【摘要】：目的:以HepG2細(xì)胞作為研究對(duì)象,研究鄰苯二甲酸單乙基己基酯(mono(2-ethylhexyl)phthalate,MEHP)對(duì)HepG2細(xì)胞脂肪酸及甘油三酯合成的影響,從而探討其導(dǎo)致肝臟脂肪變性的作用機(jī)制。方法:分別用不同濃度的MEHP(0.8、4、20、100μmol/L)以及0.05 mmol/L OA(陽(yáng)性對(duì)照)染毒HepG2細(xì)胞24 h、48 h,用GPO-POD化學(xué)酶法檢測(cè)HepG2細(xì)胞內(nèi)以及細(xì)胞培養(yǎng)液上清中甘油三酯(TG)的含量;用不同濃度的MEHP(0、0.01、1、10、100μmol/L)以及1 mmol/L OA(陽(yáng)性對(duì)照)處理HepG2細(xì)胞48 h,采用油紅O染色法,觀察細(xì)胞內(nèi)脂滴蓄積情況。不同濃度MEHP(0、0.01、1、10、100μmol/L)及1 mmol/L OA(陽(yáng)性對(duì)照)染毒HepG2細(xì)胞6 h、24 h、48 h,采用q RTPCR法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白1(SREBP-1c)、碳水化合物反應(yīng)元件結(jié)合蛋白1(Ch REBP1)、乙酰輔酶A羧化酶(ACC1)、脂肪酸合酶(FASN)、硬脂酰輔酶A去飽和酶(SCD)、長(zhǎng)鏈脂酰輔酶A合成酶(ACSL5)、甘油-3-磷酸�；D(zhuǎn)移酶線粒體亞型(GPAM)、1-酰基甘油-3-磷酸�；D(zhuǎn)移酶(AGPAT2)、磷脂酸磷酸酶(LIPIN2)、二�；视王；D(zhuǎn)移酶(DGAT2)、P53腫瘤抑制蛋白(P53)、肉毒堿棕櫚�；D(zhuǎn)移酶1(CPT1A)、過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體α(PPARα)的m RNA表達(dá)水平;采用Western blot方法檢測(cè)脂肪酸合成相關(guān)蛋白固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白1(SREBP-1)、碳水化合物反應(yīng)元件結(jié)合蛋白1(Ch REBP1)、乙酰輔酶A羧化酶(ACC1)、脂肪酸合酶(FASN)、硬脂酰輔酶A去飽和酶(SCD)的表達(dá)情況。結(jié)果:1.通過(guò)油紅O染色法觀察到,MEHP染毒48 h,與陰性對(duì)照組相比,各染毒劑量組HepG2細(xì)胞內(nèi)均有紅色脂滴出現(xiàn),且隨著染毒劑量的升高,脂滴數(shù)量增多。2.經(jīng)MEHP染毒24 h,與陰性對(duì)照組相比,HepG2細(xì)胞上清中TG含量無(wú)明顯變化,而20、100μmol/L MEHP使細(xì)胞內(nèi)TG含量明顯增加。染毒48 h,100μmol/L MEHP使上清中的TG含量增加,20、100μmol/L MEHP使細(xì)胞內(nèi)TG含量明顯增加。3.與陰性對(duì)照組比較,染毒6 h,僅100μmol/L MEHP使SREBP-1c m RNA表達(dá)水平增加;染毒24 h,1～100μmol/L MEHP使SREBP-1c m RNA表達(dá)水平增加;染毒48 h,10μmol/L MEHP使SREBP-1c m RNA表達(dá)水平降低。與陰性對(duì)照組比較,染毒6 h,MEHP各劑量組均使Ch REBP1 m RNA表達(dá)水平升高;染毒24 h,1～100μmol/L MEHP使Ch REBP1 m RNA表達(dá)水平升高;染毒48 h,10、100μmol/L MEHP使HepG2細(xì)胞內(nèi)Ch REBP1 m RNA表達(dá)水平降低。與陰性對(duì)照組相比,染毒6 h,MEHP各劑量組均使HepG2細(xì)胞內(nèi)ACC1 m RNA表達(dá)水平升高;染毒24 h,MEHP各劑量組ACC1 m RNA表達(dá)水平未見(jiàn)明顯差異;染毒48 h,100μmol/L MEHP使ACC1 m RNA表達(dá)水平明顯降低。