【摘要】：目的探討鉻污染區(qū)地下水對大鼠肝腎功能的影響,觀察大鼠的肝腎病理改變,并分析可能引起肝腎損傷的相關(guān)機(jī)制。方法以鉻污染區(qū)地下水為實(shí)驗(yàn)組,以不同濃度的重鉻酸鉀為陽性對照組進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。將10只健康SD孕鼠隨機(jī)分成5組,對產(chǎn)仔后的母鼠按照分組(空白組,地下水組,低鉻組,中鉻組,高鉻組)分別灌胃蒸餾水,鉻含量為28.64mg/L的鉻污染區(qū)地下水及劑量為0.8mg/kg、4mg/kg、20mg/kg的重鉻酸鉀溶液。21天后小鼠斷奶,直接灌胃小鼠(共76只),灌胃劑量不變,每日一次,連續(xù)灌胃6個(gè)月。灌胃期間,觀察子代大鼠的行為活動(dòng),毛色,體重等生長情況。灌胃180天后,將子代大鼠放入代謝籠中,禁食不禁水,次日將大鼠麻醉,解剖后取大鼠血液,肝臟及腎臟組織。用原子吸收光譜儀(石墨爐法)測量肝組織和腎組織中的鉻含量;全自動(dòng)生化分析儀檢測血清總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLB)、葡萄糖(GLU)、尿素(Urea)、肌酐(SCr)的含量及谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、堿性磷酸酶(ALP)的活力;將肝臟,腎臟制作成切片后,用蘇木精-伊紅染色法(HE)染色,觀察肝,腎組織的病理變化;用免疫組織化學(xué)方法檢測肝臟腎臟中Caspase-3及PARP的表達(dá)情況。TUNEL染色法觀察大鼠肝細(xì)胞,腎細(xì)胞的凋亡程度。采用SPSS20.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,計(jì)量資料用x±S表示,多組均數(shù)間比較采用單因素方差分析(One-Way ANOVA),每次分析時(shí)均進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)及方差齊性檢驗(yàn),方差不齊時(shí)采用Brown-Forsythe檢驗(yàn),若差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義進(jìn)一步進(jìn)行兩兩比較,用SNK法(q檢驗(yàn)),方差不齊時(shí)采用Dunnett’s T3檢驗(yàn),檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。同一指標(biāo)在不同時(shí)間點(diǎn)比較采用重復(fù)測量的方差分析(Repeated Measure)。結(jié)果1.實(shí)驗(yàn)期間空白組大鼠毛色純白,生長活躍,飲食和體重增長均屬正常;地下水組較空白組相比毛色稍暗黃,反應(yīng)略有遲鈍,生長稍微遲緩。重鉻酸鉀染毒組大鼠隨著染毒天數(shù)的增加,出現(xiàn)毛色暗黃,食欲減退,反應(yīng)遲鈍等生理現(xiàn)象,體重較空白組生長緩慢,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2.與空白組相比,地下水組與各劑量重鉻酸鉀染毒組肝臟中鉻的含量均增高,且隨著染毒劑量的升高,子代大鼠肝臟中鉻含量呈上升趨勢,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。經(jīng)過各組間兩兩比較,Dunnett’s T3結(jié)果顯示地下水組與低鉻組間肝臟中鉻含量的差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),其余各組間肝臟中鉻含量的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.與空白組相比,地下水組與各劑量重鉻酸鉀染毒組腎臟中鉻的含量均增高,且隨著染毒劑量的升高,子代大鼠腎臟中鉻含量呈上升趨勢,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。經(jīng)過各組間兩兩比較,Dunnett’s T3結(jié)果顯示空白組,地下水組與重鉻酸鉀染毒組間腎臟鉻含量的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4.與空白組相比,地下水組與各劑量重鉻酸鉀染毒組血清中TP、ALB、GLB、GLU、Urea的含量均增高,總體均數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),將各組總體均數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的指標(biāo)進(jìn)行兩兩比較。TP指標(biāo)顯示:中鉻組、高鉻組與其余各組間總體均數(shù)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。ALB、GLB指標(biāo)均顯示:空白組與地下水組間總體均數(shù)差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);地下水組與低鉻組間總體均數(shù)差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);其余各組間總體均數(shù)的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。GLU指標(biāo)顯示:中鉻組與高鉻組間總體均數(shù)差異均沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),但與其余三組間總體均數(shù)的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。Urea指標(biāo)顯示:與空白組比較,地下水組和重鉻酸鉀染毒組的總體均數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。地下水組與各劑量重鉻酸鉀染毒組血清中及AST、ALT、ALP活力值均高于空白組,各劑量重鉻酸鉀染毒組與空白組間總體均數(shù)的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。5.HE染色結(jié)果顯示,光學(xué)顯微鏡下觀察可見空白組大鼠肝細(xì)胞排列整齊,呈條索狀,細(xì)胞質(zhì)圓潤飽滿。地下水組大鼠肝細(xì)胞出現(xiàn)嗜酸性樣改變且排列不規(guī)則。隨著重鉻酸鉀染毒濃度增加大鼠肝細(xì)胞表現(xiàn)為不同程度的嗜酸性樣變,排列紊亂,細(xì)胞質(zhì)間隙加大,甚至呈現(xiàn)空泡性樣變。少數(shù)高鉻組大鼠肝組織出現(xiàn)肝竇擴(kuò)張,淤血及少量滲出性出血,偶見壞死灶;光學(xué)顯微鏡下觀察可見空白組大鼠腎小球結(jié)構(gòu)完整,腎小管上皮細(xì)胞排列整齊、規(guī)則。地下水組腎小管出現(xiàn)玻璃樣變,并有微量腎小管管型出現(xiàn)。低鉻組腎小管排列紊亂,同時(shí)有少量腎小管管型出現(xiàn)。中鉻組腎小管玻璃樣變更加明顯,腎小管排列更加紊亂。高鉻組腎小管管型增多,腎小球輕微固縮。6.免疫組化結(jié)果顯示空白組肝臟,偶見表達(dá)的Caspase-3及PARP陽性細(xì)胞。地下水組可見少許陽性細(xì)胞。隨著重鉻酸鉀染毒濃度增加,肝細(xì)胞排列逐漸稀疏紊亂,陽性細(xì)胞逐漸增多;空白組腎組織偶見表達(dá)的Caspase-3及PARP陽性細(xì)胞。地下水組腎組織較空白組相比表達(dá)的Caspase-3及PARP陽性細(xì)胞增多。重鉻酸鉀染毒組隨著染毒劑量增加,表達(dá)的Caspase-3及PARP陽性細(xì)胞數(shù)量逐漸增多。7.肝臟TUNEL細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)顯示:空白組肝細(xì)胞凋亡表達(dá)極少,細(xì)胞凋亡率為(0.94±0.02)%;地下水組和重鉻酸鉀染毒組肝細(xì)胞凋亡數(shù)量呈上升趨勢,細(xì)胞凋亡率分別為(10.54±0.46)%、(11.03±0.39)%、(16.45±0.27)%、(25.41±0.25)%,總體凋亡率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);腎臟TUNEL細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)顯示:空白組腎細(xì)胞凋亡表達(dá)極少,細(xì)胞凋亡率為(0.78±0.17)%;地下水組與重鉻酸鉀染毒組腎細(xì)胞凋亡數(shù)量逐漸增多,細(xì)胞凋亡率分別為(12.30±0.28)%、(15.18±1.17)%、(20.33±0.71)%、(27.13±0.63)%總體凋亡率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論1、長期暴露六價(jià)鉻能夠使血清中TP、ALB、GLB含量增高,GLU、Urea含量降低,并使AST、ALT、ALP的活力增加。2、鉻污染區(qū)地下水中鉻含量嚴(yán)重超標(biāo),由于六價(jià)鉻在肝臟和腎臟中具有蓄積性,長期暴露會(huì)對肝臟和腎臟造成嚴(yán)重?fù)p傷。其作用機(jī)制可能與六價(jià)鉻引起肝臟和腎臟細(xì)胞凋亡有關(guān)。
【圖文】：

