發(fā)布時(shí)間：2018-10-10 11:39

【摘要】：目的：氯化鎘(CdCl2)或雙酚A(BPA)均普遍存在于我們的日常生活中,我們可以很容易的通過經(jīng)口、呼吸等途徑共同暴露于CdCl2與BPA。以往研究發(fā)現(xiàn)低劑量或無毒劑量CdCl2濃度可能會(huì)增強(qiáng)其他DNA毒物比如Y-射線、苯并芘等對(duì)DNA的損傷作用。然而,目前尚未見關(guān)于CdCl,與BPA復(fù)合暴露的毒性研究。本研究以無毒劑量CdCl2濃度預(yù)處理NIH3T3細(xì)胞,再施以BPA處理,探討預(yù)暴露鎘對(duì)NIH3T3細(xì)胞對(duì)BPA誘導(dǎo)的DNA氧化損傷的敏感性影響及其可能機(jī)制。方法：取對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)的NIH3T3細(xì)胞鋪板,貼壁后,處或不處以5或10 μ M CdCl2 24h,然后再處或不處理2、10、50μM劑量的BPA 24h。共有4組：(1)正常對(duì)照組；(2)CdCl2處理組：?jiǎn)为?dú)5或10 μM CdCl,組；(3)BPA處理組：?jiǎn)为?dú)2、10或50μM劑量的BPA處理組；(4)CdCl2預(yù)處理+BPA組：以5或10μMCdCl2預(yù)處理24h,然后再處以2、10、50 p M劑量的BPA 24h;BPA處理24h后,分別用細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒試劑盒(CCK-8)檢測(cè)細(xì)胞活力；LDH細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒檢測(cè)細(xì)胞LDH的釋放；碧云天活性氧檢測(cè)試劑盒測(cè)定細(xì)胞ROS含量；堿性彗星實(shí)驗(yàn)檢測(cè)NIH3T3細(xì)胞DNA損傷,免疫熒光及Western blot檢測(cè)γH2AX的表達(dá)；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期的變化；TUNEL熒光染色及Western blot檢測(cè)細(xì)胞的凋亡及凋亡分子PARP的表達(dá)變化。結(jié)果：①與正常對(duì)照組相比,單獨(dú)CdCl2處理不引起細(xì)胞活力、LDH釋放、ROS含量、彗星參數(shù)(Tail DNA%,TL、TM、OTM)、γH2AX的表達(dá)、細(xì)胞周期、TUNEL陽性細(xì)胞數(shù)及凋亡分子PARP表達(dá)水平的改變(P0.05)。②與正常對(duì)照組相比,2μM或10μM BPA單獨(dú)處理不引起細(xì)胞活力、LDH釋放、ROS含量、彗星參數(shù)(Tail DNA%、TL、TM、OTM)、 γH2AX的表達(dá)、細(xì)胞周期、TUNEL日性細(xì)胞及凋亡分子PARP表達(dá)水平的改變(P0.05)；然而,50 u M BPA單獨(dú)處理與對(duì)照組相比,則引起了細(xì)胞活力下降、LDH釋放增加、ROS產(chǎn)生增多、彗星參數(shù)Tail DNA%、TL、TM、OTM)顯著增加、γH2AX的表達(dá)增加、G2期阻滯、TUNEL陽性細(xì)胞及PARP表達(dá)增加(P0.05)。③CdCl2預(yù)處理增加了NIH3T3細(xì)胞對(duì)BPA誘導(dǎo)的DNA氧化損傷的敏感性。CdCl2預(yù)處理+BPA組與單獨(dú)BPA處理組相比較,5μM或10 μMCdCl2預(yù)處理均加重了10 p M或50 μM BPA引起的細(xì)胞的活力降低、LDH釋放升高、ROS產(chǎn)生增多、彗星參數(shù)(Tail DNA%、TL、TM、OTM)增加、γH2AX的表達(dá)增加、G2期阻滯、TUNEL陽性細(xì)胞數(shù)及PARP表達(dá)升高(P0.05)；而值得注意的是,與單獨(dú)2 u M BPA處理組相比,5μMCdCl2預(yù)處理尚不足以引起細(xì)胞對(duì)2 μM BPA致使的DNA損傷的敏感性,上述指標(biāo)均無顯著學(xué)差異(P0.05),而10 μM CdCl2預(yù)處理則能夠增敏細(xì)胞對(duì)2 μM BPA誘導(dǎo)的細(xì)胞基因毒性(P0.05)。結(jié)論：無毒劑量5μM或10 μM CdCl2濃度預(yù)處理可以增敏NIH3T3細(xì)胞對(duì)BPA的毒性反應(yīng),加重BPA對(duì)細(xì)胞的DNA損傷,甚至可以讓本來無毒的BPA劑量發(fā)揮對(duì)細(xì)胞的基因毒性。CdCl2增敏細(xì)胞對(duì)BPA誘發(fā)的DNA損傷可能與細(xì)胞內(nèi)ROS產(chǎn)生的增加有關(guān)。結(jié)果提示,在日常生活中,暴露于鎘可能會(huì)增加機(jī)體對(duì)外界環(huán)境中廣泛存在的毒物如BPA的敏感性,從而進(jìn)一步加重毒物對(duì)機(jī)體的損害。此項(xiàng)研究應(yīng)該引起人們更多關(guān)于鎘和雙酚A暴露危險(xiǎn)性的認(rèn)識(shí),為相關(guān)部門尋找更好的防護(hù)措施保護(hù)人們身體健康或治療相關(guān)的中毒提供理論證據(jù)支持。然而,鎘在無毒劑量濃度可以增敏細(xì)胞對(duì)BPA引起的基因毒性反應(yīng)的機(jī)制尚需進(jìn)一步研究。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R114

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4 王U，

本文編號(hào)：2261624