與陰性對(duì)照組相比,染毒6 h,1～100μmol/L MEHP使細(xì)胞內(nèi)FASN m RNA表達(dá)水平升高;染毒24 h,MEHP各劑量組均使細(xì)胞內(nèi)FASN m RNA表達(dá)水平降低;染毒48 h,僅100μmol/L MEHP使細(xì)胞內(nèi)FASN m RNA表達(dá)水平降低。與陰性對(duì)照組相比,染毒6 h,MEHP各劑量組均使HepG2細(xì)胞內(nèi)SCD m RNA表達(dá)水平升高;染毒24 h,10、100μmol/L MEHP使細(xì)胞內(nèi)SCD m RNA表達(dá)水平降低;染毒48 h,100μmol/L MEHP組SCD m RNA表達(dá)水平明顯降低。4.與陰性對(duì)照組比較,染毒6 h、24 h、48 h,10、100μmol/L MEHP均可使HepG2細(xì)胞內(nèi)ACSL5 m RNA的表達(dá)水平明顯增加。與陰性對(duì)照組比較,1～100μmol/L MEHP染毒6 h,100μmol/L MEHP染毒24 h以及10、100μmol/L MEHP染毒48 h均可使HepG2細(xì)胞內(nèi)GPAM m RNA的表達(dá)水平升高。各濃度MEHP染毒6h、24 h、48 h,AGPAT2 m RNA的表達(dá)水平升高。染毒6 h、24 h、48 h,LIPIN2m RNA表達(dá)水平在10、100μmol/L MEHP組均升高。與陰性對(duì)照組相比,染毒6 h,10、100μmol/L MEHP使細(xì)胞內(nèi)DGAT2 m RNA的表達(dá)水平升高,染毒24 h,僅有100μmol/L MEHP可使DGAT2 m RNA表達(dá)水平升高,染毒48 h,MEHP染毒各劑量組均可使DGAT2 m RNA的表達(dá)水平升高。5.與陰性對(duì)照組比較,染毒24 h、48 h,MEHP各劑量組SREBP-1c蛋白表達(dá)水平未出現(xiàn)明顯差異。與陰性對(duì)照組比較,染毒24 h、48 h,10、100μmol/L MEHP組Ch REBP1蛋白表達(dá)水平明顯增加。與陰性對(duì)照組相比,染毒24 h,1～100μmol/L MEHP使細(xì)胞內(nèi)ACC1蛋白表達(dá)增加;染毒48 h,1～100μmol/L MEHP使細(xì)胞內(nèi)ACC1蛋白表達(dá)降低。與陰性對(duì)照組相比,染毒24 h,1～100μmol/L MEHP使FASN蛋白表達(dá)增加;染毒48 h,100μmol/L MEHP使FASN蛋白表達(dá)降低。與陰性對(duì)照組相比,染毒24 h,僅100μmol/L MEHP使SCD蛋白表達(dá)水平增加;染毒48 h,0.01～100μmol/L MEHP均使SCD蛋白表達(dá)水平降低。6.與陰性對(duì)照組比較,染毒24 h,10、100μmol/L MEHP使細(xì)胞內(nèi)P53 m RNA表達(dá)水平升高;染毒48 h,僅100μmol/L MEHP使HepG2細(xì)胞內(nèi)P53 m RNA表達(dá)水平升高。與陰性對(duì)照組比較,染毒24 h,10、100μmol/L MEHP使細(xì)胞內(nèi)PPARαm RNA表達(dá)水平降低;染毒48 h,1～100μmol/L MEHP使細(xì)胞內(nèi)PPARαm RNA表達(dá)水平降低。與陰性對(duì)照組比較,染毒24 h、48 h,10、100μmol/L MEHP均使HepG2細(xì)胞內(nèi)CPT1A m RNA表達(dá)水平降低。結(jié)論:1.高劑量的MEHP接觸可導(dǎo)致HepG2細(xì)胞出現(xiàn)脂肪積累,造成脂質(zhì)代謝異常。2.MEHP接觸所引起的肝細(xì)胞脂質(zhì)蓄積,可能與肝細(xì)胞內(nèi)甘油三酯合成增加、脂肪酸β-氧化被抑制有關(guān)。
【圖文】：

