【摘要】：目的：主要探討JWA與TopoⅡα之間的相互調(diào)控作用；JWA與TopoⅡα之間的相互調(diào)控作用對(duì)JWA的氧化損傷修復(fù)能力的影響及相關(guān)信號(hào)分子Akt、p-Akt、 NF-κB的影響。方法：本研究采用細(xì)胞轉(zhuǎn)染JWA與TopoⅡα質(zhì)�；騄WA與TopoⅡα siRNA的方法使JWA與TopoⅡα高表達(dá)或低表達(dá)；以過(guò)氧化氫處理細(xì)胞形成氧化損傷模型；通過(guò)蛋白免疫印跡(Western blot)、逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)、免疫組織化學(xué)及細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)轉(zhuǎn)染效果、轉(zhuǎn)染后JWA與TopoⅡα及Akt、 p-Akt、NF-κB等蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果：(1)在人宮頸癌HeLa細(xì)胞中,JWA與TopoⅡα存在相互調(diào)控。轉(zhuǎn)染TopoⅡα質(zhì)�；騎opoⅡα siRNA, TopoⅡα影響JWA蛋白及mRNA水平,即TopoⅡα負(fù)向調(diào)控JWA的表達(dá)；在人宮頸癌HeLa細(xì)胞中,轉(zhuǎn)染JWA質(zhì)�；騄WA siRNA,JWA影響TopoⅡα蛋白及mRNA水平,即負(fù)向調(diào)控TopoⅡα的表達(dá)；(2)在人胃癌BGC823細(xì)胞、卵巢癌A2780細(xì)胞和肺癌NCI-H460細(xì)胞中,JWA與TopoⅡα存在負(fù)向調(diào)控。轉(zhuǎn)染TopoⅡα質(zhì)粒,TopoⅡα影響JWA蛋白水平,即負(fù)向調(diào)控JWA的表達(dá),且存在劑量依賴性；轉(zhuǎn)染JWA質(zhì)粒,JWA影響TopoⅡα蛋白水平,即負(fù)向調(diào)控TopoⅡα的表達(dá),且存在劑量依賴性；(3)在JWA敲減型小鼠與JWA野生型小鼠肺組織中,JWA敲減型小鼠TopoⅡα蛋白表達(dá)明顯高于JWA野生型小鼠；人宮頸癌組織中TopoⅡα表達(dá)高于癌旁組織,JWA表達(dá)低于癌旁組織；(4)在人宮頸癌HeLa細(xì)胞中,轉(zhuǎn)染JWA與TopoⅡα質(zhì)粒24h后,免疫共沉淀及細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)顯示,JWA蛋白與TopoⅡα蛋白雖然存在相互負(fù)調(diào)控作用,但是可能不存在直接交互作用,也不影響兩者的細(xì)胞定位；(5)在人宮頸癌HeLa細(xì)胞中,過(guò)氧化氫誘導(dǎo)p-Akt、NF-κB增加,JWA誘導(dǎo)p-Akt、NF-κB降低。在共轉(zhuǎn)染JWA與TopoⅡα質(zhì)粒后,JWA誘導(dǎo)p-Akt、NF-κB降低的作用受到影響；但過(guò)氧化氫及JWA對(duì)Akt的影響不明顯。結(jié)論：JWA與TopoⅡα在多種腫瘤細(xì)胞中存在相互負(fù)調(diào)控的現(xiàn)象；JWA與TopoⅡα在多種腫瘤細(xì)胞中的相互調(diào)控不是通過(guò)直接交互作用,不影響相互細(xì)胞定位,可能是通過(guò)其他途徑；TopoⅡα與JWA的相互調(diào)控影響了JWA下調(diào)由H2O2引起的p-Akt及NF-κB增加的功能,即TopoⅡα與JWA的互相負(fù)調(diào)控的作用可能影響了JWA參與氧化損傷修復(fù)的能力。目的：探討全反式維甲酸(ATRA)對(duì)腫瘤標(biāo)志物DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱα(TopoⅡα)的下調(diào)作用、對(duì)維甲酸受體的上調(diào)作用及卵巢癌組織TopoⅡα含量與血清ATRA含量的關(guān)系。方法： 以0-10μM的不同濃度ATRA處理人卵巢癌細(xì)胞A2780及SKOV3,24h后,用Western blot檢測(cè)TopoⅡα蛋白的表達(dá)情況；以0-2μM的不同濃度ATRA處理人宮頸癌細(xì)胞HeLa,24h后,用Western blot檢測(cè)維甲酸受體(RARα、 RARβ、RARγ及RXRa)蛋白的表達(dá)情況；以免疫組織化學(xué)法檢測(cè)卵巢癌組織中Topo Ⅱα的水平；以高效液相色譜法測(cè)定卵巢癌患者血清ATRA含量。結(jié)果：人卵巢癌細(xì)胞A2780及SKOV3中ATRA下調(diào)TopoⅡα的蛋白表達(dá)；人宮頸癌細(xì)胞HeLa中ATRA上調(diào)維甲酸受體(RARα、RARβ、RARγ及RXRa)的蛋白表達(dá)；卵巢癌組織TopoⅡα含量與血清ATRA含量具有負(fù)相關(guān)的關(guān)系(r=-0.63,P0.05)。結(jié)論：ATRA能下調(diào)人卵巢癌細(xì)胞A2780及SKOV3中TopoⅡα蛋白的表達(dá),ATRA能上調(diào)人宮頸癌細(xì)胞HeLa中維甲酸受體(RARα、RARβ、RARγ及RXRα)蛋白的表達(dá),卵巢癌的致癌作用可能與血清ATRA含量下降有關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R151

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本文編號(hào)：2372283