【摘要】：目的研究十溴聯(lián)苯醚（decabromodiphenylether, BDE-209）對小鼠肝臟組織誘導的氧化應激水平變化以及釋放細胞色素C（Cytochrome C，Cyt-C）的線粒體凋亡通路蛋白表達的影響，為深入研究BDE-209的肝臟毒性機制提供依據(jù)。 方法3周齡雄性BALB/c小鼠28只，按隨機原則分為4組，每組小鼠7只：即生理鹽水組、溶劑對照組、低劑量組（BDE-209，200mg/kg）和高劑量組（BDE-209，500mg/kg）；小鼠按10ml/kg體重劑量經(jīng)口灌胃染毒，連續(xù)6周，每周處理6次；六周后脫眼球取血，斷頭處死小鼠，冰盤上分離臟器并稱重；分別于光鏡和電鏡下觀察各組小鼠肝臟的組織形態(tài)學和超微結構改變；測定各組小鼠血清谷丙氨酸轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）活性、測定肝臟丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活力、谷胱甘肽（GSH）的含量，并用蛋白免疫印跡法（Western blot）檢測肝臟中Bax、Bcl-2、Cyt-C、caspase-9以及caspase-3蛋白的表達情況。 結果各劑量組肝臟重/體重間無統(tǒng)計學差異；高、低劑量染毒組小鼠血清ALT分別為（95.9243±10.8066）U/L、（87.7352±7.9656）U/L，二者均高于生理鹽水組的（62.0655±8.3967）U/L和溶劑對照組的（62.5168±8.3400）U/L，差異有統(tǒng)計學意義（P0.05）；高、低劑量染毒組小鼠血清AST分別為（176.8746±12.3145）U/L、（167.3821±8.4494）U/L，二者均高于生理鹽水組的（130.8888±8.1633）U/L和溶劑對照組的（131.3715±7.4749）U/L，差異有統(tǒng)計學意義（P0.05）；高、低劑量染毒組小鼠肝臟組織MDA分別為（0.1915±0.0674）nmol/mg prot、（0.1737±0.0414）nmol/mg prot，均高于生理鹽水組的（0.0773±0.0226）nmol/mg prot和溶劑對照組的（0.0790±0.0340）nmol/mg prot，差異有統(tǒng)計學意義（P0.05）；高、低劑量染毒組小鼠肝臟組織T-SOD活性分別為（0.2867±0.0401）U/mg prot、（0.3064±0.0219）U/mg prot，均低于生理鹽水組的（0.3608±0.0687）U/mg prot和溶劑對照組的（0.3596±0.0343）U/mg prot，差異有統(tǒng)計學意義；高劑量染毒組小鼠肝臟GSH含量為（0.0647±0.0235）mg GSH/g prot，低于生理鹽水組（0.0987±0.0189）mg GSH/g prot、溶劑對照組（0.0994±0.0124）mg GSH/g prot、低劑量染毒組（0.0894±0.0314）mg GSH/g prot，差異有統(tǒng)計學差異（P0.05）。光鏡下觀察染毒組小鼠肝臟出現(xiàn)肝細胞濁腫，胞漿內(nèi)有細小脂質(zhì)空泡，肝索排列發(fā)生改變，部分肝細胞模糊，空泡化顯著。電鏡下觀察染毒組小鼠肝臟出現(xiàn)染色質(zhì)濃縮聚合，線粒體膨脹，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)增大。Western blot結果顯示：BDE-209染毒組肝臟中Bax/Bcl-2、Cyt-C、caspase-9、caspase-3的表達水平均高于對照組組，差異有統(tǒng)計學意義（P0.05）。 結論BDE-209可以引起肝臟組織脂質(zhì)過氧化指標的改變和組織形態(tài)學以及超微結構的改變。BDE-209導致肝臟的氧化損傷可能是動物肝臟毒性基礎之一。同時細胞線粒體的形態(tài)學改變以及Bax/Bcl-2表達的變化可能導致Cyt-C的釋放，激活經(jīng)典凋亡途徑，誘導caspase-9、caspase-3表達的變化。 目的BDE-209是一種對生態(tài)環(huán)境和生物的健康構成潛在的威脅的持久性有機污染物。研究一已經(jīng)證實了BDE-209可以引起小鼠肝臟組織氧化損傷以及Cyt-C相關線粒體凋亡通路關聯(lián)性蛋白的表達變化，因此本研究探討N-乙酰半胱氨酸（NAC）對BDE-209致小鼠肝臟組織氧化損傷的保護作用及Cyt-C相關的線粒體凋亡通路相關蛋白表達的改變情況。 方法3周齡雄性BALB/c小鼠21只，隨機分為3組，即生理鹽水組、染毒組（BDE-209組，200mg·kg~(-1)·d~(-1)）和干預組（BDE-209+NAC組，在給予BDE-209前0.5h經(jīng)腹腔注射給予NAC100mg·kg~(-1)·d~(-1)）每組7只，小鼠按10ml/kg體重劑量經(jīng)口灌胃染毒，連續(xù)6周，每周處理6次；六周后脫眼球取血，斷頭處死小鼠，冰盤上分離臟器并稱重；分別于光鏡和電鏡下觀察各組小鼠肝臟的組織形態(tài)學和超微結構改變；測定各組小鼠血清ALT和AST活性、測定肝臟MDA含量、SOD活力、GSH的含量，Western blot法檢測肝臟中Bax、Bcl-2、Cyt-C、caspase-9、caspase-3蛋白的表達情況。 結果各染毒組小鼠肝重/體重間無統(tǒng)計學差異；染毒組小鼠血清ALT為（87.7352±7.9656）U/L，高于生理鹽水組的（62.0655±8.3967）U/L和干預組的（65.9243±10.8066）U/L，差異具有統(tǒng)計學意義（P0.05）；染毒組小鼠血清AST為（167.3821±8.4494）U/L，高于生理鹽水組的（130.8888±8.1633）U/L和干預組的（136.7846±8.3145）U/L，差異有統(tǒng)計學意義（P0.05）；染毒組小鼠肝臟組織MDA含量為（0.1737±0.0414）nmol/mg prot，高于生理鹽水組（0.0773±0.0226nmol/mg prot）及干預組（0.0821±0.0171nmol/mg prot），差異具有統(tǒng)計學意義（P0.05）；染毒組小鼠肝臟組織SOD活力（0.3064±0.0219U/mg prot）低于生理鹽水組（0.3608±0.0687U/mg prot）和干預組（0.3579±0.0421U/mg prot），差異有統(tǒng)計學意義（P0.05）；染毒組小鼠肝臟組織GSH含量（0.0894±0.0314mgGSH/g prot）低于生理鹽水組（0.0987±0.0189mg GSH/g prot）和干預組（0.0979±0.0241mg GSH/g prot），且差異有統(tǒng)計學意義（P0.05）；Western blot結果顯示:染毒組小鼠肝臟組織Bax/Bcl-2、Cyt-C、caspase-9、caspase-3的表達水平均高于生理鹽水組及干預組，且差異有統(tǒng)計學意義（P0.05）；光鏡下觀察染毒組小鼠肝臟出現(xiàn)肝細胞濁腫，胞漿內(nèi)有細小脂質(zhì)空泡，肝索排列發(fā)生改變，部分肝細胞模糊，空泡化顯著，生理鹽水組和干預組小鼠肝臟組織上述變化不顯著；電鏡下觀察染毒組小鼠肝臟出現(xiàn)染色質(zhì)濃縮聚合，線粒體膨脹，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)增大，生理鹽水組和干預組小鼠肝臟組織上述變化不顯著。 結論N-乙酰半胱氨酸對BDE-209引起的肝臟毒性具有一定的保護作用。
【圖文】：

