【摘要】：目的： 通過整體動(dòng)物腹腔注射硫酸鈹（BeSO44H2O），檢測(cè)硫酸鈹對(duì)小鼠肝臟總DNA甲基化，p53、c-jun、c-fos基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島甲基化狀態(tài)及其蛋白表達(dá)情況的影響，探討硫酸鈹致小鼠肝臟毒性的表觀遺傳修飾改變。 方法： 1．選取6周齡健康昆明（KM）雄性小鼠36只，按體重隨機(jī)分成3組：陰性對(duì)照組和2個(gè)硫酸鈹染毒組，每組12只，對(duì)照組按0.1ml/10g（體重）腹腔注射滅菌生理鹽水，劑量組腹腔注射1mg/kg和2mg/kg硫酸鈹滅菌生理鹽水溶液。隔天一次，染毒4周。染毒期間小對(duì)鼠生長(zhǎng)發(fā)育等一般情況進(jìn)行觀察。 2．采取頸椎脫臼法處死小鼠，分離完整肝臟，取部分肝組織進(jìn)行常規(guī)病理組織學(xué)檢查，，其余肝組織-80℃凍存用于DNA提取。 3．采用高效液相色譜法測(cè)定小鼠肝臟總DNA甲基化水平；采用甲基化特異性PCR法（MSP）測(cè)定小鼠肝臟p53、c-jun、c-fos基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島甲基化水平；并采用免疫組化法檢測(cè)p53、c-Jun、c-Fos蛋白在小鼠肝組織中的表達(dá)水平。 結(jié)果： 1．小鼠肝臟病理組織學(xué)檢查結(jié)果：對(duì)照組肝細(xì)胞以中央靜脈為中心向四周排列，呈索狀，細(xì)胞核位于細(xì)胞中央；硫酸鈹染毒組肝細(xì)胞索排列紊亂，細(xì)胞發(fā)生腫脹，大部分出現(xiàn)顆粒型變性、灶性壞死，出現(xiàn)核固縮，并伴有炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，肝竇輕度擴(kuò)張等病理改變。 2．小鼠肝臟總DNA甲基化水平：與對(duì)照組比較，硫酸鈹染毒組肝臟總DNA甲基化水平隨著染毒劑量的增加而升高（P＜0.05）；且高劑量組與低劑量組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。 3．對(duì)照組中抑癌基因p53，原癌基因c-fos、c-jun啟動(dòng)子區(qū)CpG島均未發(fā)生甲基化，而硫酸鈹染毒組小鼠肝臟組織中p53、c-fos、c-jun基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島都發(fā)生了甲基化。 4． p53、c-Jun、c-Fos蛋白免疫組化結(jié)果：與對(duì)照組相比，p53蛋白隨著硫酸鈹染毒劑量的增加陽性表達(dá)減少，而c-Fos、c-Jun蛋白隨著劑量的增加陽性表達(dá)增多�；叶葤呙杞Y(jié)果顯示：硫酸鈹染毒組小鼠肝臟組織中p53蛋白表達(dá)降低、c-Fos和c-Jun蛋白表達(dá)升高，與對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。 結(jié)論： 1.硫酸鈹可致小鼠肝臟組織細(xì)胞發(fā)生變性、壞死等病理改變。 2．硫酸鈹可致小鼠肝臟組織總DNA甲基化水平升高及p53、c-fos、c-jun基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島甲基化。 3．硫酸鈹致小鼠肝臟組織表觀遺傳改變可能是其肝毒性作用機(jī)制之一。
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R114

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2515665