【摘要】：克倫特羅是β腎上腺素的一種，臨床用來治療哮喘等呼吸系統(tǒng)疾病，由于可以促進(jìn)動物脂肪的重分配，提高動物瘦肉率，近年來被作為“瘦肉精”非法添加到動物飼料中，嚴(yán)重危害了消費者的身體健康，打擊消費者的信心。國內(nèi)外關(guān)于克倫特羅檢測方法的報道已經(jīng)有很多，如高效液相色譜法、高效氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法、酶聯(lián)免疫法、金標(biāo)試紙法、生物傳感器法等。這些方法存在著各樣的缺點，均不能同時滿足企業(yè)批量、現(xiàn)場、快速檢測克倫特羅的的要求，針對以上問題，本文以血清中的克倫特羅為對象，研究了一種利用堿性高錳酸鉀檢測克倫特羅的新方法。 本文選擇了鄰甲氧基苯酚、甲萘酚、茜素、N-（1-萘基）-乙二胺、高錳酸鉀五種顯色劑檢測克倫特羅，每種顯色劑的最佳反應(yīng)條件分別如下。 鄰甲氧基苯酚檢測克倫特羅的最佳反應(yīng)條件：KHSO4濃度為0.36mol/L，NaNO2濃度為0.72mol/L，H_2NSO_3NH_4濃度為0.11mol/L，體積比為0.6:0.2:1，檢出限為5.4μg/mL；甲萘酚檢測克倫特羅的最佳反應(yīng)條件：NaNO2濃度為0.10mol/L，HCL濃度為1.50mol/L，，H_2NSO_3NH_4濃度為0.15mol/L，體積比為1:1:1，檢出限為4.0μg/mL；茜素檢測克倫特羅的最佳反應(yīng)條件：茜素濃度為5.0×10~(-4)mol/L-，乙酸濃度為1.0×105mol/L，體積比為1:1，檢出限為4.0μg/mL；N-（1-萘基）-乙二胺檢測克倫特羅的最佳反應(yīng)條件：HCL濃度為0.2mol/L，NaNO2濃度為0.1mol/L，H_2NSO_3NH_4濃度為0.3mol/L，體積比為1:1:1，檢出限為1.2μg/mL；堿性高錳酸鉀檢測克倫特羅的最佳反應(yīng)條件：NaOH濃度為1.5mol/L，KMnO_4濃度為5.0×10-4g/mL，NaOH：KMnO_4體積比為10:1，檢出限為1.0ng/mL。 選擇堿性高錳酸鉀顯色劑檢測血清中的克倫特羅，通過正交試驗設(shè)計和二次通用旋轉(zhuǎn)分析，確定了最佳反應(yīng)條件，即NaOH濃度為0.468mol/L，KMnO_4濃度為0.327×10~(-3)g/mL，NaOH：KMnO_4（V1：V2）=0.159；在此反應(yīng)條件下以血清中克倫特羅的濃度（ppb）為橫坐標(biāo)，反應(yīng)吸光度值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線方程如下：y=0.6614-0.1057x2（R=0.9973）；確定了此方法的檢出限為1ppb；對鹽酸腎上腺素、萊克多巴胺和沙丁胺醇有著良好的特異性；此方法的批內(nèi)變異系數(shù)在2.10%-16.67%之間波動，批間誤差在0.71%-7.44%之間波動，重現(xiàn)性良好；通過堿性高錳酸鉀比色法與酶聯(lián)免疫反應(yīng)（ELISA）標(biāo)準(zhǔn)點和實際樣品測定比對試驗，發(fā)現(xiàn)前者的標(biāo)準(zhǔn)點擬合誤差和實際樣品回收率測定誤差均低于后者，因此堿性高錳酸鉀法的穩(wěn)定性優(yōu)于ELISA法。 依據(jù)堿性高錳酸鉀與克倫特羅反應(yīng)的原理，以耐堿PVC板材為載體制做快速檢測試紙條，檢出限為1ppb；試驗表明4℃下速測試紙條的穩(wěn)定期為三個月，25℃下穩(wěn)定期為兩個月；鹽酸腎上腺素、萊克多巴胺和沙丁胺醇濃度高達(dá)100ng/mL時，快速檢測試紙條仍無法將其檢出，試驗證明試紙條穩(wěn)定性和特異性均良好。 本文通過一系列試驗研究，確定了堿性高錳酸鉀檢測血清中克倫特羅的最佳條件，驗證了方法的特異性與重現(xiàn)性，并根據(jù)此反應(yīng)研制了克倫特羅速測試紙條。證明了堿性高錳酸鉀檢測克倫特羅是一種快速、靈敏、便捷、價廉的檢測方法，為克倫特羅的快速、現(xiàn)場檢測提供了理論依據(jù)。
【圖文】：

