【摘要】：食源性多肽是指通過降解食源性蛋白,并經(jīng)分離純化獲得的小分子肽段。近年來,食源性多肽由于其降血壓、降血脂以及抗菌等生物學活性受到廣泛關注,但其在促皮膚細胞遷移及加快傷口愈合等方面的研究較少。鑒于此,在本論文中,我們開展了蛋清粉多肽促進皮膚細胞遷移和創(chuàng)面愈合的作用和調控機制的研究。課題組在前期研究中,采用分步酶解法對蛋清粉進行酶解,并通過超濾及葡聚糖凝膠純化,分離得到了四個混合多肽組分,分別命名為EWP1、EWP2、EWP3和EWP4。在本研究中,我們首先通過小室遷移(Transwell)實驗對四個組分進行篩選,結果顯示EWP2組分與其他三個組分相比具有明顯的促細胞遷移作用,我們通過小鼠皮膚創(chuàng)傷模型進一步證實EWP2組分可以顯著促進小鼠皮膚創(chuàng)面愈合。我們通過液相色譜-質譜聯(lián)用(LC-MS)對EWP2組份進行分析,得到了22條高豐度小肽序列。我們分兩批次隨機選取了10條小肽序列進行合成。第一批次共選取四條小肽序列,包括KPHAEVVLR、KVEQGASVDKR、ADQARELIN和VNAIVFK,考察這些小肽對人皮膚成纖維細胞HSF的作用和調控機制。Transwell實驗結果顯示KPHAEVVLR與其他三條小肽相比能夠有效地促進HSF細胞遷移,MTS實驗結果表明KPHAEVVLR可促進HSF細胞增殖。我們進一步通過免疫熒光和免疫印跡實驗,考察KPHAEVVLR促HSF細胞遷移和增值的作用機制,結果表明KPHAEVVLR可以提高膜結合型Hsp90α的蛋白水平。第二批次共選取六條小肽序列,包括GASVDKR、DKEGKDVL、RVTEQESKPV、INFEKL、LYAEER和LRDILN。以人角質形成細胞Ha Ca T為模型,考察這些合成小肽的促遷移作用。Transwell實驗、劃痕實驗和MTS實驗證明小肽INFEKL能夠有效促進Ha Ca T細胞遷移和增殖,免疫印跡實驗結果提示INFEKL可提高胞質型Hsp90α蛋白水平,并增加培養(yǎng)基中的分泌型Hsp90α含量。我們進一步通過小鼠皮膚創(chuàng)傷模型證實INFEKL可加速小鼠創(chuàng)面愈合,HE染色結果提示INFEKL可加快小鼠創(chuàng)面上皮化進程。本研究創(chuàng)新性地證明蛋清源小分子肽可通過提高胞外或胞內型Hsp90α蛋白水平促進皮膚細胞遷移,加速小鼠皮膚創(chuàng)面愈合,表明食源性多肽在調控細胞遷移方面具有研究潛力和應用價值,為開發(fā)新型促皮膚創(chuàng)面愈合類食源性小分子肽提供的研究思路和理論依據(jù)。
【圖文】：

同濃度的血清情況下都能觀察到細胞，而且在 10%的血清中細胞的形態(tài)更好，因此我們選擇時間為 48 h，，10%的血清濃度作為實驗的條件。圖2.1 不同血清濃度以及遷移時間HSF的遷移效果2.4.2 篩選有效的促進細胞遷移的混合多肽課題組在前期研究中，采用分步酶解法對蛋清粉進行酶解，并通過超濾及葡聚糖凝膠純化，分離得到了四個混合多肽組分，分別命名為 EWP1、EWP2、EWP3和 EWP4。確定了 HSF 細胞的 Transwell 實驗條件后，我們選擇相同的多肽濃度200 μg/mL，探究 EWP1、EWP2、EWP3 和 EWP4 四個組分對于 HSF 細胞遷移的影響。加藥處理 48 h 后對細胞進行固定染色，而后用熒光顯微鏡拍照保存，整理實驗結果。結果如圖 2.2 所示，相同濃度多肽的作用下，與對照組以及其余三組相比，組份 EWP2 明顯增加了穿過小室底部的細胞數(shù)量。因此

圖 2.2 不同多肽組份對 HSF 細胞遷移的作用圖 2.3 不同濃度的 EWP2 對 HSF 細胞遷移的作用2.4.3 動物創(chuàng)傷實驗結果上述實驗結果證明酶解得到的混合多肽組份 EWP2 能夠明顯促進 HSF 細胞的遷移，因此我們選擇 EWP2 進行后續(xù)實驗。在皮膚傷口愈合過程中，HSF 細
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R151

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 寒梅;日本食品專利十五條[J];糧油食品科技;1988年03期

2 于志鵬;林松毅;劉靜波;郝慧;;優(yōu)化蛋清粉蛋白熱變性條件的研究[J];食品科學;2007年10期

3 鄒淑蓉,柳啟沛,汪乃經(jīng);雞蛋蛋清粉中抗生物素蛋白的分析[J];營養(yǎng)學報;2001年02期

4 汪磊;周堅;于巍;;蛋糕預混合粉蛋清粉添加的研究[J];糧食加工;2009年01期

5 沈懌,高艷琴,樂繼英,汪乃經(jīng);雞蛋清粉制品殘存抗生物素蛋白(Avidin)的分離和分析[J];食品科學;1993年09期

6 車永真;范大明;陸建安;王淼;楊嚴俊;;微波法快速提高蛋清粉凝膠強度及其機理的研究[J];食品工業(yè)科技;2008年08期

7 李菁;楊旭;曹磊;顏偉;張揚;何述棟;;蛋清肽水解工藝及飲料配方的優(yōu)化研究[J];食品工業(yè);2019年03期

8 林軍;張華;;蛋清粉的物理特性和蛋黃粉中提取卵磷脂的研究[J];延邊大學農學學報;2018年01期

9 宋啟東;涂宗財;王輝;張露;楊文華;鐘比真;陸建偉;;不同改性方法對蛋清粉致敏性與功能性的影響[J];食品工業(yè)科技;2018年17期

10 胥偉;遲玉杰;孫強;;蛋清粉凝膠性與凝膠穩(wěn)定性的研究[J];中國家禽;2012年02期

相關重要報紙文章 前1條

1 ;雞蛋粉的應用[N];中國食品報;2011年

相關碩士學位論文 前10條

1 李艷菊;蛋清粉多肽促進皮膚傷口愈合及其作用機制的研究[D];吉林大學;2019年

2 孫卓;超聲波處理制備速溶性蛋清粉工藝及溶解性變化規(guī)律研究[D];華中農業(yè)大學;2018年

3 吳琦;抗氧化蛋清肽脂質體的制備及其產(chǎn)品的研發(fā)[D];吉林大學;2018年

4 宋啟東;超聲波預處理結合糖基化制備脫敏蛋清粉的研究及工廠設計[D];南昌大學;2018年

5 王玉X;干熱過程中美拉德反應對蛋清粉凝膠性的改性研究[D];江南大學;2011年

6 車永真;高凝膠性蛋清粉的研究[D];江南大學;2008年

7 羅云;蛋清粉對掛面品質的影響及其機理研究[D];江南大學;2015年

8 孫輝;不同澄清劑對葡萄酒品質的影響研究[D];齊魯工業(yè)大學;2015年

9 段紅玉;蛋糕粉原輔料對蛋糕品質的影響研究[D];天津科技大學;2013年

10 陸春婷;蛋清粉中可溶性糖蛋白的分離提取及功能性質研究[D];吉林大學;2013年

本文編號：2620578