【摘要】：研究背景 三氯乙烯（TCE）是工業(yè)上廣泛使用的一種有機(jī)溶劑，除了作為高分子化合物的原料以外，60%被五金、玩具、電子等行業(yè)用作金屬部件和電子元件清洗劑，主要應(yīng)用在清洗線路板，金屬表面脫污去污，也常用作油脂、石蠟的萃取劑，還可用于印染油墨、斑點(diǎn)去污劑、打字改正液等。大量的臨床病例顯示DMLT患者除了全身性皮膚損害外，還伴有肝損傷，并且DMLT的致死主要原因是肝功能衰竭，因此肝臟損傷的機(jī)制研究在DMLT防治工作中顯的尤為重要。但有相關(guān)研究還發(fā)現(xiàn)，TCE所致的藥疹樣皮炎，特別是免疫性肝臟損傷，不能用遲發(fā)型IV型變態(tài)反應(yīng)完全解釋。補(bǔ)體激活可能在TCE所致的免疫性肝損傷中也發(fā)揮一定的作用，提示在DMLT患者出現(xiàn)的肝功能損傷發(fā)生過程中除了IV型變態(tài)反應(yīng)參與外，還可能有補(bǔ)體激活機(jī)制參與。 研究目的 通過檢測TCE致敏小鼠不同組別和時(shí)點(diǎn)小鼠血清和肝臟中補(bǔ)體活化產(chǎn)物C3a、C5a和C5b-9的表達(dá)水平，結(jié)合肝功能檢查、肝臟臟器系數(shù)檢查，探討TCE致敏小鼠補(bǔ)體激活其與肝損傷的關(guān)系，最終闡明TCE的危害及其機(jī)理并制定防治對策提供理論依據(jù)。 研究方法 選用6~8周健康雌性BALB/c小鼠75只，隨機(jī)分成空白對照組、溶劑對照組、TCE處理組。建立BALB/c小鼠致敏模型，觀察記錄小鼠背部受試部位的皮膚致敏反應(yīng)情況。根據(jù)末次激發(fā)24h后小鼠的致敏結(jié)果以及取材時(shí)點(diǎn)的不同(分別于末次激發(fā)后24h、48h、72h和7d采血，無菌取皮膚組織和肝臟組織)，將TCE處理組分為致敏24h、48h、72h和7d組和未致敏24h、48h、72h和7d組。采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測各組血清中C3a-desArg、C5a-desArg和C5b-9水平。免疫組織化學(xué)法檢測肝臟組織中C3a、C5a和C5b-9的表達(dá)。直接免疫熒光法檢測肝臟組織中的C5b-9表達(dá)。RT-PCR法檢測肝臟組織中C3mRNA表達(dá)水平。 結(jié)果 1.致敏率在皮膚致敏反應(yīng)試驗(yàn)中，空白對照組、溶劑對照組均未見紅斑或水腫，TCE處理組63只小鼠中有23只背部皮膚出現(xiàn)不同程度的紅斑和水腫，其余40只為未致敏組，致敏率達(dá)36.5%，致小鼠致敏強(qiáng)度為中度 2.肝功能及臟器系數(shù)檢測結(jié)果肝功能檢測結(jié)果，空白對照組各指標(biāo)與溶劑對照組相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。與溶劑對照組24h、48h、72h、7d致敏組相比，AST明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；與相應(yīng)的未致敏組相比，24h、48h、72h、7d致敏組AST明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。ALT檢查結(jié)果發(fā)現(xiàn)，空白對照組與溶劑對照組相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；72h致敏組與溶劑對照組相比ALT明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；與相應(yīng)的未致敏組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。7d致敏組與溶劑對照組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。 空白對照組與溶劑對照組相比，小鼠肝臟臟器系數(shù)無明顯變化，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；然而，24h、48h、72h致敏組臟器系數(shù)顯著高于溶劑對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；同時(shí)點(diǎn)組間比較，致敏組的臟器系數(shù)均高于相應(yīng)未致敏組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；且在末次激發(fā)后72h達(dá)到最高，24h、48h、72h致敏組之間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。 3.血清C3a-desArg、C5a-desArg和C5b-9水平 3.1血清C3a-desArg水平：末次激發(fā)后，各組小鼠血清中C3a-desArg的水平，空白對照組與溶劑對照組相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。24h、48h、72h、7d致敏組顯著高于溶劑對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；同時(shí)點(diǎn)相比較，致敏組的C3a-desArg水平均高于相對應(yīng)未致敏組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；7d致敏組與溶劑對照組相比無明顯差異，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。且24h、48h、72h致敏組之間相比差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。