【摘要】：目的:探討氚水染毒后,染毒組與對照組相比差異基因的表達情況。觀察細胞形態(tài)、大小、增殖和衰老改變,并估算出氚水所致細胞吸收劑量,為氚水內(nèi)照射對血管內(nèi)皮細胞可能造成的損傷提供理論依據(jù)。方法:1.用3.7?103 Bq/ml氚水處理HUVEC細胞48h后,收集染毒組與對照組RNA,采用基因芯片技術分析染毒組與對照組間差異表達的基因。運用GO和Pathway分析對差異基因功能以及可能參與的信號通路進行限定和描述。通過String 10.5在線分析工具對差異基因相互作用關系進行預測,篩選出中心節(jié)點基因。2.HUVEC細胞用3.7?103 Bq/ml氚水連續(xù)染毒15代,分別收集未染毒細胞、染毒的第3、6、9、12、15代細胞,記作T0、T3、T6、T9、T12、T15。3.在普通光學顯微鏡下觀察氚水染毒后,細胞生長24h、48h、72h的形態(tài)并拍照記錄,使用Image J軟件對細胞表面積大小進行測量。4.采用CCK-8細胞增殖與毒性實驗檢測氚水染毒后HUVEC細胞生長24h、48h、72h增殖活性的改變情況。5.采用β-半乳糖苷酶染色試劑盒,檢測氚水染毒后HUVEC細胞衰老的情況。6.采用COOLER算法,通過代碼PARTRAC估算徑向距離,對液態(tài)水電子徑跡進行蒙特卡洛模擬,估算氚水所致細胞吸收劑量大小。結(jié)果:1.氚水染毒后,CTH、CCNE1、BAX、CASP8、RB1基因表達顯著上調(diào),RPS27A、KISS1基因表達顯著下調(diào)。2.氚水染毒后,隨染毒時間增加,HUVEC細胞形態(tài)發(fā)生改變,胞漿顆粒物增加,邊界模糊,細胞表面積有所增加,T3、T6代細胞中觀察到細胞衰老現(xiàn)象;T6、T9、T12、T15代細胞的增殖活性受到抑制。隨染毒時間增加,氚水所致細胞吸收劑量增加。結(jié)論:1.CTH、CCNE1、BAX、CASP8、RB1、RPS27A、KISS1基因可能參與氚水對血管內(nèi)皮細胞的內(nèi)照射損傷過程。2.氚水對HUVEC細胞具有細胞毒性,隨著染毒代數(shù)增加,對細胞的增殖活性抑制越明顯。
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R14
【圖文】：

.03、1.99、1.96，所有值均介于 1.8-2.1 之間，說明對照組與實；（2）實驗組與對照組標準變性凝膠電泳實驗結(jié)果，如圖 1.照組樣品電泳條帶清晰，28S:18S rRNA 條帶亮度大于或接近 良好無降解。以上結(jié)果均說明提取的實驗組與對照組 RNA 樣片實驗要求。表 1.1 RNA 樣品純度與濃度測定分析結(jié)果Sample ID OD260/280 OD260/230 濃度（ng/μl）1 2.03 2.11 1125.422 2.05 1.98 790.023 2.06 1.82 602.924 2.03 1.93 1522.745 1.99 2.23 794.356 1.96 2.24 776.84

14圖 1.2 基因芯片掃描結(jié)果圖1.3 氚水染毒實驗組與對照組間差異表達的 LncRNA（火山圖）圖 1.4 氚水染毒實驗組與對照組間差異表達的 mRNA（火山圖）的數(shù)據(jù)點代表實驗組與對照組相比顯著上調(diào)的基因。LncRNA 分析結(jié)果表明，實驗組與對照組相比，有 1717 個基因顯著上調(diào)，3994 個基因顯著下調(diào)（fold change > 2，P < 0.05）。mRNA 分析結(jié)果顯示，實驗組與對照組相比，有 4562 個基因顯著上調(diào)，1433 個基因顯著下調(diào)（fold change > 2，P < 0.05）。圖 1.5、圖 1.6 分別是 LncRNA與 mRNA 聚類分析熱圖結(jié)果。后續(xù)實驗中將對差異 mRNAs 進行詳細分析?

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