”就是獸藥中典型的一種，又名克倫特羅（Clenbu于治療哮喘、支氣管炎等呼吸系統(tǒng)疾病，屬于β-腎夠減少脂肪沉積，有效促進(jìn)肌肉組織生長和蛋白質(zhì)合的瘦肉率，克倫特羅曾一度廣泛應(yīng)用于畜牧業(yè)[4]。由蓄積，會引發(fā)食用者的中毒現(xiàn)象，因此CLB作為獸數(shù)國家被相繼禁止，包括中國政府。然而一些不法商法在飼料中添加CLB，給我國的人民健康和畜產(chǎn)品外研究現(xiàn)狀特羅性質(zhì)簡介（Clenbuterol Hydrochloride,CLB），又名羥甲叔丁腎8N2OCl2·HCl，分子量313.7Da，是一種β2-腎上腺素的一種衍生物，無臭，味微苦，性狀為白色或類白色5℃[6]，易溶于乙醇、甲醇、水，微溶于氯仿，不溶于下[8]：

染的肉食品要煮熟食用，但研究表明，100℃高溫下克倫特羅結(jié)構(gòu)依然穩(wěn)定，126℃高溫烹炸5min，CLB含量會減為一半。1.1.2 克倫特羅作為“瘦肉精”使用的藥用原理及危害克倫特羅首次作為獸藥添加劑使用是在1984年[13]，一家美國公司意外將5-10倍(>1μg/kg·d)高于治療劑量的CLB加入動物飼料，發(fā)現(xiàn)動物生長明顯被促進(jìn)、胴體品質(zhì)有顯著改善、牲畜的瘦肉率也有大幅提高，后來此發(fā)現(xiàn)在養(yǎng)殖業(yè)方面被某些國家應(yīng)用。我國一些科研機(jī)構(gòu)也于20世紀(jì)80年代向養(yǎng)殖戶和飼料企業(yè)錯誤地推廣CLB�？藗愄亓_能以10%-15%的百分率提高瘦肉率和飼料轉(zhuǎn)化率，同時降低8%-15%骨骼肌脂肪[14]，因此CLB被飼料企業(yè)和養(yǎng)殖戶稱做“瘦肉精”。克倫特羅實現(xiàn)脂肪重分配的原理為[15]：CLB刺激分泌腎上腺素促進(jìn)腺苷酸環(huán)化酶的產(chǎn)生，從而提高了高環(huán)磷酸腺苷（cAMP）的濃度，促進(jìn)了激素敏感脂酶的活化，最終加快脂肪分解，并使游離脂肪酸（FFA）從血液進(jìn)入肌肉，為蛋白質(zhì)的進(jìn)一步合成提供基礎(chǔ)物質(zhì)；同時，作為神經(jīng)調(diào)節(jié)劑的一種，CLB可使血液中Mg2+（具有抑制肌肉興奮作用）濃度降低，使細(xì)胞膜的通透性改善，重新分配肌體內(nèi)的營養(yǎng)以及代謝調(diào)控，即減弱動物體內(nèi)的脂肪合成和蛋白質(zhì)分解等生化反應(yīng)，從而使組織中的氮沉積。CLB實現(xiàn)“瘦肉精”作用的原理圖如下：
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R155.5

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本文編號：2577273