【摘要】：目的：氯化鎘(CdCl2)或雙酚A(BPA)均普遍存在于我們的日常生活中,我們可以很容易的通過經(jīng)口、呼吸等途徑共同暴露于CdCl2與BPA。以往研究發(fā)現(xiàn)低劑量或無毒劑量CdCl2濃度可能會增強其他DNA毒物比如Y-射線、苯并芘等對DNA的損傷作用。然而,目前尚未見關于CdCl,與BPA復合暴露的毒性研究。本研究以無毒劑量CdCl2濃度預處理NIH3T3細胞,再施以BPA處理,探討預暴露鎘對NIH3T3細胞對BPA誘導的DNA氧化損傷的敏感性影響及其可能機制。方法：取對數(shù)期生長的NIH3T3細胞鋪板,貼壁后,處或不處以5或10 μ M CdCl2 24h,然后再處或不處理2、10、50μM劑量的BPA 24h。共有4組：(1)正常對照組；(2)CdCl2處理組：單獨5或10 μM CdCl,組；(3)BPA處理組：單獨2、10或50μM劑量的BPA處理組；(4)CdCl2預處理+BPA組：以5或10μMCdCl2預處理24h,然后再處以2、10、50 p M劑量的BPA 24h;BPA處理24h后,分別用細胞計數(shù)試劑盒試劑盒(CCK-8)檢測細胞活力；LDH細胞毒性檢測試劑盒檢測細胞LDH的釋放；碧云天活性氧檢測試劑盒測定細胞ROS含量；堿性彗星實驗檢測NIH3T3細胞DNA損傷,免疫熒光及Western blot檢測γH2AX的表達；流式細胞術檢測細胞周期的變化；TUNEL熒光染色及Western blot檢測細胞的凋亡及凋亡分子PARP的表達變化。結(jié)果：①與正常對照組相比,單獨CdCl2處理不引起細胞活力、LDH釋放、ROS含量、彗星參數(shù)(Tail DNA%,TL、TM、OTM)、γH2AX的表達、細胞周期、TUNEL陽性細胞數(shù)及凋亡分子PARP表達水平的改變(P0.05)。②與正常對照組相比,2μM或10μM BPA單獨處理不引起細胞活力、LDH釋放、ROS含量、彗星參數(shù)(Tail DNA%、TL、TM、OTM)、 γH2AX的表達、細胞周期、TUNEL日性細胞及凋亡分子PARP表達水平的改變(P0.05)；然而,50 u M BPA單獨處理與對照組相比,則引起了細胞活力下降、LDH釋放增加、ROS產(chǎn)生增多、彗星參數(shù)Tail DNA%、TL、TM、OTM)顯著增加、γH2AX的表達增加、G2期阻滯、TUNEL陽性細胞及PARP表達增加(P0.05)。③CdCl2預處理增加了NIH3T3細胞對BPA誘導的DNA氧化損傷的敏感性。CdCl2預處理+BPA組與單獨BPA處理組相比較,5μM或10 μMCdCl2預處理均加重了10 p M或50 μM BPA引起的細胞的活力降低、LDH釋放升高、ROS產(chǎn)生增多、彗星參數(shù)(Tail DNA%、TL、TM、OTM)增加、γH2AX的表達增加、G2期阻滯、TUNEL陽性細胞數(shù)及PARP表達升高(P0.05)；而值得注意的是,與單獨2 u M BPA處理組相比,5μMCdCl2預處理尚不足以引起細胞對2 μM BPA致使的DNA損傷的敏感性,上述指標均無顯著學差異(P0.05),而10 μM CdCl2預處理則能夠增敏細胞對2 μM BPA誘導的細胞基因毒性(P0.05)。結(jié)論：無毒劑量5μM或10 μM CdCl2濃度預處理可以增敏NIH3T3細胞對BPA的毒性反應,加重BPA對細胞的DNA損傷,甚至可以讓本來無毒的BPA劑量發(fā)揮對細胞的基因毒性。CdCl2增敏細胞對BPA誘發(fā)的DNA損傷可能與細胞內(nèi)ROS產(chǎn)生的增加有關。結(jié)果提示,在日常生活中,暴露于鎘可能會增加機體對外界環(huán)境中廣泛存在的毒物如BPA的敏感性,從而進一步加重毒物對機體的損害。此項研究應該引起人們更多關于鎘和雙酚A暴露危險性的認識,為相關部門尋找更好的防護措施保護人們身體健康或治療相關的中毒提供理論證據(jù)支持。然而,鎘在無毒劑量濃度可以增敏細胞對BPA引起的基因毒性反應的機制尚需進一步研究。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R114

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本文編號：2261624