山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文2 結(jié) 果2.1 通過(guò)油紅 O 染色觀察 MEHP 對(duì) HepG2 細(xì)胞的影響由圖 1 可見(jiàn)，1 mmol/L OA 組可見(jiàn)大量脂滴出現(xiàn)，且圍繞著細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)邊緣呈環(huán)狀分布，說(shuō)明所建立 HepG2 細(xì)胞脂肪變性的模型是成功的，可作為陽(yáng)性對(duì)照組。而陰性對(duì)照組的細(xì)胞結(jié)合緊密，邊緣清晰且未見(jiàn)染色脂滴。與陰性對(duì)照組相比，MEHP（除 0.01 μmol/L 組外）各劑量組均可觀察到大小不等的紅色脂滴，且隨著染毒劑量組的增加，，脂滴的數(shù)量也呈增加的趨勢(shì)。

圖 6 MEHP 對(duì) HepG2 細(xì)胞內(nèi) SREBP1、 Ch注：與陰性對(duì)照組比較，*P<0.05; n=3.2.5.2 MEHP 對(duì) HepG2 細(xì)胞脂肪酸合成相關(guān)蛋白 如圖7A所示，染毒24h，1 100μmol/LME染毒 48 h，1 100 μmol/L MEHP 使細(xì)胞內(nèi) ACC1（P<0.05）。如圖7B所示，染毒24h，1 100μm蛋白表達(dá)增加；染毒 48 h， 100 μmol/LMEHP 和低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。如圖 7C 所示使 SCD 蛋白表達(dá)水平增加；染毒 48 h，0.01 100SCD 蛋白表達(dá)水平降低（P<0.05）。
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R114

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 許嘉弟;查寶興;楊寧;王書(shū)友;陳惠英;鞠九龍;張?zhí)K玲;;CMMH對(duì)體外腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的影響[J];鐵道醫(yī)學(xué);1987年03期

2 賈振庚;潘瑞芹;劉德輝;;多發(fā)性內(nèi)分泌腺腫瘤[J];中日友好醫(yī)院學(xué)報(bào);1987年04期

3 胡麗萍;滿延高;陳敏誨;;培養(yǎng)液中血清的含量對(duì)原代兔嬰腎細(xì)胞生長(zhǎng)的影響[J];解剖學(xué)雜志;1987年02期

4 ;腫瘤細(xì)胞比正常細(xì)胞生長(zhǎng)快嗎?[J];人民軍醫(yī);1988年02期

5 ;藥理學(xué)[J];中國(guó)醫(yī)學(xué)文摘(基礎(chǔ)醫(yī)學(xué));1988年06期

6 陳漢源;細(xì)胞的生長(zhǎng)控制和腫瘤轉(zhuǎn)化[J];第一軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);1988年01期

7 王健平,湯健;細(xì)胞生長(zhǎng)抑制因子[J];生理科學(xué);1988年S1期

8 徐世康,丁菲英,陳捷,蔣文美;羅丹明6GDN對(duì)人體肺瘤細(xì)胞的生物學(xué)效應(yīng)[J];腫瘤;1988年06期

9 侯嵩生,李新明,尚廷蘭,吳玉蘭,李洪林;九連小蘗懸浮培養(yǎng)細(xì)胞生理生化研究 Ⅰ.細(xì)胞生長(zhǎng)與培養(yǎng)液的電導(dǎo)率和過(guò)氧化物酶活性的變化[J];武漢植物學(xué)研究;1988年02期

10 趙雅麗,孟松娘,范保榮,林仲翔,王端順,汪X仁;鈣調(diào)素抑制劑——三氟拉嗪對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖和微管組裝的影響[J];實(shí)驗(yàn)生物學(xué)報(bào);1988年04期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 吳濤;白海;王存邦;路繼紅;歐劍鋒;;成人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)K562細(xì)胞生長(zhǎng)的影響[A];第10屆全國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文摘要匯編[C];2005年

