學(xué)習(xí)記憶能力。實驗結(jié)束后,頸椎脫臼處死小鼠,立即取出肝臟、腎臟、脾臟,稱重并記錄。結(jié)果:(1)D組小鼠的平均日增重和肝臟指數(shù)較A組和E組均明顯增加(P0.05);B組和C組的平均日增重較E組明顯增加(P0.05)。(2)與A組和E組相比,D組小鼠的平均潛伏期明顯縮短(P0.05),穿越平臺次數(shù)明顯增多(P0.05),在目標(biāo)象限的時間比、路程比明顯增加(P0.05)。結(jié)論:花生粕發(fā)酵物可以促進小鼠的生長發(fā)育,中、高劑量HFW可以提高學(xué)習(xí)記憶能力。
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R151
【圖文】：

圖 1 干預(yù)方式對大鼠體重的影響N-正常對照組；M-衰老模型組；FL-花生粕發(fā)酵物低劑量組；FM-花生粕發(fā)酵物中劑量組；FH-花生粕發(fā)高劑量組；Y-陽性對照組。 大鼠臟器指數(shù)變化表 1 干預(yù)方式對大鼠臟器指數(shù)的影響（mean SD，mg g-1）分組 肝臟指數(shù) 胸腺指數(shù) 脾臟指數(shù)N 27.327 1.005 1.711 0.113 2.352 0.133M 26.250 1.386 1.409 0.119a2.111 0.089FL 26.314 0.977 1.554 0.102 2.215 0.142FM 26.998 1.074 1.637 0.136b2.305 0.153FH 26.788 1.321 1.644 0.118b2.218 0.120Y 26.767 1.395 1.658 0.099b2.414 0.135N-正常對照組；M-衰老模型組；FL-花生粕發(fā)酵物低劑量組；FM-花生粕發(fā)酵物中劑量組；FH-花生粕發(fā)高劑量組；Y-陽性對照組.a 表示 M 組與 N 組相比，P＜0.05；b 表示各處理組與 M 組相比，P＜0.05.如表 1 所示，各組大鼠的肝臟指數(shù)和脾臟指數(shù)均無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。

第一部分 花生粕發(fā)酵物對衰老雌鼠臟器指數(shù)、脂質(zhì)代謝、認(rèn)知及抗氧化活性的影響3 HFW 對衰老大鼠認(rèn)知功能的影響3.1 Morris 水迷宮實驗我們用水迷宮實驗評估了大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力，各組大鼠最后一天訓(xùn)練的游泳軌跡（圖 2）和探索實驗的游泳軌跡（圖 3）；各組大鼠 5 d 訓(xùn)練的平均潛伏期（圖 4）、空間探索實驗跨越平臺的次數(shù)、平均游泳速度以及在目標(biāo)象限的時間比、路程比（表 4）。

3 HFW 對衰老大鼠認(rèn)知功能的影響3.1 Morris 水迷宮實驗我們用水迷宮實驗評估了大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力，各組大鼠最后一天訓(xùn)練的游泳軌跡（圖 2）和探索實驗的游泳軌跡（圖 3）；各組大鼠 5 d 訓(xùn)練的平均潛伏期（圖 4）、空間探索實驗跨越平臺的次數(shù)、平均游泳速度以及在目標(biāo)象限的時間比、路程比（表 4）。圖 2 水迷宮實驗各組大鼠最后一天游泳軌跡由圖 2 可知，在最后一天的定位航行實驗中，N 組、FM 組、FH 組和 Y 組大鼠可以較快、較準(zhǔn)的找到目標(biāo)象限所在位置。

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