【摘要】：肥胖是一種與代謝相關(guān)的全身慢性輕度炎癥,與胰島素抵抗、Ⅱ型糖尿病等疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。在肥胖發(fā)展進(jìn)程中,脂肪組織巨噬細(xì)胞(adipose tissue macrophages,ATMs)的數(shù)量、表型和分布發(fā)生重大改變。肥胖個體中,ATMs以促炎M1型巨噬細(xì)胞為主,分布于正在死亡的脂肪細(xì)胞周圍。M1型ATMs分泌TNF-α等炎性因子,造成脂肪組織炎癥狀態(tài)。此外TNF-α還可通過與脂肪細(xì)胞釋放的游離脂肪酸(free fatty acids,FFAs)構(gòu)成旁分泌環(huán)路加劇脂肪組織炎癥。ATMs被認(rèn)為是肥胖相關(guān)炎癥的主要貢獻(xiàn)者,因而可將ATMs表型的變化作為研究肥胖相關(guān)炎癥和胰島素抵抗等疾病的標(biāo)靶。表沒食子兒茶素沒食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)是綠茶多酚中的主要活性成分,具有抗炎、抗腫瘤、抗氧化等多種生物活性。在體外研究中已經(jīng)證實(shí),EGCG干預(yù)可下調(diào)M1型巨噬細(xì)胞標(biāo)志物的表達(dá),上調(diào)M2型巨噬細(xì)胞標(biāo)志物的表達(dá)。動物模型研究也表明,食源性EGCG干預(yù)可減少脂肪組織中ATMs的含量,但EGCG能否影響在體ATMs的極化還未見相關(guān)研究報道。本研究通過使用食源性EGCG干預(yù)高脂膳食誘導(dǎo)的肥胖小鼠,以探究食源性EGCG對ATMs極化的影響及其對肥胖小鼠的減重效果。本研究中選用三周齡雄性ICR小鼠通過高脂膳食誘導(dǎo)構(gòu)建肥胖模型,將ICR小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后,分為正常飲食組(n=10)和高脂膳食誘導(dǎo)組(n=75),分別飼喂普通飼料和高脂飼料。誘導(dǎo)五周后,共有43只小鼠造模成功,造模成功率為57.3%。將造模成功的肥胖小鼠分為高脂組,和低、中、高劑量EGCG干預(yù)組(n=10)。在EGCG干預(yù)6周后,將小鼠禁食不進(jìn)水12 h,測量小鼠體重與附睪脂肪組織濕重,摘眼球取血后采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)檢測血清中空腹胰島素(FINS)、空腹血糖(FBG)、游離脂肪酸(FFAs)和瘦素(LEP)水平,以探究食源性EGCG對膳食誘導(dǎo)型肥胖小鼠代謝參數(shù)的影響;取小鼠附睪脂肪組織,提取總RNA與總蛋白,以F4/80作為成熟巨噬細(xì)胞的標(biāo)志物,CD11c和iNOS作為M1型巨噬細(xì)胞的標(biāo)志物,CD206作為M2型巨噬細(xì)胞的標(biāo)志物,通過實(shí)時熒光定量PCR(qRT-PCR)和ELISA分別測量附睪脂肪組織中巨噬細(xì)胞標(biāo)志物F4/80、CD11c、iNOS和CD206的基因表達(dá)水平和蛋白表達(dá)水平,以探究食源性EGCG干預(yù)對膳食誘導(dǎo)型肥胖小鼠ATMs極化的影響。結(jié)果顯示,食源性EGCG干預(yù)以劑量依賴方式減輕膳食誘導(dǎo)型肥胖小鼠的體重與附睪脂肪濕重,減少FINS、FBG、LEP和循環(huán)FFAs水平,減少脂肪組織中浸潤的巨噬細(xì)胞數(shù)目,下調(diào)M1巨噬細(xì)胞標(biāo)志物CD11c和iNOS的表達(dá),并上調(diào)M2巨噬細(xì)胞標(biāo)志物CD206的表達(dá)。本研究表明EGCG具有減重減脂功效,可緩解肥胖個體中胰島素抵抗和瘦素抵抗情況,減少脂肪組織中浸潤的巨噬細(xì)胞數(shù)目并影響ATMs的極化。本研究將ATMs的極化作為研究脂肪組織炎癥的靶標(biāo),為探究和治療肥胖及肥胖相關(guān)炎癥提供了新的視角,也為EGCG作為潛在的減肥藥物和保健品開發(fā)提供了實(shí)驗(yàn)證據(jù)。
【圖文】：