2 路曉薇;馮崇錦;郭俊兵;羅冬元;;靶向Cdc6 RNAi抑制舌癌CAL-27細(xì)胞的增殖[A];中華口腔醫(yī)學(xué)會(huì)全科口腔醫(yī)學(xué)專業(yè)委員會(huì)第六次學(xué)術(shù)會(huì)議暨廣東省口腔醫(yī)學(xué)會(huì)全科口腔醫(yī)學(xué)專委會(huì)2015年年會(huì)論文集[C];2015年

3 任俊麗;陶燕芳;杜薇薇;李之珩;李曉璐;徐利曉;肖佩芳;胡紹燕;潘健;盧俊;;存活素選擇性抑制劑YM155可誘導(dǎo)SK-NEP-1腎母樣腫瘤細(xì)胞的凋亡[A];第十三屆江浙滬兒科學(xué)術(shù)會(huì)議暨2016年浙江省醫(yī)學(xué)會(huì)兒科學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2016年

4 廉建坡;林登強(qiáng);祝宇;徐烈雨;徐云澤;;Ganetespib對(duì)pc12細(xì)胞的凋亡及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)的影響[A];中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)泌尿外科專業(yè)委員會(huì)第十四次全國(guó)學(xué)術(shù)會(huì)議暨2016年廣東省中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)泌尿外科專業(yè)委員會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2016年

5 曲華;吳文周;安美文;滕維中;;基底加載時(shí)波形及應(yīng)變幅度對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖與鋪展的影響[A];第七屆全國(guó)生物力學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2003年

6 廖瓊;田靜;韓楊;任霞;張之勇;姜國(guó)勝;廖瓊;田靜;韓楊;任霞;張之勇;姜國(guó)勝;;DBO對(duì)人慢性髓系白血病細(xì)胞K562的增殖、凋亡與自噬的影響[A];第十二屆全國(guó)免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)摘要匯編[C];2017年

7 彭志宏;黃柏勝;文芳;韓仰;劉發(fā)益;鄔力祥;;Mett19基因?qū)251細(xì)胞生長(zhǎng)的影響及機(jī)制研究[A];湖南省生理科學(xué)會(huì)2013年度學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要匯編[C];2013年

8 王季石;羅青松;何穎穎;;血紅素誘導(dǎo)HO-1基因的表達(dá)與K562細(xì)胞生長(zhǎng)及凋亡關(guān)系的研究[A];第12屆全國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文摘要[C];2009年

9 譚瑤;邱志群;黃玉晶;王靈巧;舒為群;;微囊藻毒素暴露對(duì)PC12細(xì)胞的影響[A];2018環(huán)境與健康學(xué)術(shù)會(huì)議--精準(zhǔn)環(huán)境健康：跨學(xué)科合作的挑戰(zhàn)論文匯編[C];2018年

10 蘇曙光;云徑平;符珈;張梅芳;田秋紅;;放線菌素D影響B(tài)23的磷酸化并抑制HepG2細(xì)胞生長(zhǎng)[A];第四屆中國(guó)腫瘤學(xué)術(shù)大會(huì)暨第五屆海峽兩岸腫瘤學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2006年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 記者 趙路;英科學(xué)家開(kāi)發(fā)出培育成人干細(xì)胞新法[N];科學(xué)時(shí)報(bào);2011年

2 紀(jì)十 科普作者 生命健康領(lǐng)域觀察者;心臟能殺死癌細(xì)胞？[N];北京科技報(bào);2017年

3 永誠(chéng);美發(fā)現(xiàn)控制細(xì)胞生長(zhǎng)的蛋白質(zhì)[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2000年

4 吳志;腫瘤治療新思路：誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞自動(dòng)凋亡[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2009年

5 ;細(xì)胞模型篩選抗SARS病毒藥物試驗(yàn)技術(shù)要求[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2003年