差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；染毒組AST活性高于生理鹽水組及溶劑對照組，且差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）（表1-3，圖1-1、1-2）。表1-3 BDE-209染毒對小鼠血清ALT、AST活性的影響（X ±S）Tab 1-3 Effect on serum ALT and AST of mice exposed to BDE-209 ( X ±S)注：*與生理鹽水組比 P<0.05；#與溶劑對照組比 P<0.05；☆與低劑量組比 P<0.05組別 數(shù)量（n） ALT（U/L） AST（U/L）生理鹽水組 7 62.0655±8.3967 130.8888±8.1633溶劑對照組 7 62.5168±8.3400 131.3715±7.4749低劑量組 7 87.7352±7.9656*# 167.3821±8.4494*#高劑量組 7 95.9243±10.8066*# 176.8746±12.3145*#

注：*與生理鹽水組比P<0.05；#與溶劑對照組比P<0.05圖1-2 BDE-209染毒各組小鼠血清AST的比較Fig1-2 Comparison of AST in serum of groups exposed to BDE-2093.2.2 BDE-209染毒后小鼠肝臟MDA含量的改變：檢測各組小鼠肝臟組織中的MDA含量，結果如表1-4所示：溶劑對照組和生理鹽水對照組之間對比無差異；低劑量組MDA含量高于生理鹽水組及溶劑對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；高劑量組MDA含量高于生理鹽水組及對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）（表1-4，，圖1-3）。表1-4 BDE-209染毒對小鼠肝臟中MDA含量影響（X ±S，nmol/mg prot）Tab 1-4 The content of MDA in liver among groups exposed to BDE-209( X ±S,nmol/mg prot)
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R114

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本文編號：2519012