圖 1-1 AMPK 假說示意圖[108]Fig. 1-1 The illustration ofAMPK hypothesis1.3.3 EGCG 與 ATMs如上文所述，肥胖進(jìn)程中 ATMs 的表型、數(shù)量和分布發(fā)生極大改變，在纖瘦個體肪組織中約含 5-10%的 ATMs，主要以抗炎的 M2 型巨噬細(xì)胞為主，它們均勻分布康的脂肪細(xì)胞之間；而在肥胖個體的脂肪組織中，ATMs 所占比例上升至 50%，多炎的 M1 型巨噬細(xì)胞為主，通常聚集于正在死亡的脂肪細(xì)胞周圍。ATMs 是肥胖相進(jìn)性炎癥的主要貢獻(xiàn)者，M1 型 ATMs 可分泌大量炎性因子，并可通過與脂肪細(xì)胞泌的 FFAs 相互作用擴(kuò)大脂肪組織炎癥反應(yīng)，因而可將脂肪組織內(nèi) M1 型與 M2 型細(xì)胞的轉(zhuǎn)化作為研究脂肪組織相關(guān)慢性輕度炎癥的研究靶標(biāo)。在體外研究中，已有很多研究表明 EGCG 可影響巨噬細(xì)胞的極化。67 LR 是巨噬、中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞上的層粘連蛋白受體，Hong 等人選用 Raw264.7 巨噬細(xì)胞養(yǎng) 24 h 后的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞，再用 LPS 和/或 EGCG 處理前 1 h，加抗 67LR 抗

在小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后，，選取兩籠作為正常飲食組（n=10），另 15 籠作為高脂食誘導(dǎo)組（n=75）。正常飲食組和高脂飲食誘導(dǎo)組分別飼喂普通飼料與高脂飼料，兩小鼠均采取自由飲食和飲水，每周更換飼料，兩組小鼠均處于自然溫度、光照與濕度下每周測量小鼠體重，在飼養(yǎng)五周后，將肥胖度（見式 2-1）大于 20%的小鼠視為造模功。肥胖模型建立階段時間為 2016 年 10 月 13—2016 年 11 月 23 日。肥胖度（%）=（實(shí)驗(yàn)組小鼠體重-對照組小鼠平均體重）÷對照組小鼠平均體重×100式 2-1(2)動物分組將第一階段中正常飲食組（control, Ctrl）小鼠繼續(xù)進(jìn)行普通飼料喂養(yǎng)，肥胖模型模成功的小鼠分為高脂飲食（high fat diet, HFD）組、低劑量 EGCG 干預(yù)組、中劑量 EGC干預(yù)組與高劑量 EGCG 干預(yù)組（n=10），分別飼喂高脂飼料、低劑量 EGCG 飼料、中量 EGCG 飼料和高劑量 EGCG 飼料。EGCG 干預(yù) 6 周后開始后續(xù)實(shí)驗(yàn)。動物分組及養(yǎng)流程圖見圖 2-1。EGCG 干預(yù)階段時間為 2016 年 11 月 24 日—2016 年 1 月 5 日。
【學(xué)位授予單位】：河南師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R151

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 劉敏;肖鵬;李衛(wèi)國;王坤英;;表沒食子兒茶素沒食子酸酯對IL-4刺激的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)型一氧化氮合酶和精氨酸酶-1表達(dá)的影響[J];河南師范大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2016年04期

2 張東芳;肖鵬;韓晨露;李衛(wèi)國;王坤英;;表沒食子兒茶素-3-沒食子酸酯抑制脂多糖誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞促炎因子TNF-α和IL-1β基因表達(dá)[J];中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報;2014年04期

3 陳粉粉;郭愛偉;周杰瓏;賀學(xué)龍;李皓;;ICR小鼠肥胖模型的建立以及肥胖指標(biāo)和脂肪組織形態(tài)學(xué)比較[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2012年05期

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 張鑫;低溫雨雪冰凍環(huán)境下小鼠采食量、飲水量及體重的動態(tài)變化研究[D];沈陽師范大學(xué);2015年

本文編號：2518809