3.2血清C5a-desArg水平：末次激發(fā)后，各組小鼠血清中C5a-desArg的水平，空白對照組與溶劑對照組相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。24h、48h、72h、7d致敏組顯著高于溶劑對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；同時(shí)點(diǎn)相比較，致敏組的C5a-desArg水平均高于未致敏組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；24h、48h、72h、7d致敏組之間的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。 3.3血清C5b-9水平：末次激發(fā)后，各組小鼠血清中C5b-9的水平，空白對照組與溶劑對照組相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。24h、48h、72h、7d致敏組顯著高于空白對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；與溶劑對照組相比，72h致敏組明顯升高，，同時(shí)點(diǎn)相比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；72h致敏組的C5b-9水平均高于未致敏組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；且24h、48h、72h、7d致敏組之間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。 4.激發(fā)后肝臟組織中C3a、C5a和C5b-9的表達(dá) 4.1C3a表達(dá)水平：空白對照組與溶劑對照組相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。致敏24h、48h、72h組較溶劑對照組相比評分顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；其中致敏72h組表達(dá)最高，致敏24h、48h、72h組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；然而致敏7d組C3a表達(dá)顯著降低，與溶劑對照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。 4.2C5a表達(dá)水平：空白對照組與溶劑對照組相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。致敏24h、48h、72h、7d組較溶劑對照組顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；其中致敏72h組表達(dá)最高，致敏24h、48h、72h組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；然而致敏7d組C5a表達(dá)顯著降低，與致敏72h組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。 4.3C5b-9表達(dá)水平：空白對照組與溶劑對照組相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。24h、48h、72h、7d致敏組較溶劑對照組顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；其中致敏72h組表達(dá)最高，致敏24h、48h、72h組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。同時(shí)點(diǎn)之間相比較發(fā)現(xiàn)，致敏24h、48h、72h組C5b-9表達(dá)水平分別高于未致敏24h、48h、72h組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。7d致敏組與其未致敏組相比無明顯變化，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。 5.免疫熒光法檢測激發(fā)后肝臟組織中C5b-9的表達(dá)我們對C5b-9在肝臟中的表達(dá)進(jìn)行了更深一步的免疫熒光檢測，24h、48h、72h致敏組可以看到明顯的表達(dá)，并且在72h致敏組表達(dá)最高。 6. RT-PCR法檢測C3mRNA表達(dá)情況應(yīng)用RT-PCR技術(shù)檢測各組小鼠肝臟組織中C3mRNA表達(dá)情況，灰度值分析顯示24h、48h致敏組與空白對照組、溶劑對照組、各自未致敏組相比C3mRNA表達(dá)明顯增強(qiáng)（P0.05），但是72h致敏組C3mRNA有明顯的降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05），7d致敏組表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P0.05）。 結(jié)論 1. TCE在一定劑量下能對小鼠致敏，致敏率為36.5%，TCE對BALB/c小鼠皮膚具有中度致敏作用。 2. TCE暴露可造成小鼠肝功能損傷和臟器系數(shù)的改變,72h組之前損傷程度隨時(shí)間進(jìn)行而加重。 3. TCE致敏小鼠體內(nèi)補(bǔ)體系統(tǒng)可能被激活，且補(bǔ)體激活及其產(chǎn)物在TCE接觸過敏性皮炎肝臟損傷發(fā)生過程中可能發(fā)揮重要的免疫調(diào)節(jié)作用。
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R114

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2516925