【摘要】：目的本研究通過建立氟染毒大鼠模型,探討氟暴露致生殖損傷的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激效應(yīng),評(píng)估氟對(duì)生殖系統(tǒng)的影響及氟化鈉和N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)的聯(lián)合作用對(duì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的效果,為氟致雄性生殖損傷的毒作用機(jī)制及防治措施提供新的思路。方法1.動(dòng)物分組和處理60只4周齡SPF級(jí)的SD雄性大鼠,體重為100~140g,隨機(jī)分為4組,分別為生理鹽水對(duì)照組、NAC組、NaF組和NAC+NaF組,每組15只。對(duì)應(yīng)各組給予的溶液及劑量為:0.9%氯化鈉溶液、150mg/kg/d NAC溶液、25mg/kg/d NaF溶液、先灌胃150mg/kg/d NAC溶液,半小時(shí)后再灌胃25mg/kg/d NaF溶液,均以經(jīng)口灌胃方式染毒,每周連續(xù)灌胃6天,停灌1天,時(shí)間為7周。2.生殖損傷效應(yīng)相關(guān)指標(biāo)的檢測(cè)稱量睪丸和附睪重量,計(jì)算其對(duì)應(yīng)的臟器系數(shù),并用氟離子選擇電極測(cè)定睪丸組織氟含量,ELISA法檢測(cè)血清睪酮、卵泡刺激素和促黃體生成素含量,TUNEL法檢測(cè)大鼠睪丸細(xì)胞凋亡情況。3.內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)指標(biāo)的檢測(cè)q-PCR法測(cè)定各組大鼠睪丸中IRE1及下游因子XBP1和JNK的mRNA表達(dá)水平。Western Blot法檢測(cè)各組大鼠睪丸中GRP78、IRE1、p-IRE1、XBP1u、XBP1s、JNK和p-JNK蛋白表達(dá)水平。結(jié)果1.雄性生殖功能效應(yīng)指標(biāo)結(jié)果與對(duì)照組相比,NaF組和NAC+NaF組睪丸氟含量都明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),NaF組大鼠體重、睪丸和附睪濕重均下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),但各組睪丸和附睪臟器系數(shù)間無差異;ELISA檢測(cè)血清生殖激素水平,結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,NaF組和NAC+NaF組血清睪酮含量降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),NaF組和NAC+NaF組血清卵泡刺激素和促黃體生成素含量升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),NAC+NaF組與NaF組相比,血清卵泡刺激素和促黃體生成素含量降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2×2析因方差分析結(jié)果顯示,NaF和NAC的交互作用對(duì)FSH和LH含量的影響,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2.細(xì)胞凋亡分析結(jié)果TUNEL法檢測(cè)細(xì)胞凋亡結(jié)果發(fā)現(xiàn),與對(duì)照組相比,NaF組和NAC+NaF組睪丸組織細(xì)胞凋亡指數(shù)升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01),與NaF組相比,NAC+NaF組細(xì)胞凋亡指數(shù)下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。3.內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)因子基因蛋白表達(dá)結(jié)果q-PCR檢測(cè)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)因子mRNA的表達(dá)水平,與對(duì)照組相比,氟暴露明顯上調(diào)了大鼠睪丸IRE1、XBP1和JNK的mRNA表達(dá)量,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01),與NaF組相比,NAC聯(lián)合NaF作用處理降低IRE1、XBP1和JNK的mRNA表達(dá)量,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。析因方差分析結(jié)果顯示,NaF和NAC的交互作用對(duì)IRE1、XBP1和JNK的mRNA表達(dá)量的影響,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。Western Blot檢測(cè)相關(guān)蛋白表達(dá)水平結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,NaF組的GRP78、XBP1s和p-JNK蛋白表達(dá)均明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01),另外,NaF組及NAC+NaF組的p-IRE1蛋白表達(dá)均明顯上調(diào),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。與NaF組相比,NAC聯(lián)合作用后明顯抑制了GRP78、XBP1s和p-JNK蛋白表達(dá)水平的上調(diào),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。析因方差分析結(jié)果顯示,NAC和NaF的交互作用對(duì)GRP78、p-IRE1、XBP1s和p-JNK蛋白表達(dá)的影響均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論1、NaF可誘導(dǎo)雄性大鼠生殖系統(tǒng)發(fā)生損傷,可能是激活了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激IRE1-XBP1通路及其介導(dǎo)的JNK凋亡信號(hào)通路。2、NAC可能拮抗內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng),同時(shí)抑制大鼠生殖細(xì)胞發(fā)生凋亡從而保護(hù)雄性生殖系統(tǒng)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R114

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本文編號(hào)：2385739