【摘要】：目的建立檢測大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、李斯特菌和小腸耶爾森氏菌5種致病菌的多重直接PCR方法。方法根據(jù)大腸桿菌phoA、沙門氏菌invA、金黃色葡萄球菌nuc、李斯特菌hly、小腸耶爾森氏菌ail的基因序列,設計多重直接PCR引物,建立并優(yōu)化多重直接PCR反應條件,檢測引物的擴增特異性和靈敏性,并將所建立的方法應用于實際采集豬肉樣本的檢測,與金標培養(yǎng)法相比較,計算多重直接PCR檢測法的敏感性、準確性以及陽性預測值。結果所設計的多重直接PCR引物對5種菌都有特異擴增,最低檢出限量大腸桿菌為10CFU,金黃色葡萄球菌敏感性為100CFU,沙門氏菌、李斯特菌、小腸耶爾森氏菌敏感性可達1CFU。60份豬肉樣本中檢出大腸桿菌15份、沙門氏菌6份、金黃色葡萄球菌21份、李斯特菌20份、小腸耶爾森氏菌35份,陽性檢出率均高于金標培養(yǎng)法,總體檢測敏感性為100%,準確性為94%,陽性預測值為81.44%。結論多重直接PCR法實現(xiàn)了同時對各食源性致病菌敏感特異的檢測,并且省去了提取模板的步驟,將檢測時間縮短至3h左右,便于食品安全風險監(jiān)測中常見食源性致病菌的通量檢測。
[Abstract]:Objective to establish a multiplex direct PCR method for the detection of E. coli, Salmonella, Staphylococcus aureus, Listeria monocytogenes and Yelseng small intestine. Methods according to the gene sequence of E. coli phoA, Salmonella aureus invA, Staphylococcus aureus nuc, hly, ail, multiple direct PCR primers were designed, the multiplex direct PCR reaction conditions were established and optimized, and the amplification specificity and sensitivity of the primers were detected. The established method was applied to the detection of pork samples and compared with the gold standard culture method. The sensitivity, accuracy and positive predictive value of multiple direct PCR detection were calculated. Results the designed multiplex direct PCR primers were specifically amplified to all five kinds of bacteria. The minimum detection limit of Escherichia coli was 10 CFU, Staphylococcus aureus sensitivity was 100 CFU, salmonella, Listeria monocytogenes, Yelseng small intestine were as sensitive as 15 E. coli, 6 Salmonella, 21 Staphylococcus aureus, 20 Listeria monocytogenes and 35 Yelseng small intestine samples, among which 15 were Escherichia coli, 6 were Salmonella, 21 were Staphylococcus aureus, 20 were Listeria, 35 were Yelseng, and 15 were E. coli, 6 were Salmonella, 21 were Staphylococcus aureus, 21 were Staphylococcus aureus, 20 were Staphylococcus aureus, and 35 were Yelsonia. The positive detection rate was higher than that of gold standard culture method. The overall sensitivity, accuracy and positive predictive value were 100%, 94% and 81.44%, respectively. Conclusion multiple direct PCR method realizes the sensitive and specific detection of food-borne pathogenic bacteria at the same time, and saves the step of extracting template, and shortens the detection time to about 3 hours, which is convenient for the flux detection of common food-borne pathogenic bacteria in food safety risk monitoring.
【作者單位】： 中國動物衛(wèi)生與流行病學中心農業(yè)部畜禽產品質量安全風險評估實驗室(青島);吉林農業(yè)大學生命科學學院;
【基金】：農業(yè)部“國家農產品質量安全風險評估重大專項”(No.GJFP2016007)資助 留學人員科技活動項目擇優(yōu)資助~~
【分類號】：R155.5

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 萬志剛;湯慕瑾;呂敬章;羅志軍;洪小柳;馬淑棉;;多種食源性致病菌檢測的多重PCR方法的研究[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學進展;2012年11期

2 周春景;薛慧麗;侯小娜;;2011-2012年金州新區(qū)食源性致病菌檢測結果分析[J];疾病監(jiān)測與控制;2014年05期

3 李健;劉輝;時玉雯;胡光春;;市場銷售食品食源性致病菌污染情況分析[J];中國公共衛(wèi)生管理;2014年02期

4 蘇玲玉;韓義軍;楊勇;王金劍;唐文倉;劉麗瓊;;甘南州食品中食源性致病菌監(jiān)測結果分析[J];疾病預防控制通報;2014年04期

5 高雯潔,曹家穗,沈志英,王恒輝,燕勇;嘉興市市售食品中食源性致病菌污染監(jiān)測分析[J];中國衛(wèi)生檢驗雜志;2005年08期

6 周紅雨;黃家兵;汪艷平;司徒誼萍;孫鳳英;;宜昌市2002年~2005年市售食品中食源性致病菌污染調查[J];中國衛(wèi)生檢驗雜志;2006年08期

7 韋兵;劉永松;趙明;;食源性致病菌快速檢測方法研究進展[J];河北農業(yè)科學;2008年02期

8 徐文君;周瑋;徐春祥;;分子檢測技術在食源性致病菌檢測中的應用[J];畜牧與飼料科學;2010年09期

9 江艷華;姚琳;王鵬;翟毓秀;王聯(lián)珠;;噬菌體及其裂解酶在食源性致病菌檢測和控制中的應用[J];微生物學通報;2011年10期

10 鐘毓;鄭志剛;彭波;陳瑜;;2010-2012年博白縣食源性致病菌監(jiān)測結果分析[J];應用預防醫(yī)學;2014年01期

相關會議論文 前1條

1 田娟;譚英智;陳文君;鐘青萍;;多重PCR快速檢測三種食源性致病菌的研究[A];第五屆全國微生物資源學術暨國家微生物資源平臺運行服務研討會論文摘要集[C];2013年

相關重要報紙文章 前1條

1 ;食品測試技術有新突破[N];中華工商時報;2005年

相關博士學位論文 前2條

1 汪陳潔;乳酸對常見食源性致病菌的抗菌活性與作用機理[D];華中農業(yè)大學;2014年

2 王力均;基于免疫磁分離和核酸適配子技術快速檢測食源性致病菌的研究[D];南昌大學;2016年

相關碩士學位論文 前10條

1 周千渝;鮮食蔬菜中食源性致病菌的MALDI-TOF MS鑒定[D];中國農業(yè)科學院;2015年

2 封雨晴;朷西省獼猴桃產業(yè)鏈中三種食源性致病菌分布、檢測及溯源研究[D];西北農林科技大學;2015年

3 張昭寰;南美白對蝦中常見食源性致病菌快速檢測技術及分子預測微生物模型的構建[D];上海海洋大學;2015年

4 劉偉;便攜式食源性致病菌檢測系統(tǒng)的研究與設計[D];重慶大學;2015年

5 潘文秀;近紅外激光在食源性致病菌快速檢測中的應用基礎研究[D];江蘇大學;2016年

6 周丹;栓皮櫟提取物對食源性致病菌的抑菌作用及其機理初步研究[D];西北農林科技大學;2016年

7 莫春生;食源性致病菌Tem-PCR結合DHPLC高通量檢測技術的研究[D];哈爾濱理工大學;2016年

8 陳露露;食源性致病菌標準菌株保藏管法保藏條件探究及優(yōu)化[D];上海交通大學;2015年

9 陳佳;食品中致病菌IMBs-qPCR法快速檢測技術的研究[D];天津大學;2015年

10 于玲;2012～2015年吉林市部分市售食品化學污染物與食源性致病菌監(jiān)測數(shù)據(jù)研究[D];吉林大學;2016年

，

本文編號：2508737