【摘要】：目的硒是人體和動(dòng)物的必需微量元素。它主要以硒蛋白的形式在機(jī)體中發(fā)揮各種各樣的的生理功能,例如增強(qiáng)免疫及抗氧化功能等。已知人的前1000天的營養(yǎng)至關(guān)重要,嬰兒階段的缺硒會(huì)導(dǎo)致生長遲緩和某些其它疾病,還可能對成年后的硒營養(yǎng)狀態(tài)存在潛在風(fēng)險(xiǎn),因此嬰兒的硒營養(yǎng)狀態(tài)尤為關(guān)鍵。母乳作為嬰兒的最佳食物,無疑是生產(chǎn)嬰兒配方奶的最好模板。嬰兒配方奶基本要求就是還原母乳的營養(yǎng)素含量及組成結(jié)構(gòu)。因此,適硒地區(qū)乳母所泌乳汁總硒含量和主要硒形態(tài)及其比例,能為嬰兒配方奶中硒補(bǔ)充劑的最適宜劑量及種類選擇提供重要科學(xué)依據(jù)。本研究擬在三個(gè)不同硒水平地區(qū)(低硒、適硒和高硒)來源的乳母中,開展膳食調(diào)查,并對各地區(qū)乳母的全血硒總量和及乳汁中硒總量和硒形態(tài)進(jìn)行測定與分析。目的在于:1)比較通過膳食調(diào)查計(jì)算得到的膳食硒攝入量與通過乳母全血硒水平反推乳母硒的膳食攝入總量有無差異;2)分析三個(gè)硒水平地區(qū)(低硒、適硒和高硒)乳母膳食硒攝入、乳汁硒含量和血硒水平的差別,進(jìn)而獲得適硒地區(qū)乳母乳汁硒含量,用于計(jì)算嬰兒配方奶中適宜硒含量;3)建立乳汁中硒形態(tài)的定性和定量分析方法;4)分析不同硒水平地區(qū)(低硒、適硒和高硒)之間,乳汁中硒形態(tài)是否存在差異性,確定適硒地區(qū)乳母乳汁中主要硒形態(tài)及其比例,為配方奶粉硒補(bǔ)充劑的種類選擇和添加劑量提供科學(xué)依據(jù);5)探索乳母硒營養(yǎng)水平對其乳母乳汁中硒的含量及和形態(tài)的影響。方法本研究采用分層隨機(jī)抽樣方法在四川涼山州(低硒地區(qū))、北京市西城區(qū)(適硒地區(qū))、湖北省恩施市(高硒地區(qū))三個(gè)地區(qū)抽取乳母各20名,開展哺乳期膳食調(diào)查。獲得乳母膳食中包括硒在內(nèi)的營養(yǎng)素?cái)z入量,采用方差分析比較三個(gè)地區(qū)之間乳母膳食硒攝入量。采集三個(gè)不同硒水平地區(qū)(低硒、適硒和高硒)乳母的血液及乳汁樣品。采用電感耦合等離子體質(zhì)譜法定性定量測定全血硒、乳汁總硒量,并通過乳母全血硒水平反推乳母硒的膳食攝入總量,用方差分析方法比較三個(gè)不同硒水平地區(qū)乳母通過膳食調(diào)查計(jì)算得到的膳食硒攝入量與通過乳母全血硒水平反推乳母硒的膳食攝入總量是否存在差異性。獲得適硒地區(qū)乳母群體乳汁硒濃度均值。建立超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法定性定量分析牛乳和人乳中游離和蛋白結(jié)合形態(tài)硒代蛋氨酸(SeMet)、硒代胱氨酸(SeCys2)的方法。建立烷基化-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法定性分析牛乳和人乳中硒代半胱氨酸(SeCys)和硒代胱胺(SeCysA)的方法。在Acquity UPLC Amide色譜柱上以流動(dòng)相0.1%甲酸水溶液和0.1%甲酸乙腈溶液梯度洗脫,在電噴霧-正離子電離源上以多反應(yīng)監(jiān)測模式分析。游離硒形態(tài)分析的前處理方法采用乙腈沉淀法,游離和蛋白結(jié)合硒形態(tài)總量分析的前處理方法采用酶水解法。用高效液相色譜-電感耦合等離子體質(zhì)譜法測定酶解后牛乳和人乳中無機(jī)硒、SeMet、SeCys2和甲基硒代半胱氨酸(MSC)的方法。進(jìn)而對收集的三個(gè)不同硒水平地區(qū)乳母乳汁樣品進(jìn)行分析,用方差分析方法比較來自于不同地區(qū)乳母乳汁主要硒形態(tài)及其含量和比例的差別,進(jìn)而分析乳母膳食硒攝入量和乳汁中硒形態(tài)含量其含量的關(guān)系。結(jié)果涼山州、北京和恩施基于膳食調(diào)查的硒攝入量X±SD分別為41.57±21.19 ng/d、51.06±22.60 ng/d 和 614.84 ± 177.80 ng/d(P0.05);基于全血硒推算的乳母膳食硒攝入X ± SD分別為 31.18 ± 13.28 ng/d、41.58 ± 10.48 ng/d 和 152.01±121.33ng/d(P0.05);三個(gè)地區(qū)的兩種方法推算的膳食硒攝入量均存在差異(P0.05)。兩種方法計(jì)算結(jié)果均提示四川涼山自治州和北京西城乳母膳食硒攝入量低于2013版乳母RNI值和UI值,湖北恩施基于膳食調(diào)查的硒攝入量高于UI值,而基于全血硒推算結(jié)果顯示湖北恩施乳母膳食硒攝入量明顯高于其他兩個(gè)地區(qū),個(gè)別樣本高于UI值。