【摘要】：目的： 在體外試驗(yàn)系統(tǒng),初步探討Cr(Ⅵ)誘導(dǎo)線粒體DNA氧化損傷情況及hOGGl基因的修復(fù)作用,為進(jìn)一步闡明Cr(Ⅵ)誘導(dǎo)線粒體氧化損傷的機(jī)制提供線索。 方法： 以L-02肝細(xì)胞為受試細(xì)胞,通過(guò)MTT試驗(yàn)檢測(cè)不同濃度Cr(Ⅵ)對(duì)L-02肝細(xì)胞存活率的影響,篩選出Cr(Ⅵ)濃度高(32umol/L)、中(8μmol/L)、低(2μmol/L)和空白對(duì)照(0μmol/L)進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn),染毒時(shí)間為24h。通過(guò)多功能熒光酶標(biāo)儀檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)及ATP的濃度,實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-qPCR)檢測(cè)hOGG1基因mRNA的表達(dá),酶標(biāo)儀檢測(cè)線粒體內(nèi)8-羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)的含量及細(xì)胞內(nèi)超氧化物歧化酶(SOD)活性,Western blot方法檢測(cè)線粒體內(nèi)8-羥基鳥嘌呤DNA糖苷酶(hOGG1蛋白)含量,分光光度計(jì)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)過(guò)氧化氫酶(CAT)和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-PX)活性。 結(jié)果： 1.Cr(Ⅵ)引起L-02肝細(xì)胞存活率降低：Cr(Ⅵ)在2-256μmol/L處理濃度范圍內(nèi)(處理24h),能明顯引起L-02肝細(xì)胞存活率的降低(P0.05),處理濃度和細(xì)胞存活率之間存在明顯負(fù)相關(guān)(r=-0.924,P0.01)。根據(jù)細(xì)胞存活率選出適當(dāng)?shù)腃r(Ⅵ)處理濃度：高(32μmol/L)、中(8μmol/L)、低(2μmol/L)和空白對(duì)照(0μmol/L)進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。 2.Cr(Ⅵ)引起L-02肝細(xì)胞活性氧簇(ROS)含量增加：與對(duì)照組比較,2μmol/L Cr(Ⅵ)處理濃度組細(xì)胞內(nèi)ROS平均含量無(wú)明顯增加(p0.05),8、32μmol/L Cr(Ⅵ)處理組細(xì)胞內(nèi)ROS平均含量逐漸增加(p0.05),且隨著Cr(Ⅵ)處理濃度的增大,細(xì)胞內(nèi)ROS平均含量隨之增加,兩者之間存在明顯正相關(guān)(r=0.942,P0.01)。 3.Cr(Ⅵ)對(duì)L-02肝細(xì)胞能量代謝的影響：與對(duì)照組相比,2μmol/LCr(Ⅵ)低濃度組細(xì)胞內(nèi)ATP濃度無(wú)變化(p0.05);8、32μmol/LCr(Ⅵ)濃度組細(xì)胞內(nèi)ATP濃度明顯降低(P0.05),且隨著Cr(Ⅵ)處理濃度的增大,細(xì)胞內(nèi)ATP濃度隨之降低,兩者之間存在明顯負(fù)相關(guān)(r=-0.967,P0.05)。 4.Cr(Ⅵ)對(duì)線粒體內(nèi)8-OHdG含量的影響：與對(duì)照組相比,2μmol/L Cr(VI)低濃度組線粒體內(nèi)8-OHdG平均含量無(wú)變化(p0.05)；8、32μmol/LCr(VI)濃度組線粒體內(nèi)8-OHdG平均含量明顯降低(P0.05),且隨著Cr(Ⅵ)處理濃度的增大,線粒體內(nèi)8-OHdG含量隨之增加,兩者之間存在明顯正相關(guān)(r=0.816,P0.05)。 5.Cr(Ⅵ)對(duì)hOGG1基因表達(dá)的影響：與對(duì)照組相比,2μmol/L處理組hOGG1基因mRNA表達(dá)水平及線粒體內(nèi)hOGG1蛋白含量均明顯增加(p0.05)；8μmol/L濃度組hOGG1基因mRNA表達(dá)水平及線粒體內(nèi)hOGG1蛋白含量與對(duì)照組相比無(wú)明顯改變(p0.05),但低于2μmol/L處理組(p0.05);32μmol/L濃度組兩者均明顯降低(p0.05),且在2-32μmol/L Cr(VI)處理濃度范圍內(nèi),hOGG1基因mRNA表達(dá)水平及線粒體內(nèi)hOGG1蛋白含量逐漸降低。 6.Cr(Ⅵ)對(duì)L-02肝細(xì)胞抗氧化酶活力的影響：與對(duì)照組相比,2μmol/L濃度組細(xì)胞內(nèi)SOD、CAT和GSH-PX平均活力明顯增加(p0.01);8μmol/L濃度組細(xì)胞內(nèi)SOD和CAT平均活力明顯降低(p0.01),細(xì)胞內(nèi)GSH-PX平均活力明顯升高,且高于2μmol/L濃度組(p0.01);32μmol/LCr(VI)濃度組細(xì)胞內(nèi)SOD、CAT和GSH-PX平均活力均明顯降低。 結(jié)論： Cr(Ⅵ)可誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)ROS水平增加,使mtDNA受到氧化損傷,線粒體內(nèi)8-OHdG含量增加,影響ATP的產(chǎn)生,導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生能量代謝障礙。而hOGG1基因表達(dá)水平及抗氧化酶活力(SOD、CAT和GSH-PX)的改變,影響了線粒體DNA的修復(fù)�？傊�,hOGG1基因在Cr(Ⅵ)誘導(dǎo)線粒體DNA氧化損傷中起到了重要的作用。
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R114

【參考文獻(xiàn)】

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1 肖經(jīng)緯;鐘才高;李斌;;六價(jià)鉻誘導(dǎo)L-02肝細(xì)胞凋亡與線粒體功能損傷的關(guān)系研究[J];衛(wèi)生研究;2006年04期

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本文編號(hào)：2577190