【摘要】：目的比較不同期別矽肺病人及健康對照人群支氣管肺泡灌洗液中蛋白質(zhì)表達的差異,結(jié)合生物信息學(xué)分析,得到與矽肺發(fā)生發(fā)展及其并發(fā)癥的主要蛋白質(zhì)種類和數(shù)量,分析與矽肺相關(guān)的蛋白質(zhì)功能、信號通路和相互作用,為更好得理解矽肺的發(fā)病機制提供思路。方法選擇2017年7月至2018年10月在中國煤礦工人北戴河療養(yǎng)院塵肺科就診,依據(jù)我國《職業(yè)性塵肺病的診斷》(GBZ70-2015)診斷為矽肺、未脫塵或脫塵未滿5年、預(yù)進行全肺大容量灌洗治療的從事礦山開采的既往未接受過大容量全肺大容量灌洗治療的男性工人38例,其中矽肺壹期19例、矽肺貳期5例、矽肺叁期14例。對照為華北理工大學(xué)附屬醫(yī)院入院的與矽肺患者年齡相近支氣管鏡檢查結(jié)果陰性的男性5例。查閱病例資料排除乙型肝炎或其他肺部纖維化疾病的患者。經(jīng)本人或家屬知情同意,收集研究對象第2瓶肺灌洗液和對照組正常肺組織部分的灌洗液,于-80℃凍存。經(jīng)過10K超濾管超濾、Agilent 1100常規(guī)液相分離、強陽離子交換色譜柱(SCX)HPLC預(yù)分離、C18反相色譜除鹽純化預(yù)處理肺灌洗液,使用同位素標(biāo)記蛋白質(zhì)。經(jīng)Thermo Q-Exactive質(zhì)譜儀進行質(zhì)譜掃描,使用Proteome Discoverer 1.4 thermo軟件篩選質(zhì)譜譜圖,使用mascot進行搜索,根據(jù)mascot搜索結(jié)果和篩選后譜圖進行蛋白質(zhì)定量分析,確定差異蛋白。應(yīng)用生物信息學(xué)對差異蛋白質(zhì)進行GO、KEGG Pathway、PPI分析,得到蛋白質(zhì)種類和對應(yīng)的信號通路。結(jié)果查閱研究對象病例,使用卡方分析比較38例矽肺患者和5例健康對照者的吸煙史、接塵年限、COPD、粉塵性質(zhì)的基線資料,發(fā)現(xiàn)4組研究對象的吸煙史、接塵年限、COPD、粉塵性質(zhì)方面分布均衡,組間具有可比性。Thermo Q-Exactive質(zhì)譜鑒定出943種蛋白,使用T-Test分析對結(jié)果進行差異顯著性評估,Ratio≥1.2或Ratio≤0.83且P0.05篩選得到比較矽肺壹期和對照組共得到226種差異蛋白,其中102種為上調(diào)蛋白,124種為下調(diào)蛋白;比較矽肺貳期和對照組共得到234種差異蛋白,其中118種為上調(diào)蛋白,116種為下調(diào)蛋白;比較矽肺叁期和對照組共得到205種差異蛋白,其中97種為上調(diào)蛋白,108種為下調(diào)蛋白;比較矽肺叁期和矽肺壹期共得到138種差異蛋白,其中上調(diào)蛋白70種,下調(diào)蛋白68種;比較矽肺叁期和矽肺貳期共得到229種差異蛋白,其中上調(diào)蛋白107種,下調(diào)蛋白122種;比較矽肺貳期和矽肺壹期共得到207種差異蛋白;其中上調(diào)蛋白111種,下調(diào)蛋白96種。通過各組的差異蛋白質(zhì),我們發(fā)現(xiàn)16種貫穿矽肺發(fā)生發(fā)展全過程的蛋白質(zhì),即在叁期/對照、貳期/對照、壹期/對照、叁期/貳期、叁期/壹期、貳期/壹期組中均存在表達差異的蛋白質(zhì),包括酶原顆粒蛋白16同系物B、血清淀粉樣蛋白P、鈣網(wǎng)蛋白、載脂蛋白A、附睪分泌蛋白Li55、鈣磷蛋白、過氧化還原酶6、抗白細(xì)胞蛋白酶�？傮w差異蛋白基因本體論富集分析的結(jié)果顯示差異蛋白質(zhì)的KEGG Pathway富集分析提示與矽肺相關(guān)的通路包括代謝途徑、糖酵解/糖異生、病毒致癌作用、系統(tǒng)性紅斑狼瘡?fù)�、EB病毒感染、丙酮酸代謝、IL-17信號通路、PI3K-Akt信號通路、HIF-1信號通路、PPAR信號通路。結(jié)論1應(yīng)用同位素相對和絕對定量(iTRAQ)技術(shù)聯(lián)合Q-Exactive質(zhì)譜的蛋白質(zhì)組學(xué)方法發(fā)現(xiàn)不同期別矽肺病人支氣管肺泡灌洗液中與矽肺發(fā)生發(fā)展相關(guān)的蛋白質(zhì)有943組,共491種。2矽肺早期主要的生物變化為糖酵解/糖異生、自身免疫、碳代謝、吞噬等方面,且微纖維相關(guān)糖蛋白4可能參與矽肺早期的生物變化過程。3矽肺后期主要的生物改變?yōu)樽陨砻庖�、�?xì)胞間粘附等方面,且鈣海馬結(jié)合蛋白可能參與矽肺后期的生物變化過程。圖16幅;表16個;參142篇。
【圖文】：

SDS-PAGE檢測膠圖

圖 2 酶解后肽段長度分布圖Fig.2 Peptide length distribution after enzymatic hydrolysis5. 質(zhì)譜質(zhì)量偏差，，質(zhì)譜儀器的質(zhì)量偏差應(yīng)集中在 15ppm 以內(nèi)
【學(xué)位授予單位】：華北理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R135.2

【參考文獻】

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本文編號：2635753