【摘要】：I型超敏反應(yīng)是Ig E介導(dǎo)的過(guò)敏反應(yīng),目前主要的治療藥物包括抗組胺藥、白三烯阻斷藥、肥大細(xì)胞穩(wěn)定劑和糖皮質(zhì)激素等,但這些藥物都對(duì)人體有一定的副作用。燕麥生物堿是來(lái)源于可食用的谷物燕麥中的一種生物活性化合物,在抗炎、抗氧化、抗瘙癢和抗癌等方面有重要作用,并且燕麥生物堿的化學(xué)結(jié)構(gòu)與抗組胺的藥物曲尼司特十分相似。因此,本研究采用RBL-2H3細(xì)胞模型和動(dòng)物被動(dòng)皮膚過(guò)敏模型評(píng)估燕麥生物堿對(duì)I型超敏反應(yīng)中RBL-2H3細(xì)胞脫顆粒作用的影響,期望尋找到一種食源性的健康無(wú)副作用的抗過(guò)敏活性物質(zhì)。本論文研究包括燕麥總生物堿的提取與純化,燕麥生物堿對(duì)大鼠嗜堿性粒細(xì)胞RBL-2H3脫顆粒的影響以及燕麥生物堿對(duì)Ig E介導(dǎo)的被動(dòng)皮膚過(guò)敏反應(yīng)的影響。主要研究方法、結(jié)果與結(jié)論如下:1.建立了乙醇浸提法制備燕麥總生物堿的最佳工藝條件:乙醇體積分?jǐn)?shù)是80.88%,料液比(g/m L)1:20,提取時(shí)間2.05 h,提取溫度61.86℃。燕麥總生物堿經(jīng)溶劑提取法粗提后的平均提取率達(dá)15.85%,經(jīng)AB-8大孔樹(shù)脂純化后得率為21.88%。2.通過(guò)CCK8細(xì)胞增殖毒性試劑盒檢測(cè)10-3-200μM濃度的燕麥生物堿對(duì)RBL-2H3細(xì)胞的增殖毒性作用,發(fā)現(xiàn)各濃度的燕麥生物堿對(duì)RBL-2H3細(xì)胞作用后,其細(xì)胞增殖率均維持在97%-101%之間,與不加燕麥生物堿的空白組相比沒(méi)有顯著性差異(P0.05),由此說(shuō)明燕麥生物堿對(duì)RBL-2H3細(xì)胞無(wú)增殖毒性。3.采用不同濃度的燕麥生物堿處理RBL-2H3細(xì)胞,檢測(cè)細(xì)胞預(yù)合成物質(zhì)β-HEX和組胺的釋放量。結(jié)果顯示100μM的燕麥總生物堿、120μM的燕麥生物堿A、B和C對(duì)RBL-2H3細(xì)胞作用后,β-HEX的釋放率分別為19.5%、26.2%、20%和19.8%,與其對(duì)照組的釋放率43.6%相比抑制效果顯著(P0.05)。組胺的釋放率分別為:21.2%、23.6%、35.1%和34.3%,與其對(duì)照組的釋放率54.28%相比,也有顯著的抑制釋放效果(P0.05);但30μM的燕麥生物堿A、B和C作用于細(xì)胞后,β-HEX的釋放率和組胺的釋放率分別在40%和55%以上,對(duì)二者釋放的抑制效果不明顯(P0.05)。4.采用不同濃度的燕麥生物堿處理RBL-2H3細(xì)胞,檢測(cè)胞內(nèi)新合成物質(zhì)TNF-α和IL-6的釋放量。結(jié)果顯示100μM的燕麥總生物堿和120μM的燕麥生物堿A、B和C作用細(xì)胞后,TNF-α的釋放量分別為130.5 pg/m L、151.7 pg/m L、160.2 pg/m L和155.6 pg/m L,與對(duì)照組243.6 pg/ml相比均有顯著降低(P0.05);IL-6的的釋放量分別為376 pg/m L、380.6 pg/m L、441.3 pg/m L和387 pg/m L,較對(duì)照組548.7 pg/m L顯著降低(P0.05)。60μM和30μM的燕麥生物堿作用于細(xì)胞后,TNF-α和IL-6的釋放量也在減少,但釋放量比高濃度的燕麥生物堿低。由此說(shuō)明燕麥生物堿能顯著抑制TNF-α和IL-6的釋放,且濃度越高抑制效果越好。5.通過(guò)熒光鈣離子檢測(cè),觀察不同濃度燕麥生物堿B處理的RBL-2H3細(xì)胞活化脫顆粒后胞內(nèi)鈣離子含量的變化。結(jié)果顯示燕麥生物堿濃度越高,熒光強(qiáng)度越弱,表明燕麥生物堿B可降低細(xì)胞內(nèi)Ca2+含量,抑制細(xì)胞的活化脫顆粒現(xiàn)象。6.RBL-2H3細(xì)胞分別經(jīng)120μM燕麥生物堿B和100μM燕麥總生物堿處理后,采用Western blot法檢測(cè)細(xì)胞活化脫顆粒時(shí)Lyn、Syk、NF-κB和MAPK家族的P38的磷酸化程度。結(jié)果顯示:與對(duì)照組比較,燕麥生物堿可減少磷酸化蛋白P-Lyn、P-Syk、P-NF-κB、P-P38的表達(dá)量,而對(duì)Lyn、Syk、NF-κB和P38的表達(dá)量無(wú)明顯影響。7.通過(guò)小鼠被動(dòng)皮膚過(guò)敏試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),30μM,60μM和120μM的燕麥生物堿B可顯著改善過(guò)敏反應(yīng)導(dǎo)致的毛細(xì)血管通透性增高(P0.05),且隨濃度增大而效應(yīng)增強(qiáng)。綜上所述,基于RBL-2H3細(xì)胞試驗(yàn)和小鼠被動(dòng)性皮膚過(guò)敏試驗(yàn)結(jié)果,表明燕麥生物堿可有效抑制Ig E介導(dǎo)的肥大細(xì)胞的脫顆粒,具有一定的抗過(guò)敏作用。
【圖文】：

圖 1.1 肥大細(xì)胞中 IgE/FcεRI 介導(dǎo)的信號(hào)通路Figure 1.1 IgE/FcεRI-mediated signaling pathway in mast cells.1 酪氨酸激酶 Lyn 介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路

圖 2.1 乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)燕麥總生物堿提取率的影響ffect of ethanol volume fraction on extraction rate of total avenanthramides 比對(duì)燕麥總生物堿提取率的影響
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：O629.3;R151

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2605389