發(fā)布時間：2020-06-30 18:54

【摘要】：研究目的：諾如病毒是常見的腹瀉病毒，廣泛存在于環(huán)境中，是引起非細菌性急性腸胃炎的主要病原之一。諾如病毒流行范圍廣，傳播方式多樣，遺傳信息變化大。本研究將2010-2011年收集的腹瀉樣品進行檢測，并結合前期的資料，從諾如病毒的感染情況及分子流行病學兩方面進行判斷分析，為諾如病毒的檢測及預防提供基礎資料。 研究方法：將2010-2011年收集的樣品經(jīng)過前處理后，提取核酸。一部分核酸用作Real-time PCR的模板，并結合調查的資料從時間（月份）、年齡和性別等方面對這兩年諾如病毒的感染情況進行分析。另一部分采用RT-PCR的方法，分別用NVG1和NVGⅡ特異性引物對其進行擴增，從分子水平分析近兩年諾如GⅠ和諾如GⅡ基因組的流行趨勢，并著重分析GⅡ.4型的流行狀況。 研究結果:1、2010年收集的925份標本中，有506份標本來自男性，419份標本來自女性，三歲及三歲以下的有480份，所占比例達52%。經(jīng)過Real-time PCR檢測，共鑒定出陽性標本186份，陽性率為20.10%，其中有96份來自男性，90份標本來自女性，三歲及三歲以下兒童感染諾如病毒的陽性數(shù)為104份，所占比例高達56%（104/186）；2011年收集的983份樣品中，有573份標本來自男性，410份標本來自女性，其中571名患者的年齡小于3歲，所占比例達58%。經(jīng)Real-time PCR檢測，共鑒定出陽性標本210份，陽性率為21.36%，其中有121份來自男性，89份來自女性，三歲及三歲以下兒童的陽性數(shù)為130份，所占比例高達62%（130/210）。 2、經(jīng)過RT-PCR擴增后，將有陽性條帶的樣品測序后進行比對分型。2010年共有85份樣品成功測序，其中有78份樣品屬于NVGⅡ型，分屬4種不同的基因型別，7份樣品屬于NVGⅠ型，分屬3種不同的基因型別。在GⅡ基因組中比例最高的是GⅡ.4/2006b，共檢測55份標本，占所有成功測序標本的64.5%（55/85），其次是GⅡ.4/2006variant，共檢測出17份陽性樣品，占所有型別比的20%；2011年共有60份樣品成功測序，其中有55份屬于NVGⅡ型，分屬7種不同的基因型，5份屬于NVG1型，分屬4種不同的基因型。在所測的GⅡ基因組中，比例最高是GⅡ.4/2006b，共檢測出28份，占所有基因型別比的46.7%。其次是GⅡ.4/2006b variant,共有10份陽性標本，占所有基因型別比的16.7%。 研究結論：1．從這兩年的數(shù)據(jù)來看，諾如病毒引起的腹瀉在任何時節(jié)均可發(fā)生。但檢出率較高的月份主要集中在3-7月份。在所有的腹瀉人群中，以三歲以下兒童居多。將這兩年諾如病毒在性別感染上的差異，通過SPSS軟件分析，得到2010年卡方檢驗的P值=0.3440.05，2011年卡方檢驗的P值=0.8240.05，這兩年的檢測結果均無統(tǒng)計學差異。 2．無論2010年還是2011年，NVGⅡ基因組所占比例都非常高，分別達到91.7%(78/85)和91.6%(55/60)。相對于2010年，2011年諾如病毒的基因型別更趨向多元化。2010年，GⅡ.4/2010開始出現(xiàn)，在所有檢測出的基因型別中，比值高達20.0%（17/85）。GⅡ.4/2006b variant基因型是2011年新發(fā)現(xiàn)的基因亞型。2011年檢測出的基因型別中，有10份屬于GⅡ.4/2006b variant，比例高達16.7%（10/60）。從這兩年的流行趨勢看，NVGⅡ.4基因型的遺傳信息較易發(fā)生變化，一旦出現(xiàn)新的基因亞型，便具有很強的流行能力。
【學位授予單位】：華中科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R181.3
【圖文】：

2. 稱取瓊脂糖 0.8g 放入 250ml 的三角燒瓶中，加入 100ml 1×TAE 緩沖勻后，將燒瓶置于電爐上，加熱煮沸，直至瓊脂糖完全溶解。3. 關閉電爐，取下三角燒瓶，將其置室溫下冷卻至 70℃左右(手握燒瓶可受)，再加入 Gold View (10mg/ml) 5μl，混勻后，即將凝膠溶液倒入膠板鋪4. 室溫下凝膠完全凝固，需時約 30 分鐘，揭去二端膠布，拔出梳齒，將放入電泳槽中。5. 在電泳槽中加入 1×TAE 緩沖液，以高出凝膠表面 2mm 為宜6. 用加樣器吸取樣品。依序分別加入點樣孔中，注意加樣器吸頭應恰好凝膠點樣孔中，不可刺穿凝膠，也要防止將樣品溢出孔外。每次上樣量約為右，最后一個點樣孔加入 100bp Marker。7、接通電源，調節(jié)電壓至 110 伏，電泳 25 分鐘后，將凝膠板取出，在紫射分析儀上觀察有無目的條帶。NVG1 的條帶大小為 330bp，NVGⅡ的條帶為 387bp。其電泳圖如下：

【參考文獻】

相關期刊論文 前2條

1 曾軍榮;白培勝;李榕嬌;王瑜玲;;熒光RT-PCR與RT-LAMP檢測GⅡ4型諾如病毒的比較和應用[J];廣東醫(yī)學;2011年19期

2 何雅青;胡春凌;汪朝暉;張海龍;楊洪;姚相杰;冼慧霞;陽帆;;液相芯片檢測輪狀病毒和諾如病毒方法的建立[J];中國病毒病雜志;2011年05期

本文編號：2735692