三個(gè)不同硒水平(低硒、適硒和高硒)地區(qū)乳母乳汁總硒含量X± SD分別為11.73 ± 9.33 ng/mL、25.31 ± 10.22 ng/mL 和 44.28 ± 26.92 ng/mL,三個(gè)地區(qū)間存在差異(P0.05);多因素分析顯示乳母膳食硒攝入量對其乳汁總硒含量存在顯著影響(P0.0001,調(diào)整R2 = 0.5924);適硒地區(qū)乳母所泌乳汁中硒含量平均值為25.31 μg/L,推算我國嬰兒配方奶中最適宜的硒含量為3.616～4.218μg/100 kcal。成功建立超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法定性定量分析牛乳和人乳中游離和蛋白結(jié)合形態(tài)SeMet和SeCys2的方法;進(jìn)而探索并成功建立烷基化處理-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法定性分析牛乳和人乳中SeCys和SeCysA的方法,因目前沒有烷基化的SeCys和SeCysA的標(biāo)準(zhǔn)品,不能實(shí)現(xiàn)定量分析;對采集新鮮牛乳和三個(gè)不同地區(qū)的人乳硒形態(tài)進(jìn)行分析,結(jié)果如下:1)乳汁硒主要存在形式為有機(jī)硒,可定量測定的穩(wěn)定硒形態(tài)為SeMet和SeCys2(可能為游離或酶解后產(chǎn)生的SeCys被氧化為SeCys2),無機(jī)硒不存在或含量極低;2)涼山州低硒地區(qū)酶解后人乳中總SeMet和SeCys2濃度X± SD分別為3.98 ± 1.16 ng Se/mL和3.56 ±1.96 ng Se/mL,其中游離 SeMet 和 SeCys2 分別占 10.41%± 7.85%和 0.84%±1.16%;北京適硒地區(qū)酶解后人乳中SeMet和SeCys2濃度X± SD分別為2.51 ±1.69 ng Se/mL 和 21.41 ±2.02ng Se/mL,其中游離 SeMet 和 SeCys2 分別占 25.86%±20.76%和1.47%%±0.49%;恩施高硒地區(qū)酶解后但人乳中SeMet和SeCys2濃度X± SD分別為 15.34 ± 10.61 ng Se/mL 和 39.50 ± 16.77 ng Se/mL,其中游離SeMet 和 SeCys2 分別 26.45%± 48.11%和 1.48%± 1.39%;3)人乳中各種有機(jī)硒含量均高于牛乳;4)乳汁中游離硒僅占總硒的2%～3%,主要以蛋白結(jié)合形式存在;5)適硒地區(qū)乳母乳汁中所含的SeMet和SeCys2分別約2.51 ng Se/mL和21.41 ng Se/mL,占總硒的比例分別約為9.94%和87.79%;6)多因素分析顯示乳母膳食硒攝入量對其乳汁中SeMet和SeCys2含量均存在顯著影響,乳汁中SeMet和SeCys2含量與乳母膳食硒攝入量呈線性正相關(guān)。結(jié)論1)乳母硒攝入量、全血硒含量及乳汁硒含量存在地域性差異;2)適硒地區(qū)乳母所泌乳汁中硒含量平均值為25.31 μg/L,推算我國嬰兒配方奶中最適宜的硒含量為3.616-4.218 μg/100 kcal,但配方奶中適宜硒含量的制定需要更大規(guī)模的人乳硒含量數(shù)據(jù);3)SeCys和SeCysA都極不穩(wěn)定,容易被氧化,需要采用烷基化處理后才能進(jìn)一步測定;4)人乳中硒主要以有機(jī)硒形態(tài)存在,無機(jī)硒含量極低或不存在,且有機(jī)硒主要以蛋白結(jié)合形式存在;5)適硒地區(qū)乳母乳汁中天然或酶解后可穩(wěn)定存在的主要硒形態(tài)為SeMet和SeCys2,含量分別約2.51 ng Se/mL和21.41 ng Se/mL,占總硒的比例分別約為9.94%和87.79%,因而提示現(xiàn)行的配方奶硒補(bǔ)充劑添加標(biāo)準(zhǔn)允許添加的硒形態(tài)(Na2SeO3、Na2SeO4)與人乳中實(shí)測硒形態(tài)不一致,不是最適宜的硒補(bǔ)充劑種類,將有機(jī)形態(tài)硒(如SeMet和SeCys2)作為配方奶優(yōu)先添加的硒形態(tài)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：中國疾病預(yù)防控制中心
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R153.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2448420