圖 2 原子吸收分光光度計(jì)繪制肝臟中鉻含量標(biāo)準(zhǔn)曲線肝臟中鉻的測量繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線，測定肝臟中鉻的含量。用單因素方差分析得出結(jié)。與空白組相比，地下水組與各劑量重鉻酸鉀染毒組肝臟中鉻的含隨著染毒劑量的升高，子代大鼠肝臟中鉻含量呈上升趨勢，差異具（P＜0.05）。經(jīng)過各組間兩兩比較，Dunnett’s T3 結(jié)果顯示地下間肝臟中鉻含量的差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），其余各組間的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。 4 地下水和重鉻酸鉀染毒對子代大鼠肝臟中鉻含量的影響（x±組別 個(gè)數(shù) 消解肝臟重量（mg） 肝臟中鉻含量（mg/kg）空白組 15 0.405±0.009 1.162±0.089下水組 17 0.412±0.007 1.80±0.2751)

圖 3 原子吸收分光光度計(jì)繪制腎臟中鉻含量標(biāo)準(zhǔn)曲線2、腎臟中鉻的測量根據(jù)繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線，測定腎臟中鉻的含量，，結(jié)果分析如表 5 所示。與空比，地下水組與各劑量重鉻酸鉀染毒組腎臟中鉻的含量均增高，且隨著染的升高，子代大鼠腎臟中鉻含量呈上升趨勢，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P）。經(jīng)過各組間兩兩比較，Dunnett’s T3 結(jié)果顯示空白組，地下水組與鉀染毒組間腎臟鉻含量的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。 5 地下水和重鉻酸鉀染毒對子代大鼠腎臟中鉻含量的影響（x±s）組別 個(gè)數(shù) 消解腎重量(mg) 腎臟中鉻含量(mg/kg)空白組 15 0.412±0.008 4.407±0.088地下水組 17 0.408±0.005 5.042±0.0981)低鉻組 14 0.406±0.006 7.375±0.2021)2)
【學(xué)位授予單位】：錦州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R114

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2605532