6 記者 張孟軍;加找到刺激干細(xì)胞生長(zhǎng)分子[N];科技日?qǐng)?bào);2001年

7 記者 吳春燕 通訊員 寧習(xí)源 吳劍鵬;人類情緒可影響干細(xì)胞生長(zhǎng)[N];光明日?qǐng)?bào);2014年

8 經(jīng)天;控制細(xì)胞生長(zhǎng)的蛋白質(zhì)[N];中藥事業(yè)報(bào);2000年

9 中國(guó)青年報(bào)·中青在線記者 陳軼男;“T細(xì)胞殺手”養(yǎng)成記[N];中國(guó)青年報(bào);2016年

10 本報(bào)記者 葉青 通訊員 盧文潔;細(xì)胞打印：篩選個(gè)性化腫瘤藥物“新招”[N];科技日?qǐng)?bào);2019年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 鄧圣澤;高級(jí)別膠質(zhì)瘤細(xì)胞線粒體呼吸鏈活性狀態(tài)關(guān)鍵調(diào)節(jié)蛋白的鑒定及臨床意義研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2018年

2 盧佳;Girdin基因沉默對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞惡性行為的抑制作用及其相關(guān)機(jī)制研究[D];吉林大學(xué);2018年

3 康迪;形態(tài)發(fā)生過(guò)程中InR/Akt/TORC1信號(hào)通路負(fù)調(diào)控JAK/STAT活性從而參與細(xì)胞的命運(yùn)決定[D];南京大學(xué);2018年

4 楊靜波;土貝母甲素對(duì)雄激素非依賴性前列腺癌細(xì)胞的抑制作用及機(jī)制研究[D];吉林大學(xué);2017年

5 王子梅;白細(xì)胞介素1β對(duì)AtT20細(xì)胞POMC基因表達(dá)調(diào)控的研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);1998年

6 王永軍;凋亡/增殖平衡失調(diào)在肺癌發(fā)生中作用的研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);1997年

7 張媛媛;重組人巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶Ⅶ過(guò)表達(dá)對(duì)胚胎植入影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];吉林大學(xué);2007年

8 童煜;AcAPc2蛋白的純化及其抗腫瘤作用機(jī)制的初步研究[D];四川大學(xué);2007年

9 鄒險(xiǎn)峰;GPX和SOD協(xié)同作用模擬和新含硒肽的抗腫瘤作用[D];吉林大學(xué);2007年

10 張雙越;前列腺素E2合成通路在口腔癌發(fā)生過(guò)程中作用的研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2008年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 賈雪姣;GCLC在微囊藻毒素-LR誘導(dǎo)的細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化中的作用研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2019年

2 方夕國(guó);HBx-shRNA和h-CCL20影響HepG2.2.15細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[D];海南醫(yī)學(xué)院;2018年

3 王永;控制代謝對(duì)糖尿病勃起功能障礙的影響及津力達(dá)保護(hù)高糖誘導(dǎo)的大鼠陰莖海綿體平滑肌細(xì)胞功能的研究[D];湖北中醫(yī)藥大學(xué);2019年

4 王丹;SH-SY5Y細(xì)胞BPDE蛋白加合物研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2019年

5 賀真;鄰苯二甲酸單乙基己基酯對(duì)HepG2細(xì)胞甘油三酯合成的影響[D];山西醫(yī)科大學(xué);2019年

6 陳儉嬌;海藻酸鐵納米遞藥系統(tǒng)的構(gòu)建及初步研究[D];鄭州大學(xué);2019年

7 張成晶;扶正解毒方調(diào)控M-CSF刺激下荷瘤小鼠TEMs細(xì)胞表達(dá)的機(jī)制研究[D];中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院;2018年

8 梁娟;HIV-1跨物種的鼠類細(xì)胞模型感染與病毒復(fù)制研究[D];桂林醫(yī)學(xué)院;2018年

9 王艷;MEG3通過(guò)miR-125a-5p/TET2途徑抑制HepG2細(xì)胞載脂蛋白（a）的表達(dá)[D];南華大學(xué);2018年

10 唐辰晨;細(xì)胞膜表面ATP5B的表達(dá)對(duì)腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力影響的研究[D];吉林大學(xué);2018年

本文編號(hào)：2637671